Estimuladores del factor X activado como nuevos agentes antihemorrágicos de uso tópico.

Factor Tisular (FT) lipidado, o un fragmento funcional lipidado del mismo,

para usar en el tratamiento tópico de hemorragias en un sujeto, con la condición que:

(i) el FT lipidado no es un FT de mamífero recombinante o un fragmento funcional del mismo obtenido de plantas transgénicas, y

(ii) el FT lipidado no es un FT lipidado que tiene un 70% de PC y un 30% de PS y que comprende un FT producido en E. coli que tiene la secuencia.

Estimuladores del factor X activado como nuevos agentes antihemorrïgicos de uso tïpico

CAMPO DE LA INVENCIïN

La presente invenciïn se relaciona con el tratamiento tïpico de hemorragias en un sujeto mediante el uso de estimuladores de FXa. Esta invenciïn estï basada en el descubrimiento de que el Factor Tisular (FT) lipidado ejerce un nuevo papel regulador estimulando todas las actividades proteolïticas (actividad hidrolïtica de protrombina y amidolïtica) de ambas formas de FXa, la soluble y la unida al complejo protrombinasa.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIïN

1. Fisiologïa de la coagulaciïn La hemostasis es el mecanismo por el que los seres vivos responden ante una hemorragia e implica la participaciïn de dos procesos que adquieren funcionalidad inmediatamente despuïs de una lesiïn y se mantienen activos durante un largo perïodo de tiempo. El primero de ellos se conoce como hemostasia primaria y se caracteriza por la apariciïn de vasoconstricciïn en el punto de la lesiïn vascular y la formaciïn del agregado plaquetario. El segundo se conoce como hemostasia secundaria, siendo la fase en la que se forma el coïgulo de fibrina por la acciïn de las diferentes enzimas proteolïticas de la cascada de la coagulaciïn.

El agregado plaquetario juega un papel clave en la hemostasis de los capilares, teniendo especial relevancia en las hemorragias mucocutïneas. Por el contrario, la formaciïn del coïgulo de fibrina es mucho mïs importante en la hemostasia de los grandes vasos, adquiriendo mayor relevancia en las hemorragias internas (gastrointestinales, cerebrales, etc.) . Durante la formaciïn del agregado plaquetario se pueden distinguir las siguientes fases: (i) adhesiïn de las plaquetas a la superficie del sub-endotelio expuesta por la lesiïn; (ii) liberaciïn del contenido granular de las plaquetas, como respuesta a su activaciïn; (iii) agregaciïn de las plaquetas con el consiguiente secuestro y concentraciïn de mïs plaquetas en el lugar de la lesiïn; y (iv) uniïn del fibrinïgeno, asï como de otras proteïnas de coagulaciïn a la superficie de las plaquetas para producir trombina y formar el coïgulo de fibrina que permitirï que las plaquetas se fusionen y consoliden, estabilizando de ese modo el coïgulo hemostïtico. Ademïs, es bien conocido que la cantidad de plaquetas es crïtica para la formaciïn del coïgulo de fibrina; contajes de plaquetas por debajo de 20.000 por μl estïn acompaïados de episodios de sangrado severos.

En la segunda fase del proceso de coagulaciïn sanguïnea, participan diversas enzimas proteolïticas y cofactores, referidos todos ellos como factores de coagulaciïn, y consiste en varias fases que finalizan con la formaciïn de fibrina a partir de la hidrïlisis del fibrinïgeno por la acciïn de la trombina. Adicionalmente, la producciïn de trombina potencia el agregado plaquetario al aumentar la activaciïn y agregaciïn de mïs plaquetas. La trombina es previamente formada por la hidrïlisis proteolïtica de un apoenzima, la protrombina. Esta proteïlisis es realizada por la FXa serinproteasa que se une a la superficie de las plaquetas activadas y sïlo en presencia de su cofactor, el Factor de coagulaciïn V activado (FVa) , e iones calcio, esta serinproteasa es capaz de hidrolizar la protrombina. FXa puede ocurrir por dos vïas separadas, la vïa intrïnseca y la vïa extrïnseca.

La vïa intrïnseca consiste en una serie de reacciones que involucran principalmente el Factor de coagulaciïn VIII (FVIII) , el Factor de coagulaciïn IX (FIX) y el Factor de coagulaciïn XI (FXI) , en las que cada proenzima es hidrolizada dando lugar a su forma proteïsica activa (FVIIIa, FIXa y FXIa) . En cada paso, la enzima proteolïtica reciïn formada catalizarï la activaciïn de la siguiente proenzima para dar lugar sucesivamente a la forma activa. La activaciïn de los diferentes factores de la coagulaciïn implicados en la vïa intrïnseca tiene lugar; por tanto, a modo de cascada, una deficiencia de cualquiera de las proteïnas de la vïa intrïnseca bloquea la activaciïn del siguiente paso, impidiendo la formaciïn del coïgulo y aumentando la tendencia hemorrïgica. Deficiencias en distintos factores de coagulaciïn, por ejemplo, en FVIII, FIX o FXI causan sïndromes hemorrïgicos severos, tales como la Hemofilia A, B y C, respectivamente.

