Modulación de la síntesis y degradación de hialuronano en el tratamiento de enfermedad.

Compuesto aislado que reduce el nivel de actividad hialuronano sintasa (HAS)1,

siendo dicho compuestoun anticuerpo específico para una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NO: 25 ó 26.

Modulación de la síntesis y degradación de hialuronano en el tratamiento de enfermedad

Antecedentes de la invención Campo de la invención La presente invención se refiere en general a la modulación de la síntesis y degradación de hialuronano (HA) . Más particularmente, se dan a conocer composiciones y métodos para modular la expresión de material genético que codifica para HA sintasa (HAS) y otras enzimas o receptores implicados principalmente en el metabolismo del hialuronano o para modular las proteínas que sintetizan o degradan el hialuronano incluyendo la función o actividad de HAS. Las composiciones incluyen o comprenden moléculas de ácido nucleico y moléculas de interacción tales como anticuerpos e inhibidores de molécula pequeña y análogos de sustrato de HAS. La presente invención contempla además la modulación de la proliferación celular, útil en la profilaxis y/o el tratamiento de trastornos inflamatorios incluyendo estados hiperproliferativos, tales como pero sin limitarse a, cáncer y psoriasis.

Descripción de la técnica anterior

Los detalles bibliográficos de las publicaciones a las que se hace referencia en esta memoria descriptiva se recogen también al final de la descripción.

La referencia a cualquier técnica anterior en esta memoria descriptiva no se considera, y no debe considerarse como, un reconocimiento o cualquier forma de sugerencia de que esta técnica anterior forma parte del conocimiento general en cualquier país.

Los estados inflamatorios representan un factor causante principal en numerosos trastornos médicamente significativos. La inflamación puede resultar de una gama de estímulos de fuera o de dentro del cuerpo. Sin embargo, estos estímulos desencadenan células y procesos fisiológicos dentro del entorno de un huésped. Aunque se ha emprendido una cantidad sustancial de investigación para investigar la naturaleza celular y de citocinas de los procesos inflamatorios, se sabe menos sobre otros posibles participantes en la inflamación.

Una clase de participantes de este tipo son proteínas transmembrana. Las proteínas transmembrana están implicadas en una gama de actividades de señalización y pueden tener actividad anzímica.

El metabolismo del hialuronano (HA) es un equilibrio intrincado entre la tasa de síntesis y degradación de HA en el que, dependiendo del papel fisiológico desempeñado por el HA, la síntesis y degradación simultáneas se controlan cuidadosamente. El hialuronano se sintetiza por una familia proteínas transmembrana distintas aunque relacionadas denominadas isoformas de hialuronano sintasa (HAS) HAS1, 2 y 3, que pueden distinguirse unas de otras con respecto a su expresión temporal y diferencial durante la embriogénesis del ratón y en tejidos maduros, respectivamente, y también en el peso molecular del HA producido. El HA de polisacáridos de la matriz extracelular

o su forma ácida, ácido hialurónico, es un polímero de alto peso molecular, lineal compuesto por unidades de repetición de disacárido de (β1-3) D-glucuronato- (β1-4) N-acetil-D-glucosamina (Weissman & Meyer, J. Am. Chem. Soc. 76: 1753, 1954) . El hialuronano se degrada por una familia de enzimas conocidas como hialuronidasas que se denominan actualmente HYAL1, HYAL2, HYAL3 y PH-20, que como las enzimas que producen HA también pueden distinguirse unas de otras con respecto a su expresión temporal y diferencial durante diferentes procesos fisiológicos y estados patológicos.

En el trabajo que condujo a la presente invención, se observó que HAS y HYAL se expresan de manera diferencial en diversos estados fisiológicos. En particular, se regulaban por incremento durante estados patológicos tales como un estado inflamatorio o cáncer. HAS, y en particular, HAS1, 2 y/o 3 y HYAL1, 2 y/o 3 representan dianas farmacológicas útiles.

Sumario de la invención A lo largo de toda la memoria descriptiva, a menos que el contexto requiera lo contrario, la palabra “comprenden”, o variaciones tales como “comprende” o “que comprende”, se entenderá que implican la inclusión de un elemento o número entero establecido o grupo de elementos o números enteros pero no la exclusión de cualquier otro elemento o número entero o grupo de elementos o números enteros.

Se hace referencia a secuencias de nucleótidos y aminoácidos mediante un número de identificador de secuencia (SEQ ID NO:) . Los SEQ ID NO: corresponden numéricamente a los identificadores de secuencia <400>1 (SEQ ID NO: 1) , <400>2 (SEQ ID NO: 2) , etc. Se proporciona un resumen de los números de identificador de secuencia en la tabla 1. Se proporciona una lista de secuencias tras las reivindicaciones.

La presente invención se refiere a compuestos que son anticuerpos o formas recombinantes o quiméricas o derivadas de los mismos que antagonizan la función o actividad de HAS tal como se describe en las reivindicaciones.

