Liposomas que contienen prostaglandina E1 (PGE1), formulaciones que los contienen y su uso.

Liposomas unilamelares que comprenden PGE1 en combinación con L-carnitina,

en los que en la superficie externa de dichos liposomas hay polímeros hidrófilos

Liposomas que contienen prostaglandina E1 (PGE1) , formulaciones que los contienen y su uso Campo de la invenciïn La presente invenciïn se refiere al campo de las formulaciones farmacïuticas, y en particular a las que comprenden liposomas.

Estado de la tïcnica El propïsito de la presente invenciïn es proporcionar liposomas eficaces y seguros que encapsulan prostaglandina E1 (PGE1) para el tratamiento (tras la administraciïn sistïmica) de trastornos vasculares en pacientes diabïticos, y para el tratamiento local (tras la administraciïn tïpica) de ïlceras cutïneas y retinopatïas diabïticas.

Cuando se administra de manera sistïmica, se sabe que la prostaglandina E1 (PGE1) se metaboliza rïpidamente en el pulmïn, de forma que obviamente se pierde la mayorïa de su eficacia. Para superar el problema anteriormente mencionado, se han estudiado los liposomas de fosfatidilcolina u otros fosfolïpidos para determinar la viabilidad de obtener la liberaciïn del complejo PGE1-a-ciclodextrina para el tratamiento de afecciones patolïgicas asociadas a la diabetes (vïase, por ejemplo, Toyota T. et al.: Lipo-PGE1. A new lipid-encapsulation of prostaglandin E1: placebo and prostaglandin E1 controlled trails in patients with diabetic neuropathy and leg ulcers. Prostaglandins 1993, 46, 453-468.

En la investigaciïn previa (vïase Golub M. et al.: Metabolism of prostaglandins A1 and E1. J. Clin. Invest. 1975; 56, 1404-1410) , se usaron liposomas de fosfatidilcolina como vehïculo del fïrmaco para permitir que PGE1 pasase mïs allï del filtro pulmonar y evitar que fuera metabolizada por la 15-hidroxi deshidrogenasa.

Dada la importancia del uso de PGE1-a-ciclodextrina en el tratamiento de las enfermedades vasculares de los diabïticos, y para el tratamiento local de ïlceras cutïneas y retinopatïas diabïticas, existe la necesidad evidente de desarrollar formulaciones nuevas capaces de superar los problemas anteriormente mencionados, asegurando una prolongaciïn eficaz de la semivida de la PGE1 administrada y facilitando la liberaciïn del fïrmaco en el sitio necesario.

Sumario de la invenciïn Se describen liposomas unilamelares que encapsulan PGE1 y/o PGE1-a-ciclodextrina, en combinaciïn con Lpropionil carnitina, cuya superficie externa estï revestida con polïmeros hidrïfilos.

Descripciïn detallada de la invenciïn La presente invenciïn permite superar los problemas anteriormente descritos gracias a la combinaciïn de liposomas unilamelares que comprenden prostaglandina E1 con L-propionil-carnitina, en cuya superficie externa hay presentes polïmeros hidrïfilos.

De hecho, se ha descubierto sorprendentemente que dicho revestimiento de polïmeros no solamente permite una mejor adhesiïn a las cïlulas del tejido endotelial, sino que tambiïn mejora la estabilidad del liposoma en el plasma y por lo tanto prolonga su tiempo de circulaciïn, con un incremento consiguiente en la semivida del fïrmaco y una capacidad mejorada del sistema de administraciïn para unirse a un sitio especïfico.

Los liposomas unilamelares segïn la invenciïn consisten en una vesïcula fosfolipïdica que contiene un nïcleo de disoluciïn acuosa.

Los fosfolïpidos que constituyen la pared de la vesïcula son fosfolïpidos naturales o sintïticos, dada su elevada biocompatibilidad y atoxicidad.

