Inhibidores de la actividad de serina proteasa y su uso en métodos y composiciones para el tratamiento de rechazo de injertos y promoción de supervivencia de injertos.

Un compuesto que comprende alfa1-antitripsina, un péptido de aminoácido carboxiterminal correspondiente a alfa1-antitripsina o un análogo de alfa1-antitripsina para usar en un método para la reducción de un rechazo de trasplante no orgánico o para la reducción del riesgo de un rechazo de trasplante no orgánico o enfermedad de injerto versus huésped (GVHD),

en donde el trasplante no orgánico se selecciona del grupo que consiste en córnea, médula ósea, islote pancreático y una combinación de ellos.

Inhibidores de la actividad de serina proteasa y su uso en métodos y composiciones para el tratamiento de rechazo de injertos y promoción de supervivencia del injertos Campo de la invención La presente invención se refiere a un compuesto para usar en un método de tratamiento.

Antecedentes de la invención Serina proteasas Las serina proteasas cumplen un papel importante en la fisiología humana mediando la activación de las funciones vitales. Además de su función fisiológica normal, las serina proteasas fueron implicadas en una cantidad de condiciones patológicas en seres humanos. Las serina proteasas se caracterizan por una tríada catalítica que consiste en ácido aspártico, histidina y serina en el sitio activo.

Los inhibidores de serina proteasa naturales fueron clasificados en familias primariamente sobre la base del patrón de ligación de disulfuro y la homología de secuencia del sitio reactivo. Los inhibidores de serina proteasa, incluyendo el grupo conocido como serpinas, fueron hallados en microbios, en los tejidos y los fluidos de plantas, animales, insectos y otros organismos. Al menos nueve proteínas separadas bien caracterizadas se han identificado ahora, que comparten la capacidad de inhibir la actividad de diversas proteasas. Varios de los inhibidores fueron agrupados juntos, a saber, inhibidor de α1-antitripsina proteinasa, inhibidor de proteasa de leucocitos secretorios o SLPI, antitrombina III, antiquimiotripsina, inhibidor de C1 y α2-antiplasmina, que se dirigen contra diversas serina proteasas, es decir, elastasa de leucocitos, trombina, catepsina G, quimiotripsina, activadores de plasminógeno y plasmina. Estos inhibidores son miembros de la clase de inhibidores de α1-antitripsina-proteinasa. La α2macroglobulina de proteína inhibe los miembros de las cuatro clases de proteasas endógenas: serina, cisteína, ácido aspártico y metaloproteasas. Sin embargo, otros tipos de inhibidores de proteasa son específicos de la clase. Por ejemplo, el inhibidor de α1-antitripsina-proteinasa (también conocido como (α1-antitripsina o AAT) y el inhibidor de inter-alfa-tripsina inhiben sólo las serina proteasas, el inhibidor de α1-cisteína proteasa inhibe las cisteína proteasas y la α1-anticolagenasa inhibe las enzimas colagenolíticas de la clase de las metaloenzimas.

La concentración plasmática normal de ATT varía de 1, 3 a 3, 5 mg/ml, a pesar de que se puede comportar como un reactivo de fase aguda y aumenta 3-4 veces durante la respuesta del huésped a la inflamación y/o lesión del tejido como con embarazo, infección aguda y tumores. Se difunde fácilmente en los espacios tisulares y forma un complejo 1:1 con proteasas objeto, principalmente elastasa neutrofílica. Otras enzimas tales como tripsina, quimiotripsina, catepsina G, plasmina, trombina, calicreína tisular y factor Xa también pueden servir como sustratos. El complejo de enzima/inhibidor se retira de la circulación por enlace con el receptor de complejo de serpina-enzima (SEC) y es catabolizado por el hígado y el bazo. Parece que ATT representa una parte importante del mecanismo de defensa contra la actividad de las serina proteasas.

La α1-antitripsina es uno de algunos inhibidores de serina proteasa de mamífero naturales actualmente aprobados para la terapia clínica del desequilibrio de proteasa. La α1-antitripsina terapéutica es asequible en comercios desde mediados de los años ochenta y se prepara por medio de diversos métodos de purificación (ver, por ejemplo, Bollen et al., patente U. S. Nº 4.629.567; Thompson et al., patentes U. S. Nros. 4.760.130, 5.616.693, WO 98/56821) . La prolastina es una marca registrada para una variante purificada de α1-antitripsina y actualmente es comercializada por Talectris Company (patente U. S. Nº 5.610.285 Lebing et al., 11 de marzo de 1997) . Las variantes no modificadas y mutantes recombinantes de α1-antitripsina producidas por métodos de ingeniería genética también son conocidas (patente U. S. Nº 4.711.848) ; también se conocen métodos de uso, por ejemplo, (terapia génica / suministro de α1-antitripsina (patente U. S. Nº 5.399.346) .

Rechazo de injerto Hay muchas enfermedades que culminan en la disfunción o falla orgánica. Los ejemplos no limitativos representativos incluyen insuficiencia renal debida a diabetes mellitus, hipertensión, obstrucción de la segregación de orina, toxicidad inducida por drogas o hipoperfusión, así como disfunción cardíaca debida a enfermedad arterial coronaria isquémica, cardiomiopatía / infección o valvulopatía. Las enfermedades pulmonares incluyen daño sustancial debido a enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC, que incluye bronquitis crónica y enfisema) , deficiencia de AAT, fibrosis quística y fibrosis intersticial. En determinadas condiciones, la única opción terapéutica para el tratamiento de un sujeto puede ser el trasplante de órganos. El trasplante de islotes pancreáticos proporciona a pacientes diabéticos la única opción para un nivel de glucosa en sangre muy controlado, probado como esencial para la prevención de complicaciones diabéticas. En el caso de los islotes, la inflamación postrasplante, que precede al rechazo inmune, es un determinante crítico de la supervivencia del injerto. Esta inflamación temprana es mediada por células distintas de las células inmunes aloespecíficas inminentes.

