Método de obtención de datos útiles para el diagnóstico, pronóstico y clasificación de los pacientes con enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y/o cáncer de pulmón.

Método de obtención de datos útiles para el diagnóstico, pronóstico y clasificación de los pacientes con enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y/o cáncer de pulmón.

Método de obtención de datos útiles para el diagnóstico, pronóstico y clasificación de los individuos con enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y/o cáncer de pulmón en a) individuos sin EPOC ni cáncer de pulmón, b) individuos con EPOC, c) individuos con adenocarcinoma, d) individuos con EPOC y adenocarcinoma, o e) individuos con EPOC y carcinoma escamoso. La presente invención describe además un kit de diagnóstico, así como un dispositivo y sus usos para el diagnóstico, pronóstico y clasificación de los pacientes con enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y/o cáncer de pulmón según se ha indicado anteriormente.

La presente invención se encuentra dentro del campo de la biología molecular y la medicina, y se refiere a un método de obtención de datos útiles para el diagnóstico, pronóstico y clasificación de los individuos en: -individuos que no presentan ni EPOC ni cáncer de pulmón -individuos con EPOC -individuos con adenocarcinoma -individuos con carcinoma escamoso -individuos con EPOC y adenocarcinoma. -individuos con EPOC y carcinoma escamoso.

ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR

El cáncer de pulmón (CP) es la causa más comúnmente asociada a las muertes relacionadas con cáncer en todo el mundo, se le atribuyen más de 1, 3 millones de muertes cada año, representa el 12, 7% de los casos de cáncer nuevos. Esta neoplasia se divide en dos grandes grupos de acuerdo a sus características clínicopatológicas: el cáncer de pulmón de células pequeñas o microcítico (small-cell lung carcinoma SCCP) y el cáncer de pulmón no microcítico (non-small-cell lung carcinoma NSCCP ó CPNM) . Aproximadamente entre el 75-85% de los casos de CP pertenecen al grupo de los no microciticos. Histológicamente, el cáncer de pulmón no microcitico está subdividido en dos categorías principales. El carcinoma de células escamosas (squamous cell lung carcinoma SCC) , también conocido como carcinoma epidermoide, que generalmente surge en el epitelio bronquial. El adenocarcinoma que por lo general aparece en las vías aéreas periféricas y en los alvéolos. Las opciones terapéuticas disponibles hasta el momento para el tratamiento del cáncer de pulmón (CP) , incluyen la cirugía, la quimioterapia y la radioterapia, las cuales pueden utilizarse por separado o en diferentes combinaciones. Sin embargo, a pesar de todos los avances que se han realizado, la tasa de supervivencia a 5 años para este tipo de tumor no supera el 15%.

El principal factor de riesgo para el desarrollo del CP es el habito tabáquico. Aproximadamente entre el 85-90% de los casos de CP son causados por este hábito. Por otro lado, el consumo de tabaco también es responsable del desarrollo de otras enfermedades tales como enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) . La Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que 3 millones de personas mueren de EPOC al año. Al igual que sucede con el CP, no todos los fumadores desarrollan EPOC. Sin embargo, alrededor del 50% de los fumadores terminan desarrollando EPOC. Además la EPOC incrementa el riesgo relativo de cáncer de pulmón entre dos y seis veces. Diversos estudios sugieren que la inflamación podría ser uno de los principales procesos implicados en la patogénesis de ambas enfermedades. Mediando este proceso podrían estar participando en gran medida la amplia familia de las citoquinas.

