Formulación de anticuerpo.

Una formulación que se encuentra en forma liofilizada y comprende:

10 mg/ml del anticuerpo B-Ly 1 humanizado 5 comprendiendo VHB-HH6 y VL B-KV1 de la patente WO2005/044859,

0,02% de polisorbato 20 p/v,

20 mM de L-histidina y

240 mM de trehalosa,

de pH 6,0.

La presente invención se refiere a una formulación de anticuerpo monoclonal anti-CD2, a un proceso para fabricar dicha formulación y a los usos de la formulación.

Antecedentes de la invención

La molécula CD2 (también llamada antígeno de diferenciación restringida del linfocito B humano o Bp35) es una proteína transmembrana hidrófoba de un peso molecular aproximadamente de 35 kD ubicada en linfocitos pre-B y B maduros (Valentine y col., J. Biol. Chem. 264(19), 11282-11287, 1989; y Einfield, D.A. y col., EMBOJ. 7(3), 711-717, 1988). La CD2 se halla en la superficie de más del 9% de células B de la sangre periférica u órganos linfoides, se expresa durante el desarrollo temprano de las células pre-B y se conserva hasta la diferenciación celular plasmática. La CD2 está presente tanto en las células B normales como en las células B malignas. En particular, la CD2 se expresa en más del 9% de los linfomas no de Hodgkln (NHL) de células B (Anderson y col., Blood 63(6). 1424- 1433, 1984) pero no se halla en células germinales hematopoyétlcas, células pro-B, células plasmáticas normales u otros tejidos normales (Tedder y col., J. Immunol. 135(2). 973- 979, 1985).

La región carboxil-termlnal de 85 aminoácidos de la proteína CD2 está situada dentro del citoplasma. La longitud de esta región contrasta con la de otras estructuras de superficie específica de células B, como son las cadenas largas de IgM, IgD e IgG o las cadenas de la clase 11 a o G de los antígenos de hlstocompatlbllldad, que tienen regiones intracitoplasmáticas relativamente cortas de 3, 3, 28, 15 y 16 aminoácidos, respectivamente (Komaromy y col., NAR 11, 6775-6785, 1983). De los últimos 61 aminoácidos del extremo carboxllo, 21 son restos ácidos, mientras que solo 2 son básicos, lo cual indica que esta región tiene una fuerte carga negativa. El número de registro del GenBank es NP-6965. Se ha pensado que la CD2 podría Intervenir en la regulación de uno o varios pasos tempranos del proceso de activación y diferenciación de las células B (Tedder y col., Eur. J. Immunol. 25 vol. 16, 881-887, 1986) y podría funcionar como canal de Iones calcio (Tedder y col., J. Cell. Blochem. 14D, 195, 199).

Existen dos tipos diferentes de anticuerpos anti-CD2 que difieren significativamente en su modo de fijarse sobre la CD2 y en sus actividades biológicas (Cragg, M.S. y col., Blood 13. 2738-2743, 24; y Cragg, M.S. y col., Blood 11. 145-152, 23). Los anticuerpos de tipo I, como el rltuxlmab, son potentes en cltotoxlcldad mediada de complemento, mientras que los anticuerpos de tipo II, como el tositumomab (Bexxar®, B1), 11B8 y AT8, inician eficazmente la muerte de las células diana a través de la apóptosis independiente de caspasa con exposición concomitante a la fosfatidilserina.

Los rasgos comunes que comparten los anticuerpos anti-CD2 de tipo I y de tipo II se resumen en la Tabla 1.

Tabla 1: Propiedades de los anticuerpos anti-CD2 de tipo I y tipo II

Descripción detallada de la invención

El término anticuerpo abarca las diversas formas de anticuerpos que incluyen, pero no se limitan a: los anticuerpos enteros, los anticuerpos humanos, los anticuerpos humanizados y los anticuerpos obtenidos por ingeniería genética, por ejemplo los anticuerpos monoclonales, los anticuerpos quiméricos o los anticuerpos recombinantes así como los fragmentos de dichos anticuerpos en el supuesto de que conserven las propiedades características según la invención.

Los fragmentos de anticuerpo comprenden una porción de un anticuerpo de longitud completa, en general por lo menos la porción de fijación al antígeno o la región variable de la misma. Los ejemplos de fragmento de anticuerpos incluyen a los diacuerpos (diabodies), moléculas de anticuerpo de cadena simple, inmunotoxinas y anticuerpos multiespecíficos formados con fragmentos de anticuerpos. Además, los fragmentos de anticuerpo comprenden a los polipéptidos de cadena simple que tienen las características de una cadena VH, a saber, que son capaces de ensamblarse con una cadena VL o de una cadena VL que se fija sobre el antígeno CD2, a saber, que es capaz de ensamblarse con una cadena VH para formar una bolsa funcional de fijación sobre el antígeno.

Los fragmentos de anticuerpo abarcan también a los fragmentos que de por sí no son capaces de aportar funciones efectoras (ADCC/CDC), pero que proporcionan esta función de una manera según la invención después de haberse combinado con dominio(s) constante(s) de anticuerpos apropiados.

Los términos anticuerpo monoclonal o composición de anticuerpo monoclonal tal como se emplean aquí indican una preparación de moléculas de anticuerpo de una composición única de aminoácidos. Por consiguiente, el término anticuerpo monoclonal humano indica anticuerpos que presentan una especificidad de fijación única, que tienen regiones variables y constantes derivadas de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana. En una forma de ejecución, los anticuerpos monoclonales humanos se producen en un hibridoma que incluye una célula B obtenida de un animal transgénico no humano, p.ej. un ratón transgénico, que tiene un genoma que contiene un transgén de cadena larga humano y un transgén de cadena corta humano fusionados en una célula inmortalizada.