Un desafío del trasplante terapéutico consiste en los efectos dañinos del sistema inmune del huésped sobre el trasplante. Las moléculas de MHC existen sobre las superficies de células y las estructuras particulares de 2 10

moléculas de MHC son típicamente exclusivas de cada individuo (a excepción de gemelos idénticos, donde los complementos de la molécula de MHC son idénticos) . El sistema inmune se programa para atacar los tejidos extraños o no propios portadores de MHC. Por estas razones, cuando un órgano o tejido se trasplanta a un receptor, se hace un esfuerzo por optimizar el grado de coincidencia del tejido entre donante y receptor. Los antígenos de MHC son caracterizados para el receptor y los donantes. La coincidencia de un donante con un receptor de aloinjerto por la estructura de MHC reduce la magnitud de la respuesta de rechazo. Un ejemplo arquetípico es el grupo sanguíneo coincidente. La mayoría de los trasplantes son aloinjertos que se producen entre miembros no idénticos de la misma especie. Como estas coincidencias son imperfectas, hay una respuesta inmune esperada al rechazo al injerto asociada con los aloinjertos. Los métodos actuales usados, a fin de mejorar la supervivencia del injerto, incluyen medicaciones para suprimir la respuesta inmune que pueden dar como resultado el rechazo del injerto. Estas medicaciones se denominan inmunosupresor o fármacos antirrechazo, tales como prednisona, ciclosporina A y ciclofosfamida, para nombrar algunos. Como se mencionó con anterioridad, se experimenta una inflamación local después del injerto y las células que son particularmente sensibles a la inflamación no específica tales como islotes pueden soportar la disfunción del injerto más severamente que otros tipos.

A pesar de los avances en el campo de la terapia antirrechazo, el mantenimiento del injerto sigue siendo un desafío dado que las terapias antirrechazo disponibles son imperfectas. Por ejemplo, la inmunosupresión aumenta el riesgo de una infección oportunista o neoplasia. Las toxicidades abundan e incluyen, pero sin limitación, diabetes, disfunción orgánica, insuficiencia renal, disfunción hepática, defectos hematológicos, efectos colaterales neuromusculares y psiquiátricos y muchos otros. En consecuencia, hay una necesidad de un tratamiento médico antirrechazo más efectivo que prolongue la supervivencia del injerto y mejora la calidad de vida.

El trasplante de médula ósea en un tipo de trasplante en el que las células inmunes de un donante son transferidas a un receptor, confiriendo el sistema inmune del donante al receptor. Aquí, el injerto es capaz de generar una respuesta inmune contra el huésped y se denomina enfermedad de “injerto versus huésped” (GVHD) . Se requiere un tratamiento inmunosupresor y antimicrobiano para bloquear las consecuencias adversas de GVHD y hay una necesidad inhibidores más seguros y más efectivos de los efectos adversos por parte del injerto.

Debido a algunas de las dificultades e insuficiencias de una terapia convencional para el tratamiento de complicaciones del trasplante y efectos colaterales asociados, se necesitan nuevas modalidades terapéuticas.

El documento US 2003/053998 A1 revela un método de protección de órganos o tejidos susceptibles a disfunción inducida por reperfusión después de isquemia, donde tal método... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto que comprende alfa1-antitripsina, un péptido de aminoácido carboxiterminal correspondiente a alfa1-antitripsina o un análogo de alfa1-antitripsina para usar en un método para la reducción de un rechazo de trasplante no orgánico o para la reducción del riesgo de un rechazo de trasplante no orgánico o enfermedad de injerto versus huésped (GVHD) , en donde el trasplante no orgánico se selecciona del grupo que consiste en córnea, médula ósea, islote pancreático y una combinación de ellos.

2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la composición también comprende uno o varios agentes anti-rechazo de trasplante, agentes antiinflamatorios, agentes inmunosupresores, agentes inmunomoduladores, agentes antimicrobianos o una combinación de ellos.

3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto comprende un péptido carboxiterminal derivado de alfa1-antitripsina.

4. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el trasplante no orgánico comprende trasplante celular de islotes pancreáticos.

5. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde el fragmento de alfa1-antitripsina comprende uno o

varios péptidos de aminoácidos carboxiterminales correspondientes al carboxiterminal de alfa1-antitripsina seleccionado del grupo que consiste en AGAMFLEAIP (SEQ. ID NO. 56) ; MSIPPEVKFN (SEQ. ID NO. 57) ; KPFVFLMIEQ (SEQ. ID NO. 58) ; y NTKSPLFMGK (SEQ. ID NO. 59) .

6. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el compuesto comprende FVFLM (SEQ ID NO. 1) o análogo de FVFLM (SEQ ID NO. 1) o una combinación de ellos.

7. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde AAT o péptido de aminoácido carboxiterminal correspondiente a alfa1-antitripsina es una parte de un polipéptido de fusión.

8. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde AAT o péptido de aminoácido carboxiterminal correspondiente a alfa1-antitripsina se fusiona con una región constante de inmunoglobulina.