En la vïa extrïnseca de coagulaciïn sanguïnea, el FT expuesto por las cïlulas de la adventicia en el lugar de la lesiïn, se une al Factor de coagulaciïn VII/Factor de coagulaciïn VII activado (FVII/FVIIa) circulante para formar el complejo FT::FVIIa y, en presencia de calcio, actuar como sustrato para la activaciïn del FX. La vïa extrïnseca es considerada actualmente como la vïa de mayor relevancia en la coagulaciïn sanguïnea y se acepta que, ante una hemorragia producida por una lesiïn vascular, la coagulaciïn se desencadena por la activaciïn de la vïa extrïnseca, que implica la interacciïn del FT con su ligando, FVII/FVIIa.

Otro de los papeles asignados al complejo FT::FVIIa en la coagulaciïn es el de actuar como substrato para que tenga lugar la activaciïn del FX por el FVIIa. Como consecuencia, aumentan los niveles basales de FXa (<150pM) , que inicialmente son insuficientes para generar la formaciïn del coïgulo de fibrina. Este aumento en las concentraciones basales del FXa en presencia de su cofactor, FVa, y de una superficie procoagulante celular, sï que serïa capaz de producir la trombina necesaria para la formaciïn del coïgulo de fibrina. Actualmente se acepta que las plaquetas una vez activadas, juegan un papel clave en la coagulaciïn sanguïnea. Aportan la superficie procoagulante rica en fosfolïpidos aniïnicos y, por otro, exponen los factores FVa y FXa almacenados en su interior. Todo ello permite el correcto ensamblaje de los diferentes agentes implicados en la coagulaciïn sobre la superficie de sus membranas plasmïticas formando el bien conocido complejo protrombinasa (que incluye FXa, FVa, protrombina, y una superficie fosfolipïdica plaquetaria procoagulante aniïnica) .

La teorïa de la activaciïn de la vïa extrïnseca es capaz de explicar cïmo comienza la coagulaciïn a travïs del papel que se le ha atribuido al complejo FT::FVIIa. Un ejemplo que ilustra la relevancia biolïgica del complejo FT::FVIIa en el proceso de coagulaciïn sanguïnea es el Sïndrome de Coagulaciïn Intravascular Diseminada (DIC) . Esta condiciïn clïnica estï asociada con la liberaciïn intravascular del FT y puede ocurrir en el curso de condiciones clïnicas severas (shock, sepsis, paro cardiaco, trauma mayor, enfermedades del hïgado, cirugïa mayor, quemaduras, etc.)

Evidentemente, en un contexto en que el FVIIa no estï presente, como ocurre en una deficiencia congïnita de este factor, la coagulaciïn hipotïticamente nunca tendrï lugar ya que FX no se activarï a niveles suficientes y, como consecuencia, las manifestaciones hemorrïgicas serïn fatales. Modelos murinos confirman esta teorïa y la deficiencia en FVII es incompatible con la vida, estando acompaïada de hemorragias fatales severas. Sin embargo, hasta ahora las deficiencias de FVII congïnitas descritas en humanos hasta ahora, no siempre estïn acompaïadas de hemorragias. Se ha informado de casos de deficiencia completa de FVII sin ningïn sïntoma clïnico y que ocurren en individuos sanos sin complicaciones hemorrïgicas. Todo esto sugiere que deben existir en los humanos otros mecanismos desencadenantes de la coagulaciïn independientes del FVII.

El FT es una glicoproteïna integral de membrana perteneciente a la superfamilia de receptores de citocinas clase II que se une especïficamente al FVII/FVIIa y juega un papel relevante en la vïa extrïnseca de coagulaciïn sanguïnea. Las funciones fisiolïgicas asignadas al FT son bien conocidas; por un lado, es un receptor especïfico para el FVIIa y, una vez se ha formado el complejo FT::FVIIa, actïa como substrato para que tenga lugar la activaciïn de FX. De hecho, despuïs de una lesiïn vascular, el FT, que normalmente estï secuestrado en la superficie de las cïlulas de la adventicia que rodean externamente a los vasos sanguïneos, entra en contacto e interacciona con su ligando, el FVII presente en la sangre, para formar el complejo FT::FVII. Una vez formado este complejo tiene lugar la autoactivaciïn de FVII dando su forma activa FVIIa. Actualmente se dispone de amplia informaciïn sobre la estructura del complejo FT::FVII. Los principales sitios de uniïn de FVII que participan en la interacciïn con FT se localizan en el primer dominio similar al del factor de crecimiento epidïrmico (EGF) y en el dominio proteïsico. Por otro lado, tambiïn se ha descrito que participan otros sitios de uniïn con menor relevancia (dominio rico en 4carboxiglutamato (dominio Gla)... [Seguir leyendo]

