Hidrolizados de proteínas de la leche con potencial inmunogénico reducido.

Hidrolizado que comprende al menos una proteína de la leche hidrolizada con al menos una enzima proteolítica que escinde preferencialmente en un residuo de ácido glutámico o ácido aspártico y que escinde uno o más determinantes inmunológicos presentes en la proteína,

comprendiendo el hidrolizado al menos una beta lactoglobulina hidrolizada en la región entre los aminoácidos 55-98, teniendo el hidrolizado inmunogenicidad reducida en un sujeto predispuesto a tener una reacción inmunitaria a la proteína y en el que el hidrolizado está enriquecido en al menos el péptido AQSAPLRVYVE (SEQ ID NO. 1), en el que al menos una enzima proteolítica es una endopeptidasa y en el que la endopeptidasa no es una que tiene la secuencia de aminoácidos **Tabla**

Hidrolizados de proteínas de la leche con potencial inmunogénico reducido

Campo de la invención 5

Esta invención se refiere a composiciones que contienen proteínas de la leche y/o proteínas del suero de la leche hidrolizadas y a métodos para prepararlas. También se dan a conocer hidrolizados proteolíticos de tales proteínas que tienen potencial inmunogénico reducido para su uso en aplicaciones en las que existe riesgo de respuesta inmunológica indeseable a las proteínas. 10

Antecedentes

La leche es un producto usado ampliamente no sólo como bebida nutritiva en su forma líquida, sino también como base para otros numerosos productos tales como helado, yogur, mantequilla, nata y queso. Además, la leche y los 15 componentes de la misma se usan ampliamente como componentes nutricionales y funcionales en muchos productos alimenticios.

El suero de la leche es un subproducto de la producción de queso. El suero de la leche se ha convertido en un componente o aditivo alimenticio útil para diversos fines. Un procedimiento típico de producción de queso puede 20 producir sólo aproximadamente 10 libras de queso, pero 90 libras de suero de la leche por cada 100 libras de leche procesada. El suero de la leche es rico en lactosa, un azúcar de la leche que se produce de manera natural, y también contiene varias proteínas que no coagulan ni precipitan durante el procedimiento de elaboración del queso, sino que más bien permanecen solubles. Se sabe que las proteínas del suero de la leche son altamente nutritivas y por tanto pueden ser valiosas, pero están presentes en una disolución acuosa diluida de sales, lactosa, proteínas y 25 algunos lípidos.

Por su naturaleza diluida, en algunos lugares el suero de la leche todavía se trata frecuentemente como un producto de desecho o efluente, a pesar del gasto de su eliminación. Cuando es económicamente viable, el suero de la leche frecuentemente se seca por pulverización o se procesa adicionalmente para separar las proteínas y/o la lactosa del 30 agua y entre sí.

El suero de la leche o diversos componentes del mismo, puede añadirse a una gran variedad de alimentos procesados para proporcionar excelentes propiedades nutricionales y funcionales tanto para el que procesa como para el consumidor. 35

Las proteínas del suero de la leche pueden comprender aproximadamente el 20% de las proteínas de la leche totales. La composición del suero de la leche que se deriva tras “cuajar” durante la producción de queso incluye proteínas, junto con la lactosa, grasa y ceniza (2-5%) . Lactoalbúmina y lactoglobulina son dos proteínas de la leche prominentes en el suero de la leche. Se ha notificado que cada una de estas proteínas, así como otras proteínas que 40 se encuentran en la leche, tiene potencial inmunogénico, por ejemplo como alérgenos. Debido a que estas proteínas son inmunógenos potenciales o incluso alérgenos, determinados consumidores pueden evitar el uso de productos alimenticios y/o cosméticos que contienen leche, suero de la leche o componentes de los mismos, por ejemplo las proteínas del suero de la leche lactoalbúmina y lactoglobulina. En algunas circunstancias, el profesional médico puede aconsejar a determinados consumidores que eviten productos que contienen proteínas de la leche o del 45 suero de la leche. Por tanto, existe una necesidad continua de reducir el potencial inmunogénico de las proteínas de la leche y proteínas del suero de la leche.

