Expresión híbrida y en tandem de proteínas de Neisseria.

Una proteína de N.meningitidis que comprende:

(a) la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:

19; o

(b) una proteína que tiene un 80% o más de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 19

para su uso en la prevención y/o tratamiento de meningitis bacteriana.

CAMPO TÉCNICO

Esta invención está en el campo de la expresión de proteínas. En particular, se refiere a la expresión de proteínas de Neisseria (por ejemplo, N. gonorrhoeae o, preferiblemente, N. meningitidis) .

TÉCNICA ANTECEDENTE

Las referencias 1 y 2 describen planteamientos alternativos y mejorados para la expresión de proteínas de Neisseria desveladas en las referencias 3 a 6. Uno de tales procedimientos es para producir proteínas híbridas en las que dos o más proteínas de Neisseria se expresan como una única cadena polipeptídica. Este planteamiento ofrece dos ventajas. Primero, una proteína que puede ser inestable o escasamente expresada sobre sí mismo se puede asistir mediante la adición de una pareja híbrida adecuada que vence el problema. Segundo, la fabricación comercial se simplifica ya que solamente se necesita emplear una expresión y purificación con el fin de producir dos proteínas útiles separadamente.

Es un objeto de la presente invención proporcionar además planteamientos alternativos y mejorados para la expresión de proteínas de Neisseria.

DIVULGACIÓN DE LA INVENCIÓN

El listado de secuencias de la presente incluye formas polimórficas de proteínas 741 (SEQ IDs 1-22) que se han identificado.

Secuencias La invención proporciona una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos de las SEO ID 1 a 22. También proporciona proteínas y ácido nucleicos que tienen identidad de secuencia a éstas. El grado de 'identidad de secuencia' es preferiblemente mayor del 50%, (por ejemplo, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% o mayor) .

La identidad se determina preferiblemente por el algoritmo de búsqueda Smith-Waterman como está implementado en el Programa MPSRCH (Oxford Molecular) , usando una búsqueda de huecos afines con parámetros penalización de apertura de hueco = 12 y penalización de extensión de hueco = 1. Típicamente, un 50% de identidad o más entre dos proteínas se considera una indicación de equivalencia funcional.

La invención también proporciona ácido nucleico que codifica tales proteínas.

Además, la invención proporciona ácido nucleico que puede hibridar con este ácido nucleico, preferiblemente bajo condiciones de "alta rigurosidad" (por ejemplo 65º C en una solución 0, 1SSC, 0, 5% SDS) .

La invención también proporciona ácido nucleico que codifica proteínas de acuerdo con la invención.

Se debe también apreciar que la invención proporciona ácido nucleico que comprende secuencias complementarias a las descritas anteriormente (por ejemplo, para propósitos no codificantes o de sonda) .

Ã?cido nucleico de acuerdo con la invención puede, de hecho, prepararse de muchas formas (por ejemplo, mediante síntesis química, de genotecas genómicas o de ADNc, de los propios organismos etc.) y puede tomar diversas formas (por ejemplo, vectores, sondas de una sola cadena, de doble cadena, etc.) .

Además, el término "ácido nucleico" incluye ADN y ARN, y también sus análogos, tales como los que contienen estructuras centrales modificadas, y también ácidos nucleicos peptídicos (PNA) etc.

Huésped heterólogo Aunque la expresión de las proteínas de la invención puede tener lugar en Neisseria., la presente invención preferiblemente utiliza un huésped heterólogo. El huésped heterólogo puede ser procariótico (por ejemplo, una bacteria) o eucariótico. Es preferiblemente E.coli, pero otros huésped adecuados incluyen Bacillus subtilis, Vibrio cholerae, Salmonella typhi, Salmonella typhimurium, Neisseria lactamica, Neisseria cinerea, Mycobacteria (por ejemplo, M. tuberculosis) , levaduras etc.

Vectores etc.

La invención proporciona (a) ácido nucleico que codifica la proteína como se ha descrito anteriormente (b) vectores que comprenden estas secuencias de ácido nucleico (c) células huésped que contienen dichos vectores (d) composiciones que comprenden las proteínas o ácidos nucleicos de la invención, que pueden ser adecuados como composiciones no inmunogénicas (por ejemplo, vacunas) o como reactivos de diagnóstico (e) estas composiciones para uso como medicamentos (por ejemplo, como vacunas) o como reactivos de diagnóstico (f) el uso de estas composiciones en la fabricación de (1) un medicamento para tratar o prevenir la infección debida a bacterias de Neisseria (2) un reactivo de diagnóstico para detectar la presencia de bacterias de Neisseria o de anticuerpos inducidos contra bacterias de Neisseria, y / o (3) un reactivo que puede inducir anticuerpos contra bacterias de Neisseria y (g) un procedimiento de tratamiento de un paciente, que comprende la administración al paciente de una cantidad terapéuticamente eficaz de estas composiciones.