1. Factor Tisular (FT) lipidado, o un fragmento funcional lipidado del mismo, para usar en el tratamiento tïpico de hemorragias en un sujeto, con la condiciïn que:

(i) el FT lipidado no es un FT de mamïfero recombinante o un fragmento funcional del mismo obtenido de plantas transgïnicas, y

(ii) el FT lipidado no es un FT lipidado que tiene un 70% de PC y un 30% de PS y que comprende un FT producido en E. coli que tiene la secuencia

2. Factor Tisular (FT) lipidado, o un fragmento funcional lipidado del mismo segïn la reivindicaciïn 1, en donde el sujeto es un sujeto sano.

3. Factor Tisular (FT) lipidado, o un fragmento funcional lipidado del mismo para usar en el tratamiento tïpico de una hemorragia en un sujeto, en donde dicho sujeto es un sujeto con una diïtesis hemorrïgica, donde dicha diïtesis hemorrïgica comprende una coagulopatïa y/o una alteraciïn plaquetaria.

4. Factor Tisular (FT) lipidado, o un fragmento funcional lipidado del mismo segïn la reivindicaciïn 3, en donde dicha coagulopatïa es una coagulopatïa congïnita o una coagulopatïa adquirida.

5. Factor Tisular (FT) lipidado, o un fragmento funcional lipidado del mismo segïn la reivindicaciïn 4, en donde dicha coagulopatïa congïnita es una coagulopatïa basada en una deficiencia en un factor de coagulaciïn seleccionado entre Factor de coagulaciïn V, Factor de coagulaciïn VII, Factor de coagulaciïn VIII, Factor de coagulaciïn IX, Factor de coagulaciïn X, Factor de coagulaciïn XI, Factor de coagulaciïn XII, Factor de coagulaciïn XIII y combinaciones de los mismos.

6. Factor Tisular (FT) lipidado, o un fragmento funcional lipidado del mismo segïn la reivindicaciïn 4, donde dicho sujeto tiene una coagulopatïa adquirida producida por un tratamiento anticoagulante con anticoagulantes.

7. Factor Tisular (FT) lipidado, o un fragmento funcional lipidado del mismo segïn la reivindicaciïn 6, donde los anticoagulantes son heparina, heparinas de bajo peso molecular, warfarina, derivados de cumarina o dicumarinas.

8. Factor Tisular (FT) lipidado, o un fragmento funcional lipidado del mismo segïn la reivindicaciïn 3, en donde dicho sujeto presenta una alteraciïn plaquetaria congïnita o adquirida.

9. Factor Tisular (FT) lipidado, o un fragmento funcional lipidado del mismo segïn la reivindicaciïn 8, en donde dicha alteraciïn plaquetaria congïnita se selecciona entre la enfermedad de Glanzamnn, el sïndrome de Bernard Soulier, el sïndrome de Bolin-Jamieson, el sïndrome de Wiskott-Aldrich, el sïndrome de Paris-Trousseau-Jacobsen, la trombocitopenia del cromosoma X, el sïndrome plaquetario de Gray, el sïndrome de Sebastiïn y la anemia de Fanconi.

10. Factor Tisular (FT) lipidado, o un fragmento funcional lipidado del mismo segïn la reivindicaciïn 8, en donde dicha alteraciïn plaquetaria adquirida se selecciona entre un trastorno mieloproliferativo, tal como trombocitemia, policitemia, o leucemia mielocïtica crïnica; metaplasia mieloide; disproteinemias en escorbuto, en la enfermedad cardïaca congïnita y en cirrosis.

11. Factor Tisular (FT) lipidado, o un fragmento funcional lipidado del mismo segïn la reivindicaciïn 1, en donde dicho FT lipidado es FT lipidado humano.

12. Producto que comprende (i) FT lipidado y (ii) factor X de coagulaciïn activado (FXa) de manera separada o como combinaciïn para usar en su administraciïn simultïnea o sucesiva a un sujeto.