Los fosfolïpidos adecuados para el uso segïn la invenciïn incluyen, por ejemplo: fosfatidilcolina (lecitina) , fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilglicerol, fosfatidilinositol, dimiristoilfosfatidilcolina (DPMC) , dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC) , diestearoilfosfatidilcolina (DSPC) , palmitoil-estearoilfosfatidilcolina, esfingomielina.

Los liposomas pueden incluir tambiïn aditivos que sirven como estabilizantes o modificadores de la carga superficial, tales como colesterol, sulfato de colesterol.

La disoluciïn acuosa contenida en la vesïcula consiste en tampïn fosfato o soluciïn fisiolïgica.

Los liposomas descritos anteriormente encapsulan el ingrediente activo (ya sea en forma libre [PGE1] o en forma de un compuesto de inclusiïn [PGE1-a-ciclodextrina]) y L-propionil-carnitina, cuyo propïsito es facilitar la betaoxidaciïn de las cadenas de lïpidos, incrementando el metabolismo de las cïlulas endoteliales.

La superficie externa de los liposomas se reviste despuïs con polïmeros hidrïfilos, tales como poli-L-lisina (PLL) , poliornitina y fibronectina, o mezclas de las mismas.

Se prefiere poli-L-lisina para asegurar la adhesiïn a las cïlulas en las placas de cultivo, ya que se ha demostrado que la poli-L-lisina hace que el liposoma se adhiera a las cïlulas endoteliales.

Las vesïculas unilamelares pequeïas (SUV) segïn la invenciïn se pueden preparar mediante el uso de tïcnicas conocidas, partiendo de vesïculas liposïmicas multilamelares (MLV) mediante extrusiïn de estas ïltimas a travïs de filtros de policarbonato, mediante el uso de un extrusor adecuado, o mediante homogeneizaciïn.

Las SUV asï obtenidas se revisten despuïs con los polïmeros hidrïfilos "haciendo gotear" los liposomas gota a gota en la disoluciïn de polïmeros bajo una agitaciïn constante.

Las vesïculas liposïmicas multilamelares (MLV) se pueden preparar tambiïn, segïn mïtodos conocidos, mediante la dispersiïn de todos los componentes (fosfolïpidos, cualquier estabilizante, PEG1 y/o PGE1-a-ciclodextrina, carnitina) en tampïn fosfato (pH 7, 4) con agitaciïn mecïnica a una temperatura mayor que la temperatura de transiciïn (Tc) del fosfolïpido que se estï usando. Las MLV resultantes se usan para obtener SUV mediante extrusiïn a travïs de una membrana de policarbonato o mediante homogeneizaciïn. Las SUV asï obtenidas se purifican despuïs mediante la eliminaciïn del ingrediente activo sin encapsular mediante diïlisis.

Las formulaciones para el uso sistïmico, por lo tanto, consisten en los liposomas asï obtenidos diluidos de manera adecuada - con soluciïn salina, por ejemplo - para obtener una formulaciïn adecuada, por ejemplo, para la administraciïn sistïmica mediante inyecciïn venosa en una infusiïn lenta a lo largo de 24 horas.

Si se necesitan formulaciones para uso tïpico (p.ej. para el tratamiento de ïlceras o retinopatïas, como se mencionï previamente) , los liposomas se dispersan en pelïculas de polïmeros adecuados.

Dichas pelïculas se conocen y se preparan mediante el uso de polïmeros orgïnicos, tales como hialuronato sïdico, hidroxipropilcelulosa (HPMC) , polietilen glicol 400 (PEG 400) y agua, en proporciones adecuadas, y se caracterizan por sus propiedades viscoelïsticas, su grosor y bio-adhesiïn in vitro, mediante el uso de un reïmetro, un micrïmetro y un tensiïmetro, respectivamente.

Las pelïculas se usan despuïs para preparar la medicaciïn para la aplicaciïn in situ que consiste, por ejemplo, en tiras de diversos tamaïos a aplicar sobre lesiones o sobre la superficie a tratar. Tambiïn pueden estar en forma de lentes de contacto para aplicarlas directamente en el ojo para el tratamiento de retinopatïas.