El término anticuerpo quimérico indica un anticuerpo monoclonal que contiene una región variable, es decir, una región de fijación, de una fuente o especie y por lo menos una porción de una región constante derivada de una fuente o especie diferente, que se obtiene habitualmente por técnicas de DNA recombinante. Son especialmente preferidos los anticuerpos quiméricos que tienen una región variable murina y una región constante humana. Tales anticuerpos quiméricos murino/humanos son el producto de genes de inmunoglobulina expresada que contienen segmentos de DNA que codifican a las regiones variables de inmunoglobulina murina y segmentos de DNA que codifican a las regiones constantes de inmunoglobulina humana. Otras formas de anticuerpos quiméricos abarcados por la presente invención son aquellas, en las que la clase o subclase se ha modificado o cambiado con respecto a la del anticuerpo original. Tales anticuerpos quiméricos se denominan también anticuerpos de clase modificada. Los métodos para la obtención de anticuerpos quiméricos incluyen las técnicas convencionales de DNA recombinante y las técnicas de transfección genética, ahora ya bien conocidas en la técnica, véase, p.ej. Morrison, S.L. y col., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 81, 6851-6855, 1984; US-5,22,238 y US-5,24,244.

El término anticuerpo humanizado indica anticuerpos en los que la estructura o las regiones determinantes de complementariedad (CDR) se han modificado para incluir a las CDR de una inmunoglobulina de diferentes especificidad si se compara con la de la inmunoglobulina original. En una forma preferida de ejecución se injerta una CDR murina en una región estructural de un anticuerpo humano para obtener el anticuerpo humanizado, véase, p.ej., Riechmann, L. y col., Nature 332, 323-327, 1988; y Neuberger, M.S. y col., Nature 314, 268-27, 1985. Las CDR especialmente preferidas corresponden a las que representan secuencias que reconocen a los antígenos mencionados anteriormente para los anticuerpos quiméricos y bifuncionales.

El término anticuerpo humano, tal como se emplea aquí incluye a los anticuerpos que tienen regiones variables y constantes derivadas de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana. Los anticuerpos humanos son bien conocidos en el estado de la técnica (van Dijk, M.A. y van de Winkel, J.G., Curr. Opin. in Chemical Biology 5, 368-374, 21). En base a esta tecnología se pueden producir anticuerpos humanos contra una gran variedad de dianas. Se describen ejemplos de anticuerpos humanos por ejemplo en... [Seguir leyendo]

1. Una formulación que se encuentra en forma liofilizada y comprende:

mg/ml del anticuerpo B-Ly 1 humanizado comprendiendo VHB-HH6 y VL B-KV1 de la patente W25/44859, ,2% de polisorbato 2 p/v,

mM de L-histidina y 24 mM de trehalosa, de pH 6,.

2. Una formulación que comprende:

mg/ml del anticuerpo B-Ly 1 humanizado comprendiendo VHB-HH6 y VL B-KV1 de la patente W25/44859, ,2% de Poloxamer 188 p/v,

mM de L-histidina y 24 mM de trehalosa, de pH 6,; o bien

mg/ml del anticuerpo B-Ly 1 humanizado comprendiendo VHB-HH6 y VL B-KV1 de la patente W25/44859, ,1% de Poloxamer 188 p/v,

mM de L-histidina y 24 mM de trehalosa, de pH 6,; o bien

mg/ml de del anticuerpo B-Ly 1 humanizado comprendiendo VHB-HH6 y VL B-KV1 de la patente W25/44859,

,1% de Poloxamer 188 p/v,

mM de L-histidina y 24 mM de trehalosa, de pH 6,; o bien

mg/ml del anticuerpo B-Ly 1 humanizado comprendiendo VHB-HH6 y VL B-KV1 de la patente W25/44859, ,2% de Polisorbato 8 p/v,

mM de L-histidina y 24 mM de trehalosa, de pH 6,; o bien

mg/ml del anticuerpo B-Ly 1 humanizado comprendiendo VHB-HH6 y VL B-KV1 de la patente W25/44859, ,1% de Poloxamer 188 p/v,

mM de L-histidina y 2 mM de trehalosa, de pH 6,5.

3. La formulación según la reivindicación 2, que se presenta en forma líquida y contiene:

mg/ml del anticuerpo B-Ly 1 humanizado comprendiendo VHB-HH6 y VL B-KV1 de la patente W25/44859, ,2% de Poloxamer 188 p/v,

mM de L-histidina y 24 mM de trehalosa, de pH 6,.

4. Uso de una formulación según una cualquiera de las reivindicaciones de 1 a 3 para la fabricación de un medicamento útil para tratar enfermedades relacionadas con la CD2.

5. El uso según la reivindicación 4, en donde la enfermedad se elige del grupo constituido por linfoma no de Hodgkin de células B (NHL), linfoma de células de manto (MCL), leucemia linfocítica aguda (ALL), leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma difuso de células B grandes (DLCL), linfoma de Burkitt, leucemia de células vellosas, linfoma folicular, mieloma múltiple, linfoma de zona marginal, trastorno linfoproliferativo post-transplante (PTLD), linfoma asociado al VIH, macrobulinemia de Waldenstron y linfoma primario del SNC.