Sumario En varios de sus diversos aspectos, se proporcionan composiciones y métodos para usar composiciones con un contenido en proteínas de la leche y/o proteínas del suero de la leche hidrolizadas que se hidrolizan con una o más enzimas proteolíticas para reducir el riesgo de respuesta inmunológica, particularmente respuesta inmunológica adversa, a las proteínas, en una persona predispuesta a tal respuesta.

En un aspecto, se proporcionan hidrolizados que comprenden al menos una proteína de la leche hidrolizada con al menos una enzima proteolítica que escinde preferencialmente en un residuo de ácido glutámico o ácido aspártico y que deja uno o más determinantes inmunológicos presentes en la proteína, comprendiendo el hidrolizado al menos una beta lactoglobulina hidrolizada en la región entre los aminoácidos 55-98, teniendo el hidrolizado inmunogenicidad reducida en un sujeto predispuesto a tener una reacción inmunitaria a la proteína y en el que el 60 hidrolizado está enriquecido en al menos el péptido AQSAPLRVYVE (SEQ ID NO: 1) , en el que al menos una enzima proteolítica es una endopeptidasa y en el que la endopeptidasa no es una que tiene la secuencia de aminoácidos

En una realización, la endopeptidasa escinde en el lado carboxilo terminal de un residuo de ácido glutámico o un residuo de ácido aspártico. En una realización, la endopeptidasa es de un Streptomyces, Staphylococcus o un Bacillus. 5

En otra realización de este aspecto, la proteína a partir de la cual se produce el hidrolizado es una proteína del suero de la leche, o comprende al menos una de una lactoalbúmina o una lactoglobulina, tal como una alfa lactoalbúmina o una beta lactoglobulina. En otro aspecto, se proporcionan hidrolizados según la reivindicación 4.

El hidrolizado está enriquecido preferiblemente en péptidos que terminan en un residuo de ácido glutámico o ácido aspártico, en comparación con la proteína no hidrolizada. En una realización, el hidrolizado está enriquecido en uno o más de los péptidos ILLQKWE (SEQ ID NO: 2) , KTKIPAVFKID (SEQ ID NO: 3) o KTKIPAVFKIDALNE (SEQ ID NO: 4) . En otras realizaciones, está enriquecido en uno o más de los péptidos ELEE (SEQ ID NO: 5) , VATEE (SEQ ID NO: 6) , PFTE (SEQ ID NO: 7) , NSAEPE (SEQ ID NO: 8) , VFGKE (SEQ ID NO: 9) , AQSAPLRVYVE (SEQ ID NO: 15 1) , ILLQKWE (SEQ ID NO: 2) , KTKIPAVFKID (SEQ ID NO: 3) , KTKIPAVFKIDALNE (SEQ ID NO: 4) , IQPTPE (SEQ ID NO: 10) , LKPTPE (SEQ ID NO: 11) , LKPTPEGD (SEQ ID NO: 12) , LKPTPEGDLE (SEQ ID NO: 13) , TKIPAVFKID (SEQ ID NO: 14) o TKIPAVFKIDALNE (SEQ ID NO: 15) y/o una o más de DQAME (SEQ ID NO: 16) , GIHAQQKE (SEQ ID NO: 17) , VLNE (SEQ ID NO: 18) , VFGKE (SEQ ID NO: 19) , RLHSMKE (SEQ ID NO: 20) , DIKQME (SEQ ID NO: 21) , KHPIKHQGLPQE (SEQ ID NO: 22) , RPKHPIKHQGLPQE (SEQ ID NO: 23) , PMIGVNQE (SEQ ID NO: 24) , 20 GIHAQQKEPMEGVNQE (SEQ ID NO: 25) , RYLGYLE (SEQ ID NO: 26) , LAYFYPE (SEQ ID NO: 27) , FVAPFPE (SEQ ID NO: 28) , KTTMPLW (SEQ ID NO: 29) , LFRQFYQLD (SEQ ID NO: 30) , FFVAPFPE (SEQ ID NO: 31) , NLLRFFVAPFPE (SEQ ID NO: 32) o ENLLRFFVAPFPE (SEQ ID NO: 33) .

