Linea celular de carcinoma inflamatorio mamario canino.

Línea celular de carcinoma inflamatorio mamario canino.

La presente invención se refiere a una línea celular establecida de carcinoma inflamatorio mamario canino,

de células epiteliales basales triple negativas. La invención también se refiere a un método para la obtención de xenotransplantes estables de carcinoma inflamatorio mamario canino en animales de experimentación, y al uso de la línea celular y de los xenotransplantes en el estudio del carcinoma inflamatorio mamario canino así como del carcinoma inflamatorio mamario humano y su uso para identificar in vitro compuestos terapéuticamente útiles para el tratamiento del cáncer inflamatorio mamario humano. También se refiere a un kit para el estudio in vitro de IMC canino y/o IBC humano y de fármacos potencialmente utilizables frente al IBC humano, que incluye la línea celular de la invención.

Línea celular de carcinoma inflamatorio mamario canino Sector de la Técnica

La invención se encuadra dentro del campo de las líneas celulares animales, más concretamente en el de líneas celulares tumorales de alta malignidad. Particularmente, se relaciona con el establecimiento de líneas celulares de carcinoma inflamatorio mamario para su uso como biomodelos específicos para este tipo tumoral, para la evaluación y desarrollo de futuros sistemas de pronóstico y tratamientos.

Estado de la técnica

El cáncer inflamatorio mamario, conocido por sus siglas en inglés IBC (Inflammatory Breast Cáncer) es la neoplasia mamaria más agresiva y de peor pronóstico en la mujer. Afortunadamente, es una enfermedad de baja prevalencia, aunque de elevada mortalidad. Clínicamente, es un tumor que presenta un curso clínico fulminante. Los signos clínicos iniciales aparecen en la piel que recubre el tejido mamario que se presenta con edema, eritema, aumento de la temperatura, piel de naranja y sensación de dolor en la piel que recubre la glándula mamaria. Todos estos síntomas, característicos de inflamación, unidos al hecho de que frecuentemente no se observan nodulos mamarios, provocan que el diagnóstico inicial de cáncer sea difícil en muchas ocasiones, ya que se puede confundir con una dermatitis o mastitis. Es, sin embargo, un proceso tumoral muy agresivo y de difícil tratamiento. Actualmente, el IBC se considera un tipo especial de cáncer mamario con características diferenciales desde el punto de vista genético, biológico, patológico y de comportamiento clínico. La histopatología revela un tumor de elevada malignidad que no está representado por un tipo histológico concreto. La única característica microscópica histológica diferencial del IBC respecto a otros tumores mamarios malignos, es la presencia de una invasión tumoral masiva de los vasos linfáticos de la dermis que son los causantes, en último extremo, del edema y de otros signos de aparente inflamación. El tratamiento

actual multimodal que incluye quimioterapia agresiva y radioterapia, normalmente antes de emplear la cirugía, ha mejorado ligeramente el periodo libre de enfermedad y la supervivencia total. A pesar de todo, la supervivencia de las mujeres con IBC es muy baja. En los últimos años se han realizado varios estudios sobre la caracterización inmunohistoquímica del IBC humano (receptores hormonales, proliferación tumoral, etc.) que proporcionan pronósticos y tratamientos más acertados para cada caso. Actualmente se siguen probando nuevos tratamientos que mejoren la supervivencia y tiempo libre de enfermedad de las pacientes con IBC y se buscan nuevos factores pronóstico. Así mismo, es necesario encontrar biomodelos específicos para este tipo tumoral, especialmente para los casos que son triple negativos (negativos al receptor de estrógenos -RE-, al receptor de progesterona -RP- y al receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano -HER-2-), ya que su tratamiento es aún más difícil. Hay pocos modelos disponibles que permitan estudiar la peculiar biología de IBC, especialmente del IBC triple negativo. La mayoría de estudios se ha llevado a cabo usando las líneas celulares humanas SUM149 y SUM190. Las células SUM149 son triple negativas y las células SUM190 son negativas a RE/RP y positivas a HER-2. Otras líneas celulares IBC menos estudiadas son: MDA-IBC3, KPL4 y WIBC- 9 (todas RE/RP negativas y HER-2 positivas). En el último año, se ha descrito y caracterizado la nueva línea celular FC-IBC02, también triple negativa.

La posible utilización del modelo espontáneo canino es una opción muy interesante sobre todo para la evaluación y desarrollo de futuros tratamientos y para el estudio del proceso metastásico. Los tumores mamarios caninos (TMC) son las neoplasias más frecuentes en la perra, especialmente en países mediterráneos, como España, donde la ovariohisterectomía a edad temprana no se suele practicar, aumentándose de forma drástica el riesgo de padecer tumores mamarios en esta especie animal. Aproximadamente el 50% de los TMC son malignos y de éstos, el carcinoma inflamatorio mamario canino, conocido por sus siglas en inglés IMC (Inflammatory Mammary Cáncer) es el de mayor gravedad. Hasta que comenzaron nuestros trabajos

en este tipo tumoral, muy poco se conocía sobre su existencia en la perra, ya que sólo se había publicado una breve descripción que recogía las características clínicas más evidentes de diez animales afectados por IMC. La utilización del IMC canino como modelo comparativo animal viene avalada por su mayor prevalencia respecto a la mujer, por la menor duración de los estudios en esta especie animal (lo que permite obtener resultados de tratamientos y supervivencia en un tiempo relativamente corto) y por ser de carácter espontáneo, aunque quedan aspectos importantes de la enfermedad que merecen ser comparados entre ambas especies para poder validar los estudios en el modelo canino. Además, al ser la especie canina un animal de compañía, ambas especies están sometidas, en gran medida, a los mismos efectos ambientales, incluyendo algunos carcinógenos.