Las citoquinas son un diverso grupo de proteínas que incluyen citoquinas pro-inflamatorias, citoquinas derivadas de las células T, citoquinas quimiotácticas (quimiocinas) de eosinófilos, neutrófilos, monocitos/macrófagos y células T, citoquinas anti-inflamatorias y diversos factores de crecimiento. Varios estudios realizados en pacientes diagnosticados de EPOC, revelan que existe un aumento de los niveles de citoquinas pro-inflamatorias y quimiocinas (IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-13, IP-10, INF-γ, MCP-1 y TNF-α) en muestras obtenidas mediante 45 inducción de esputo en comparación con los controles sanos. Siguiendo esta línea, el factor de necrosis tumoral α- (TNF-α) y los receptores solubles del TNF, se incrementan en el esputo de los pacientes con EPOC en comparación con los fumadores sanos.

Por otro lado, los estudios en cáncer de pulmón ponen de manifiesto el papel de las citoquinas en esta patología correlacionándose con los estudios en EPOC. Por ejemplo, los estudios de polimorfismos revelan que existen polimorfismos específicos en los genes IL-1A y 1B que aumentan el riesgo de CP, especialmente entre los sujetos de mayor edad y con un historial de tabaquismo importante.

A pesar de los trabajos realizados en este campo, los resultados obtenidos, son insuficientes para explicar el

papel que la inflamación juega en ambas patologías, así como cuales son los posibles mecanismos que comparten y cuales son independientes de cada una, en este sentido se han analizado diversos marcadores inflamatorios tanto en CP como en EPOC de manera independiente Sin embargo aún es necesario encontrar un método alternativo de predicción, diagnóstico, y/o pronóstico, que permita la subclasificación de los individuos afectados por cáncer de pulmón y/o la enfermedad pulmonar obstructiva crónica.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

Los autores de la presente invención han analizado los miembros de la familia de las citoquinas y de los factores 65de crecimiento en el lavado broncoalveolar (LAB) de los pacientes con EPOC, con adenocarcinoma, con La presente invención proporciona un método de obtención de datos útiles para el diagnóstico, pronóstico y 5 clasificación de los individuos con dichas enfermedades.

Por tanto, un primer aspecto de la invención se refiere al uso de las citoquinas y de los factores de crecimiento que se seleccionan de entre IL-6sR, IL-1a, IL-11, CCL-1, EOTAXIN-2, PDGFAA, TNFRI, TNFRII, EGF, MIP-1B, MIG, MCP-1, IGFBP2, IGFBP1, GDF-15, VEGF o cualquiera de sus combinaciones, para la predicción,

diagnóstico, pronóstico y clasificación de los individuos en: a) individuos sin EPOC ni cáncer de pulmón, b) individuos con EPOC, c) individuos con adenocarcinoma, d) individuos con carcinoma escamoso,

d) individuos con EPOC y adenocarcinoma, o e) individuos con EPOC y carcinoma escamoso.

Otro aspecto de la invención se refiere al uso simultáneo de las citoquinas y de los factores de crecimiento que se seleccionan de la lista que consiste en IL-6sR, IL-1a, IL-11, CCL-1, EOTAXIN-2, PDGFAA, TNFRI, TNFRII, 20 EGF, MIP-1B, MIG, MCP-1, IGFBP2, IGFBP1, GDF-15, y VEGF, para la predicción, diagnóstico, pronóstico y

clasificación de los individuos en: a) individuos sin EPOC ni cáncer de pulmón, b) individuos con EPOC, c) individuos con adenocarcinoma,

d) individuos con carcinoma escamoso, d) individuos con EPOC y adenocarcinoma, o e) individuos con EPOC y carcinoma escamoso.

Una realización preferida se refiere al uso de IGFBP1, MIP1β, CCL-1, MIG, PDGFAA, GDF-15, VEGF y EGF

para la predicción, diagnóstico, pronóstico y clasificación de los individuos en: a) individuos sin EPOC ni cáncer de pulmón, b) individuos con EPOC, c) individuos con adenocarcinoma, d) individuos con carcinoma escamoso,

e) individuos con EPOC y adenocarcinoma, o f) individuos con EPOC y carcinoma escamoso.