La implementación de la invención típicamente implicará las etapas básicas de: obtención de un primer ácido nucleico que codifica una primera proteína; obtención un segundo ácido nucleico que codifica una segunda proteína; y liga al primer y segundo ácidos nucleicos. El ácido nucleico resultante se puede insertar en un vector de expresión, o puede ser ya parte de un vector de expresión.

Para mejorar la solubilidad, la purificación de las proteínas híbridas pueden implicar las técnicas de replegado descritas en el presente documento.

Composiciones inmunogénicas y medicamentos Las composiciones de la invención son preferiblemente composición inmunogénica, y son más preferiblemente composiciones de vacuna. El pH de la composición está preferiblemente entre 6 y 7. El pH se puede mantener mediante el uso de un tampón. La composición puede ser estéril.

Las vacunas de acuerdo con la invención pueden ser o bien profilácticas (es decir, para prevenir la infección) o terapéuticas (es decir, para tratar la infección) , pero típicamente serán profilácticas.

La invención también proporciona una composición de la invención para uso como un medicamento. El medicamento es preferiblemente capaz de inducir una respuesta inmune en un mamífero (es decir, es una composición inmunogénica) y es más preferiblemente una vacuna.

La invención también proporciona el uso de una composición de la invención en la fabricación de un medicamento para inducir una respuesta inmune en un mamífero. El medicamento es preferiblemente una vacuna.

La invención también proporciona un procedimiento para inducir una respuesta inmune en un mamífero que comprende la etapa de administrar una cantidad eficaz de una composición de la invención. La respuesta inmune es preferiblemente protectora. El procedimiento puede inducir una respuesta de recuerdo.

El mamífero es preferiblemente un ser humano. Cuando la vacuna es para uso profiláctico, el ser humano es preferiblemente un niño (por ejemplo, a niño pequeño o bebé) ; cuando la vacuna es para uso profiláctico, el ser humano es preferiblemente un adulto. Una vacuna propuesta para niños también se puede administrar a adultos por ejemplo, para evaluar seguridad, dosificación, inmunogenicidad, etc.

Estos usos y procedimientos son preferiblemente para la prevención y / o tratamiento de una enfermedad provocada por una Neisseria (por ejemplo, meningitis, septicemia, gonorrea etc.) . La prevención y / o tratamiento de meningitis bacteriana se prefiere.

Componentes adicionales de la composición La composición de la invención típicamente, además de los componentes mencionados anteriormente, comprenderán uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, que incluye cualquier vehículo que él mismo no induce la producción de anticuerpos perjudiciales para el individuo que recibe la composición. Los vehículos adecuados son típicamente macromoléculas grandes, metabolizadas lentamente tales como proteínas, polisacáridos, ácidos polilácticos, ácidos poliglicólicos, aminoácidos poliméricos, copolímeros de aminoácidos, trehalosa (documento WO00/56365) y agregados lipídicos (tales como gotitas de aceite o liposomas) . Tales vehículos son bien conocidos por los expertos en la técnica Las vacunas también pueden contener diluyentes, tales como agua, solución salina, glicerol, etc. De manera adicional, pueden estar presentes sustancias auxiliares, tales como agentes humectantes y emulsionantes, sustancias de tamponación de pH, y similares. Una descripción completa de excipientes farmacéuticamente aceptables está disponible en Remington's Pharmaceutical Sciences.

Las composiciones inmunogénicas usadas como vacunas comprenden una cantidad inmunológicamente eficaz de antígeno, así como cualquier otro de los componentes mencionados anteriormente, según sea necesario. Por cantidad inmunológicamente eficaz', significa que la administración de esa cantidad a un individuo, o... [Seguir leyendo]

1. Una proteína de N.meningitidis que comprende: 5 (a) la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 19; o

(b) una proteína que tiene un 80% o más de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 19

para su uso en la prevención y/o tratamiento de meningitis bacteriana.

2. Una composición que comprende una proteína como se define en la reivindicación 1 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

3. La composición de la reivindicación 2, que comprende además un adyuvante.15

4. La composición de la reivindicación 2, donde la proteína es adsorbida a una sal de aluminio.

5. La composición de la reivindicación 4, donde la sal de aluminio es fosfato de aluminio.

6. La composición de la reivindicación 2, que comprende además un tampón.