Si es necesario, las formulaciones tambiïn se pueden liofilizar y posteriormente reconstituir en el momento de su uso.

La eficacia (E%) de la encapsulaciïn del ingrediente activo y la carnitina en los liposomas se determinï mediante HPLC (obviamente despuïs de haber descompuesto los liposomas con un agente de lisis de membranas adecuado, tal como Triton X-100) .

Los liposomas se caracterizaron basïndose en sus dimensiones, ïndice de polidispersiïn (PI) y potencial z, aunque sus caracterïsticas morfolïgicas y estructurales se estudiaron en un microscopio electrïnico de transmisiïn (TEM) y en un microscopio ïptico de luz polarizada.

Los estudios de liberaciïn in vitro se llevaron a cabo mediante el uso de celdas de difusiïn de Franz.

Los liposomas revestidos y sin revestir se ensayaron despuïs in vitro, mediante el uso de cïlulas endoteliales para determinar el efecto de los polïmeros usados sobre la adhesiïn de las vesïculas a dichas cïlulas.

Tambiïn se determinï la distribuciïn de PGE1 dentro de las cïlulas.

Las cïlulas se trataron con los liposomas revestidos con polïmeros hidrïfilos y que contenïan PGE1 (en forma libre y de complejo) . Los liposomas se "marcaron" con colorantes hidrïfilos y lipïfilos para permitir que se pudieran localizar dentro de la cïlula. Al final del experimento, las cïlulas se fijaron y se estudiaron al microscopio para determinar la interiorizaciïn de los liposomas y su localizaciïn.

La invenciïn se ilustra ahora adicionalmente en vista de los ejemplos proporcionados a continuaciïn.

Ejemplo 1

Los liposomas se prepararon en condiciones asïpticas... [Seguir leyendo]

1. Liposomas unilamelares que comprenden PGE1 en combinaciïn con L-carnitina, en los que en la superficie externa de dichos liposomas hay polïmeros hidrïfilos.

2. Los liposomas unilamelares segïn la reivindicaciïn 1, que comprenden fosfolïpidos naturales o sintïticos

elegidos de: lecitina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilglicerol, fosfatidilinositol, dimiristoilfosfatidilcolina -DPMC, dipalmitoilfosfatidilcolina DPPC, diestearoilfosfatidilcolina DSPC, palmitoil-estearoilfosfatidilcolina, esfingomielina, posiblemente en combinaciïn con aditivos que actïan como estabilizantes o modificadores de la carga superficial.

3. Los liposomas unilamelares segïn la reivindicaciïn 1, en los que dicha PGE1 es prostaglandina E1 en forma 10 libre o como un complejo de inclusiïn de PGE1-a-ciclodextrina.

4. Los liposomas unilamelares segïn la reivindicaciïn 1, en los que dichos polïmeros hidrïfilos se eligen de: PoliL-Lisina - PLL, poliornitina y fibronectina o mezclas de las mismas.

5. Un proceso para la preparaciïn de liposomas segïn las reivindicaciones 1-4, en el que dichos liposomas se obtienen mediante homogeneizaciïn o extrusiïn de liposomas multilamelares a travïs de filtros de policarbonato.

6. Las formulaciones para la administraciïn sistïmica que comprenden liposomas segïn las reivindicaciones 1

4.

7. Las formulaciones para la aplicaciïn tïpica que contienen liposomas segïn las reivindicaciones 1 - 4.

8. Las formulaciones segïn la reivindicaciïn 7, en las que dichas formulaciones comprenden liposomas segïn las reivindicaciones 1 - 4 dispersos en pelïculas de polïmeros.

9. Las formulaciones segïn la reivindicaciïn 8, en las que dichas pelïculas de polïmeros se preparan mediante el uso de polïmeros orgïnicos elegidos de: hialuronato sïdico, hidroxipropilcelulosa - HPMC, polietilenglicol 400 y agua en proporciones adecuadas.

10. Las formulaciones segïn la reivindicaciïn 9, que consisten en tiras para aplicaciïn "in situ".