En el presente documento también se proporcionan hidrolizados que contienen proteínas del suero de la leche 25 enriquecidos en AQSAPLRVYVE (SEQ ID NO: 1) , preferiblemente también enriquecidos en uno o más de los péptidos: ELEE (SEQ ID NO: 5) , VATEE (SEQ ID NO: 6) , PFTE (SEQ ID NO: 7) , NSAEPE (SEQ ID NO: 8) , VFGKE (SEQ ID NO: 9) , ILLQKWE (SEQ ID NO: 2) , KTKIPAVFKID (SEQ ID NO: 3) , KTKIPAVFKIDALNE (SEQ ID NO: 4) , IQPTPE (SEQ ID NO: 10) , LKPTPE (SEQ ID NO: 11) , LKPTPEGD (SEQ ID NO: 12) , LKPTPEGDLE (SEQ ID NO: 13) , KTKIPAVFKID (SEQ ID NO: 14) o KTKIPAVFKIDALNE (SEQ ID NO: 15) . Los hidrolizados de proteínas del 30 suero de la leche tienen inmunogenicidad reducida en un sujeto predispuesto a tener una reacción inmunitaria a una o más proteínas del suero de la leche.

En una realización, el hidrolizado que contiene proteínas del suero de la leche está preferencialmente enriquecido en uno o más de los péptidos ILLQKWE (SEQ ID NO: 2) , KTKIPAVFKID (SEQ ID NO: 3) o TKIPAVFKIDALNE (SEQ ID 35 NO: 4) . El hidrolizado de este aspecto se produce a través del uso de una endopeptidasa que escinde preferencialmente en el lado carboxilo terminal de un residuo de ácido glutámico o un residuo de ácido aspártico. En una realización, la endopeptidasa no requiere un ión metálico para su actividad.

En el presente documento también se proporcionan componentes alimenticios que comprenden un hidrolizado de 40 proteínas del suero de la leche enriquecido en AQSAPLRVYVE (SEQ ID NO: 1) , preferiblemente enriquecido en uno o más de los péptidos ILLQKWE (SEQ ID NO: 2) , KTKIPAVFKID (SEQ ID NO: 3) o KTKIPAVFKIDALNE (SEQ ID NO: 4) . Los componentes alimenticios proporcionados tienen inmunogenicidad reducida en un sujeto predispuesto a tener una reacción inmunitaria a una o más proteínas del suero de la leche.

En el presente documento también se proporcionan productos alimenticios fabricados que comprenden un hidrolizado de proteínas del suero de la leche enriquecido en AQSAPLRVYVE (SEQ ID NO: 1) , preferiblemente enriquecido en uno o más de los péptidos ILLQKWE (SEQ ID NO: 2) , KTKIPAVFKID (SEQ ID NO: 3) o KTKIPAVFKIDALNE (SEQ ID NO: 4) . Los productos... [Seguir leyendo]

1. Hidrolizado que comprende al menos una proteína de la leche hidrolizada con al menos una enzima proteolítica que escinde preferencialmente en un residuo de ácido glutámico o ácido aspártico y que escinde uno o más determinantes inmunológicos presentes en la proteína, comprendiendo el hidrolizado al menos una beta 5 lactoglobulina hidrolizada en la región entre los aminoácido.

5. 98, teniendo el hidrolizado inmunogenicidad reducida en un sujeto predispuesto a tener una reacción inmunitaria a la proteína y en el que el hidrolizado está enriquecido en al menos el péptido AQSAPLRVYVE (SEQ ID NO. 1) , en el que al menos una enzima proteolítica es una endopeptidasa y en el que la endopeptidasa no es una que tiene la secuencia de aminoácidos

2. Hidrolizado según la reivindicación 1, en el que la endopeptidasa escinde preferencialmente en el lado carboxilo terminal de un residuo de ácido glutámico o un residuo de ácido aspártico.

3. Hidrolizado según la reivindicación 2, en el que la endopeptidasa es el número de registro principal P39790 de UniProtKB/Swiss-Prot.

4. Hidrolizado que comprende al menos una proteína de la leche hidrolizada con al menos una enzima proteolítica que escinde preferencialmente en un residuo de ácido glutámico o ácido aspártico, en el que la enzima proteolítica 20 es la endopeptidasa de número de registro principal P39790 de UniProtKB/Swiss-Prot, teniendo el hidrolizado inmunogenicidad reducida en un sujeto predispuesto a tener una reacción inmunitaria a la proteína y en el que el hidrolizado está enriquecido en al menos el péptido AQSAPLRVYVE (SEQ ID NO: 1) .