Los anticuerpos pueden ser anticuerpos monoclonales o policlonales. También se proporcionan composiciones farmacéuticas y otras que comprenden los compuestos de la invención objeto. También se exponen en el presente documento los compuestos de la invención para su uso en el tratamiento de un animal, particularmente un ser humano, que se sospecha que tiene o es propenso a una enfermedad o estado asociado con los niveles de HA o el gen de HAS y la expresión génica de HYAL. Tales métodos comprenden administrar una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de uno o más de los compuestos o las composiciones de la presente invención al sujeto que necesita el tratamiento o que se sospecha que necesita tratamiento profiláctico.

Por consiguiente, un aspecto de la presente invención se refiere a un compuesto aislado tal como se describe en las reivindicaciones que puede reducir el nivel de actividad hialuronano sintasa (HAS) 1.

TABLA 1

Resumen de identificadores de secuencia

SECUENCIA ID NO: DESCRIPCIÓN

1 Cebador sentido para HAS2 humana

2 Cebador antisentido para HAS2 humana

3 Cebador para PCINeo

4 Cebador sentido para GSP2

5 Cebador sentido para GSP4

6 Cebador sentido para HAS1

7 Cebador antisentido para HAS1

8 Cebador sentido para HAS2

9 Cebador sentido para HAS2

10 Cebador antisentido para HAS2

11 Cebador sentido para HAS2

12 Cebador sentido para HAS3

13 Cebador antisentido para HAS3

14 Cebador sentido para HAS3

15 Cebador sentido para GAPDH

16 Cebador antisentido para GAPDH

17 Cebador sentido para GAPDH

18 Cebador sentido para HYAL1

19 Cebador antisentido para HYAL1

20 Cebador sentido HYAL2

21 Cebador antisentido HYAL2

22 Cebador sentido HYAL3

23 Cebador antisentido HYAL3

24 Péptido inmunizante HAS418

25 Péptido inmunizante HAS419

26 Péptido inmunizante HAS421

27 Cebador sentido para HAS1

28 Cebador sentido para HAS2

29 Cebador sentido para HAS3

30 Cebador sentido para GAPDH

31 Cebador sentido para HYAL1

32 Cebador sentido para HYAL2

33 Cebador sentido para HYAL3

34 Cebador antisentido para HAS1

35 Cebador antisentido para HAS2

36 Cebador antisentido para HAS3

37 Cebador antisentido para GAPDH

38 Cebador antisentido para HYAL1

39 Cebador antisentido para HYAL2

40 Cebador antisentido para HYAL3

41 Sonda de hibridación para HAS1

42 Sonda de hibridación para HAS2

43 Sonda de hibridación para HAS3

44 Sonda de hibridación para GAPDH

45 Cebador sentido para HAS2

46 Cebador antisentido para HAS2

47 Cebador para pCL-neo

48 Cebador sentido GSP2

49 Cebador sentido GSP4

50 Cebador sentido Alu

51 Cebador antisentido Alu

Breve descripción de las figuras

La figura 1 es una representación gráfica y fotográfica de la cuantificación por RT-PCR en tiempo real de la expresión de ARNm de la familia de HAS y la inmunodetección de HAS2 en MDA-MB 231 original y transfectantes de antisentido. A: Expresión y cuantificación de ARNm para HAS2 en clones de MDA-MB 231 originales, simulados (vector pCIneo sólo) y estables de MDA MB-231 que expresan ARNm antisentido para HAS2 (ASHAS2) . B: Expresión y cuantificación de HAS1 y HAS3 en originales, transfectantes simulados y transfectantes de ASHAS2. C: Inmunodetección de proteína HAS2 en MDA-MB 231 original y, D: en clones estables que expresan ARNm antisentido para HAS2. Fotografías de células originales y transfectantes de ASHAS2 a 400x aumentos. En células originales obsérvese que la periferia de la célula se tiñe positivamente para el epítopo HAS2 (flechas) que está ausente en el antisentido transfectado, panel D, E y F: Inmunorreactividad de MDA MB231... [Seguir leyendo]

1. Compuesto aislado que reduce el nivel de actividad hialuronano sintasa (HAS) 1, siendo dicho compuesto un anticuerpo específico para una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NO: 25 ó 26.

2. Compuesto aislado según la reivindicación 1, en el que el anticuerpo se selecciona de un anticuerpo monoclonal, anticuerpo policlonal y un fragmento de unión a antígeno del mismo, un anticuerpo humanizado y un anticuerpo desinmunizado.

3. Compuesto aislado según la reivindicación 1 ó 2, para su uso en terapia.

4. Composición farmacéutica que comprende un compuesto según la reivindicación 1 ó 2 y uno o más portadores y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

5. Uso de un compuesto según la reivindicación 1 ó 2 en la fabricación de un medicamento para su administración a un sujeto en una cantidad eficaz para reducir el nivel y/o la actividad de HAS.

6. Uso según la reivindicación 5, en el que el sujeto es un ser humano.

7. Uso según la reivindicación 5 ó 6, para tratar cáncer.

8. Compuesto para su uso en la reducción del nivel y/o la actividad de HAS en un sujeto, siendo dicho compuesto tal como se define en la reivindicación 1 ó 2.

9. Compuesto según la reivindicación 8, en el que el sujeto es un ser humano.

10. Compuesto según la reivindicación 8 ó 9, para su uso en el tratamiento de cáncer.