Otro aspecto de la invención se refiere a un método de obtención de datos útiles, de ahora en adelante primer método de la invención, para el diagnóstico, pronóstico y clasificación de los pacientes en a) individuos sin EPOC ni cáncer de pulmón, b) individuos con EPOC, c) individuos con EPOC y cáncer de pulmón, c) Individuos con adenocarcinoma, d) individuos con carcinoma escamosos e) individuos con EPOC y adenocarcinoma, o f) individuos con EPOC y carcinoma escamoso, que comprende:

i) obtener una muestra biológica aislada de un individuo, y ii) cuantificar el producto de expresión de las citoquinas y de los factores de crecimiento que se 45 seleccionan de la lista que consiste en: IL-6sR, IL-1a, IL-11, CCL-1, EOTAXIN-2, PDGFAA, TNFRI, TNFRII, EGF, MIP-1B, MIG, MCP-1, IGFBP2, IGFBP1, GDF-15, y VEGF o cualquiera de sus combinaciones.

En una realización preferida de este aspecto de la invención, la expresión de las citoquinas y de los factores de crecimiento IL-6sR, IL-1a, IL-11, CCL-1, EOTAXIN-2, PDGFAA, TNFRI, TNFRII, EGF, MIP-1B, MIG, MCP-1, 50 IGFBP2, IGFBP1, GDF-15, y VEGF se cuantifica de manera simultánea.

En otra realización preferida, el método de la invención además comprende: iii) comparar las cantidades obtenidas en el paso (ii) con una cantidad de referencia.

La cantidad de referencia se obtiene a partir de los valores de expresión constitutiva del/los genes para las citoquinas o los factores de crecimiento, en un grupo de pacientes sanos o, preferentemente, que no presentan EPOC ni cáncer de pulmón.

Más preferiblemente, el primer método de la invención comprende cuantificar simultáneamente los productos de 60 expresión de IGFBP1, MIP1β, CCL-1, MIG, PDGFAA, GDF-15, VEGF y EGF.

Los pasos (ii) y/o (iii) de los métodos descritos anteriormente pueden ser total o parcialmente automatizados, por ejemplo, por medio de un equipo robótico sensor para la detección de la cantidad en el paso (ii) o la comparación computerizada en el paso (iii) .

El término “individuo”, tal y como se utiliza en la... [Seguir leyendo]

1. El uso simultáneo de las citoquinas y de los factores de crecimiento que se seleccionan de la lista que 5 consiste en IGFBP1, MIP1β, CCL-1, MIG, PDGFAA, GDF-15, VEGF y EGF, para la predicción, diagnóstico,

pronóstico y clasificación de los individuos en: a) individuos sin EPOC ni cáncer de pulmón, b) individuos con EPOC, c) individuos con adenocarcinoma,

d) individuos con carcinoma escamoso, e) individuos con EPOC y adenocarcinoma, o f) individuos con EPOC y carcinoma escamoso.

2. El uso según la reivindicación anterior, que además comprende las citoquinas y los factores de crecimiento 15 IL-6sR, IL-1a, IL-11, EOTAXIN-2, TNFRI, TNFRII, IGFBP2, MCP1 e GDF-15.

3. Un método de obtención de datos útiles, para el diagnóstico, pronóstico y clasificación de los individuos en a) individuos sin EPOC ni cáncer de pulmón, b) individuos con EPOC, c) individuos con adenocarcinoma, d) individuos con EPOC y adenocarcinoma, o e) individuos con EPOC y carcinoma escamoso, que comprende:

i) obtener una muestra biológica aislada de un individuo, y ii) cuantificar el producto de expresión de las citoquinas y de los factores de crecimiento que se seleccionan de la lista que consiste en: IGFBP1, MIP1β, CCL-1, MIG, PDGFAA, GDF-15, VEGF y EGF.

4. El método según la reivindicación anterior, que además comprende: 25 iii) comparar las cantidades obtenidas en el paso (ii) con una cantidad de referencia.