5. Hidrolizado según una cualquiera de las reivindicaciones 3-4 en el que la endopeptidasa se inhibe por fluoruro de 25 fenilmetilsulfonilo o fluorofosfato de diisopropilo.

6. Hidrolizado según la reivindicación 1, en el que la proteína es una proteína soluble, no micelar.

7. Hidrolizado según la reivindicación 6, en el que la proteína es proteína del suero de la leche. 30

8. Hidrolizado según la reivindicación 7, en el que la endopeptidasa no requiere un ión metálico para su actividad.

9. Hidrolizado según la reivindicación 7, en el que la proteína incluye al menos una lactoalbúmina, preferiblemente una alfa lactoalbúmina. 35

10. Hidrolizado según la reivindicación 9, en el que la proteína es al menos una de una lactoalbúmina o una lactoglobulina, preferiblemente una alfa lactoalbúmina o una beta lactoglobulina.

11. Hidrolizado según la reivindicación 10, en la que el hidrolizado está enriquecido en uno o más de los péptidos 40 ILLQKWE (SEQ ID NO: 2) , KTKIPAVFKID (SEQ ID NO: 3) o KTKIPAVFKIDALNE (SEQ ID NO: 4) .

12. Hidrolizado según la reivindicación 1, que está enriquecido en péptidos que terminan en un residuo de ácido glutámico o ácido aspártico, en comparación con la proteína no hidrolizada.

13. Hidrolizado según la reivindicación 12, que está enriquecido en uno o más de los péptidos ELEE (SEQ ID NO: 5) , VATEE (SEQ ID NO: 6) , PFTE (SEQ ID NO: 7) , NSAEPE (SEQ ID NO: 8) , VFGKE (SEQ ID NO: 9) , ILLQKWE (SEQ ID NO: 2) , KTKIPAVFKID (SEQ ID NO: 3) , KTKIPAVFKIDALNE (SEQ ID NO: 4) , IQPTPE (SEQ ID NO: 10) , LKPTPE (SEQ ID NO: 11) , LKPTPEGD (SEQ ID NO: 12) , LKPTPEGDLE (SEQ ID NO: 13) , TKIPAVFKID (SEQ ID NO: 14) o TKIPAVFKIDALNE (SEQ ID NO: 15) . 50

14. Hidrolizado según la reivindicación 12, que está enriquecido en uno o más de los péptidos DQAME (SEQ ID NO: 16) , GIHAQQKE (SEQ ID NO: 17) , VLNE (SEQ ID NO: 18) , VFGKE (SEQ ID NO: 19) , RLHSMKE (SEQ ID NO: 20) , DIKQME (SEQ ID NO: 21) , KHPIKHQGLPQE (SEQ ID NO: 22) , RPKHPIKHQGLPQE (SEQ ID NO: 23) , PMIGVNQE (SEQ ID NO: 24) , GIHAQQKEPMEGVNQE (SEQ ID NO: 25) , RYLGYLE (SEQ ID NO: 26) , LAYFYPE (SEQ ID NO: 55 27) , FVAPFPE (SEQ ID NO: 28) , KTTMPLW (SEQ ID NO: 29) , LFRQFYQLD (SEQ ID NO: 30) , FFVAPFPE (SEQ ID NO: 31) , NLLRFFV APFPE (SEQ ID NO: 32) o ENLLRFFVAPFPE (SEQ ID NO: 33) .

15. Hidrolizado que contiene proteínas del suero de la leche que está enriquecido en AQSAPLRVYVE (SEQ ID NO: 1) .

16. Hidrolizado que contiene proteínas del suero de la leche según la reivindicación 15, en el que el hidrolizado está 5 enriquecido en uno o más de los péptidos ILLQKWE (SEQ ID NO: 2) , KTKIPAVFKID (SEQ ID NO: 3) o KTKIPAVFKIDALNE (SEQ ID NO: 4) .