Aún así, existen varios problemas en el modelo canino de IMC espontáneo: su baja prevalencia, aunque ésta sea mayor que la del carcinoma inflamatorio humano, y que la evolución del tumor es tan rápida que no se pueden estudiar las fases iniciales de la enfermedad, ni es posible la predicción de la metástasis tumoral temprana.

En la investigación del carcinoma inflamatorio mamario canino, los inventores desarrollaron un biomodelo de xenotransplante en ratón obtenido directamente a partir de muestras de una perra con carcinoma inflamatorio (Camacho, L. Res Vet Sci (2013) 95(3): 1068-75). Los xenotransplantes descritos en este documento reproducían las características histológicas del tumor primario y eran positivos a los receptores hormonales y negativos al receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano. Podían, por lo tanto, utilizarse como modelo canino para el estudio del IBC.

Sin embargo, es necesario reducir la experimentación con animales vivos, para no causarles innecesariamente dolor, sufrimiento, angustia o lesión prolongados. Es fundamental, por lo tanto, encontrar métodos alternativos

que faciliten y mejoren el estudio de esta enfermedad que, a su vez, se puede utilizar como modelo para el estudio del cáncer inflamatorio mamario humano.

Descripción detallada de la invención

Línea celular de carcinoma inflamatorio mamario canino.

La presente invención se refiere a una línea celular establecida de carcinoma inflamatorio mamario canino. Al analizar la morfología celular de la línea se comprobó que se trata de células redondeadas o poligonales de grandes a muy grandes (pueden alcanzar valores cercanos a los 600pm), con una alta malignidad citológica. El pleomorfismo celular y nuclear son muy marcados, con núcleos muy grandes y numerosos nucléolos, siendo también frecuentes las células multinucleadas. Se caracteriza, por lo tanto, por anisocitosis, anisocariosis y células multinucleadas. Además, se observa mimetismo vascular en el cultivo, es decir, células que se asemejan a las células endoteliales de los capilares por presentar huecos vacíos de citoplasma pequeños y numerosos o grandes y en menor número.

Por otro lado, la caracterización inmunohistoquímica de la línea celular reveló que se trata de células epiteliales básales y, además, resultó negativa en cuanto a la expresión del receptor de estrógeno (RE), el receptor de progesterona (RP) y el receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (tanto C-ERBb2 como HER-2).

Las células negativas a estos tres receptores se denominan triples negativas, tanto en el caso de los cánceres de mama en mujeres como en las perras, y son objeto de interés para la comunidad médica y científica desde hace varios años debido a la elevada agresividad de los cánceres de mama llamados triple negativos, al mal pronóstico que tienen y a las pocas herramientas terapéuticas de las que se dispone para combatirlos, a lo que hay que sumar el hecho de que afectan frecuentemente a mujeres jóvenes y presentan un riesgo de metástasis muy elevado. Además, por el momento, no se ha podido

establecer una clasificación clara de los tumores triple negativos, tal vez debido a su elevada heterogeneidad.

En concreto, la invención se refiere a una línea celular procedente de una perra de raza mestiza de 10 años de edad. Internamente se ha denominado IPC-366, y se ha realizado su depósito, con fecha 22/05/2014, en el National Bank for Industrial Microorganisms and Cell Cultures, de Sofía (Bulgaria), obteniendo el número de acceso 8815.

El desarrollo de una línea celular... [Seguir leyendo]

1. Línea celular establecida de carcinoma inflamatorio mamario (IMC) canino constituida por células básales que son negativas en cuanto a la expresión del receptor de estrógeno, el receptor de progesterona y el receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano.

2. Línea celular establecida, según la reivindicación 1, caracterizada por anisocitosis, anisocariosis, células multinucleadas y mimetismo vascular.

3. Línea celular establecida de IMC canino depositada en el National Bank for Industrial Micoorganisms and Cell Cultures, de Sofía (Bulgaria), con número de acceso 8815.

4. Uso de una línea celular según cualquiera de las reivindicaciones 1-3 en la elaboración de una composición para la obtención de xenotrasplantes estables de IMC canino en anímales de experimentación.

5. Xenotrasplante estable en anímales de experimentación constituido por células de IMC canino triple negativo definidas en cualquiera de las reivindicaciones 1-3.

6. Uso de una línea celular según reivindicaciones 1-3 en el estudio del IMC canino y/o del carcinoma inflamatorio mamario humano (IBC).

7. Uso de un xenotrasplante según reivindicación 5 en el estudio del IMC canino y/o del IBC humano.

8. Uso de una línea celular según reivindicaciones 1-3 en la identificación in vitro de compuestos terapéuticamente útiles para el tratamiento de IBC humano.

9. Kit para el estudio in vitro de IMC canino y/o IBC humano y de fármacos potencialmente utilizables frente al IBC humano, que incluye una línea celular definida según cualquiera de las reivindicaciones 1-3.