5. El método según cualquiera de las reivindicaciones 3-4, que además comprende cuantificar el producto de expresión de las citoquinas y de los factores de crecimiento IL-6sR, IL-1a, IL-11, EOTAXIN-2, TNFRI, TNFRII, IGFBP2, y MCP-1.

3.

6. El método según cualquiera de las reivindicaciones 3-5, donde los pasos (ii) y/o (iii) de los métodos descritos anteriormente pueden ser total o parcialmente automatizados.

7. El método según cualquiera de las reivindicaciones 3-6, donde la muestra biológica es fluido brocoalveolar.

3.

8. El método según cualquiera de las reivindicaciones 3-7, donde la cuantificación se hace mediante un inmunoensayo.

9. El método según cualquiera de las reivindicaciones 3-8, donde el inmunoensayo es un ELISA.

4.

10. Un método de diagnóstico, pronóstico y clasificación de individuos que comprende los pasos (i) - (iii) según cualquiera de las reivindicaciones 3-9, y que además comprende asignar al individuo del paso (i) al grupo de individuos sin EPOC ni cáncer de pulmón, cuando no presenta expresión de los genes IGFBP1, MIP1β, CCL-1, MIG y PDGFAA.

4.

11. Un método de diagnóstico, pronóstico y clasificación de individuos que comprende los pasos (i) - (iii) según cualquiera de las reivindicaciones 3-9, y que además comprende asignar al individuo del paso (i) al grupo de individuos con EPOC cuando se detecta la expresión de MIG, y no se detecta la expresión de CCL-1 e IGFBP1.

12. Un método de diagnóstico, pronóstico y clasificación de individuos que comprende los pasos (i) - (iii) según cualquiera de las reivindicaciones 3-9, y que además comprende asignar al individuo del paso (i) al grupo de individuos con adenocarcinoma cuando se detecta la expresión de CCL-1, y la cantidad de expresión de MIP1β es menor a 20 pg/ml.

13. Un método de diagnóstico, pronóstico y clasificación de individuos que comprende los pasos (i) - (iii) según cualquiera de las reivindicaciones 3-9, y que además comprende asignar al individuo del paso (i) al grupo de individuos con carcinoma escamoso cuando se detecta la expresión de PDGFAA o MIP1β a cualquier nivel, y no se detecta la expresión de CCL-1.

14. Un método de diagnóstico, pronóstico y clasificación de individuos que comprende los pasos (i) - (iii) según cualquiera de las reivindicaciones 3-9, y que además comprende asignar al individuo del paso (i) al grupo de individuos con EPOC y adenocarcinoma cuando se detecta la expresión de CCL-1 a cualquier nivel, y la expresión de VEGF es menor de 200 pg/ml.

15. Un método de diagnóstico, pronóstico y clasificación de individuos que comprende los pasos (i) - (iii) según cualquiera de las reivindicaciones 3-9, y que además comprende asignar al individuo del paso (i) al grupo de individuos con EPOC y carcinoma escamoso cuando se detecta la expresión de GDF-15 y de VEGF superior a 50 pg/ml y 200pg/ml respectivamente, y no se detecta la expresión de CCL-1 ni EGF.

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16. Un kit o dispositivo, que comprende los anticuerpos anti-IGFBP1, anti-MIP-1B, anti-CCL-1, anti-MIG, anti-PDGFAA, anti-GDF-15, anti-VEGF o anti-EGF.

17. El kit o dispositivo según la reivindicación 16, que además comprende los anticuerpos anti-IL-6sR, anti-IL-1a, 10 anti-IL-11, anti-EOTAXIN-2, anti-TNFRI, anti-TNFRII, anti-IGFBP2, y anti-MCP1.

18. El uso de un kit o dispositivo según cualquiera de las reivindicacione.

16. 17, para llevar a cabo un método según se describe en cualquiera de las reivindicaciones 3 a15.