17. Componente alimenticio que comprende un hidrolizado de proteínas del suero de la leche enriquecido en AQSAPLRVYVE (SEQ ID NO: 1) que tiene inmunogenicidad reducida en un sujeto predispuesto a tener una 10 reacción inmunitaria a una o más proteínas del suero de la leche.

18. Componente alimenticio según la reivindicación 17, en el que el hidrolizado está enriquecido en uno o más de los péptidos ILLQKWE (SEQ ID NO: 2) , KTKIP A VFKID (SEQ ID NO: 3) o KTKIPAVFKIDALNE (SEQ ID NO: 4) .

19. Producto alimenticio fabricado que comprende un hidrolizado de proteínas del suero de la leche enriquecido en AQSAPLRVYVE (SEQ ID NO: 1) que tiene inmunogenicidad reducida en un sujeto predispuesto a tener una reacción inmunitaria a una o más proteínas del suero de la leche.

20. Producto alimenticio fabricado según la reivindicación 19, en el que el hidrolizado está enriquecido en uno o más 20 de los péptidos ILLQKWE (SEQ ID NO: 2) , KTKIPAVFKID (SEQ ID NO: 3) o KTKIPAVFKIDALNE (SEQ ID NO: 4) .

21. Producto alimenticio fabricado según la reivindicación 19 o la reivindicación 20, que es una preparado para lactantes, una bebida para deportistas, un producto que contiene queso, un complemento proteico, un complemento nutricional o un producto sustituto de comida. 25

22. Producto no alimenticio que comprende el hidrolizado según la reivindicación 1 o la reivindicación 4, en el que el producto no alimenticio es un cosmético, una loción o un limpiador para su uso en piel humana.

23. Producto no alimenticio que comprende un hidrolizado que comprende al menos una de proteína de la leche 30 hidrolizada con al menos una enzima proteolítica que escinde preferencialmente en un residuo de ácido glutámico o ácido aspártico, comprendiendo el hidrolizado al menos una beta-lactoglobulina hidrolizada en la región entre los aminoácido.

5. 98, teniendo el hidrolizado inmunogenicidad reducida en un sujeto predispuesto a tener una reacción inmunitaria a la proteína y en el que el hidrolizado está enriquecido en al menos el péptido AQSAPLRVYVE (SEQ ID NO: 1) . 35

24. Producto no alimenticio según la reivindicación 22 o la reivindicación 23, que comprende un hidrolizado de proteínas del suero de la leche enriquecido en uno o más de los péptidos AQSAPLRVYVE (SEQ ID NO: 1) , ILLQKWE (SEQ ID NO: 2) , KTKIPAVFKID (SEQ ID NO: 3) o KTKIPAVFKIDALNE (SEQ ID NO: 4) , que tiene inmunogenicidad reducida en un sujeto predispuesto a tener una reacción inmunitaria a una o más proteínas del 40 suero de la leche.

25. Composición que comprende al menos dos hidrolizados según la reivindicación 1 o la reivindicación 4, en la que cada hidrolizado se produce con al menos una enzima diferente que tiene una especificidad diferente.

26. Hidrolizado según la reivindicación 2, en el que la al menos una enzima proteolítica comprende una endopeptidasa adicional.

27. Hidrolizado según la reivindicación 26, en el que la endopeptidasa adicional es el número de registro principal P80057 de UniProtKB/Swiss-Prot. 50

28. Uso de al menos una enzima proteolítica que escinde preferencialmente en un residuo de ácido glutámico o ácido aspártico y que escinde uno o más determinantes inmunológicos presentes en al menos una proteína de la leche y en el que dicha al menos una enzima proteolítica es una endopeptidasa y en el que la endopeptidasa no es una que tiene la secuencia de aminoácidos 55

en la fabricación de un hidrolizado que comprende al menos una proteína de la leche hidrolizada con al menos una enzima proteolítica cuyo hidrolizado comprende al menos una beta lactoglobulina hidrolizada en la región entre los aminoácido.

5. 98 y en la que el hidrolizado está enriquecido en al menos el péptido AQSAPLRVYVE (SEQ ID NO: 1) para reducir la inmunogenicidad en un sujeto predispuesto a tener una reacción inmunitaria a la proteína.