13. Producto que comprende (i) FT lipidado y (ii) superficie inorgïnica cargada negativamente (SICN) ya sea de manera separada o como combinaciïn para usar en su administraciïn simultïnea o sucesiva a un sujeto, en donde SICN es una mezcla de un lïpido y un acelerador de coagulaciïn sanguïnea, en donde el acelerador de coagulaciïn sanguïnea se selecciona del grupo de ïcido elïgico, zeolita, sïlice y materiales de ïxido inorgïnico, en donde el lïpido se selecciona del grupo de un esfingolïpido y un lïpido con base glicerol, en donde el esfingolïpido se selecciona del grupo de ceramida-1-fosfato, fosfatidiletanolamina glicosilada, sulfatidos hidroxilados y no

hidroxilados y gangliïsidos y, en donde el lïpido con base glicerol se selecciona del grupo de fosfatidilserina, fosfatidilinositol, fosfatidilinositol fosfato, ïcido fosfatïdico, fosfatidilgliceroles y cardiolipina.

14. Producto que comprende (i) FT lipidado, (ii) FXa y (iii) SICN ya sea de manera separada o una combinaciïn para usar en su administraciïn simultïnea o sucesiva a un sujeto, en donde la SICN es una mezcla de un lïpido y un acelerador de la coagulaciïn sanguïnea, en donde el acelerador de coagulaciïn sanguïnea se selecciona del grupo de ïcido elïgico, zeolita, sïlice y materiales de ïxido inorgïnico, en donde el lïpido se selecciona del grupo de un esfingolïpido y un lïpido con base glicerol, en donde el esfingolïpido se selecciona del grupo de ceramida-1-fosfato, fosfatidiletanolamina glicosilado, sulfatidos hidroxilados y no hidroxilados y gangliïsidos y, en donde el lïpido con base glicerol se selecciona del grupo de fosfatidilserina, fosfatidilinositol, fosfatidilinositol fosfato, ïcido fosfatïdico, fosfatidilgliceroles y cardiolipina.

15. Producto para usar segïn cualquiera de las reivindicaciones 12 a 14, en donde dicho FT lipidado es un FT lipidado humano.

16. Producto para usar segïn cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15, como medicamento.

17. Producto segïn cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15 para usar en el tratamiento de hemorragias en un sujeto.

18. Producto segïn cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15 para usar en el tratamiento tïpico de hemorragias en un sujeto.

19. Complejo (FT::FXa) que comprende FT lipidado y FXa.

20. Complejo FT:SICN que comprende FT lipidado y SICN, en donde SICN es una mezcla de un lïpido y un acelerador de la coagulaciïn sanguïnea, en donde el acelerador de coagulaciïn sanguïnea se selecciona del grupo de ïcido elïgico, zeolita, sïlice y materiales de ïxido inorgïnico, en donde el lïpido se selecciona del grupo de un esfingolïpido y un lïpido con base glicerol, en donde el esfingolïpido se selecciona del grupo de ceramida-1-fosfato, fosfatidiletanolamina glicosilado, sulfatidos hidroxilados y no hidroxilados y gangliïsidos y, en donde el lïpido con base glicerol se selecciona del grupo de fosfatidilserina, fosfatidilinositol, fosfatidilinositol fosfato, ïcido fosfatïdico, fosfatidilgliceroles y cardiolipina.

21. Complejo FT::FXa::SICN que comprende FT lipidado, FXa y SICN, en donde lSICN es una mezcla de un lïpido y un acelerador de la coagulaciïn sanguïnea, en donde el acelerador de coagulaciïn sanguïnea se selecciona del grupo de ïcido elïgico, zeolita, sïlice y materiales de ïxido inorgïnico, en donde el lïpido se selecciona del grupo de un esfingolïpido y un lïpido con base glicerol, en donde el esfingolïpido se selecciona del grupo de ceramida-1fosfato, fosfatidiletanolamina glicosilado, sulfatidos hidroxilados y no hidroxilados y gangliïsidos y, en donde el lïpido con base glicerol se selecciona del grupo de fosfatidilserina, fosfatidilinositol, fosfatidilinositol fosfato, ïcido fosfatïdico, fosfatidilgliceroles y cardiolipina.

22. Complejo segïn cualquiera de las reivindicaciones 19 a 21 para usar como medicamento.

23. Complejo segïn cualquiera de las reivindicaciones 19 a 21 para usar en el tratamiento de hemorragias en un sujeto.

24. Complejo segïn cualquiera de las reivindicaciones 19 a 21 para usar en el tratamiento tïpico de hemorragias en un sujeto.

25. Composiciïn farmacïutica que comprende:

(a) un producto segïn la reivindicaciïn 12, junto con un vehïculo farmacïuticamente aceptable; o

(b) separadamente (i) FT lipidado junto con un vehïculo farmacïuticamente aceptable y (ii) FXa junto con un vehïculo farmacïuticamente aceptable; o

(c) un producto de acuerdo con la reivindicaciïn 13, junto con un vehïculo farmacïuticamente aceptable; o

(d) de manera separada, (i) FT lipidado junto con un vehïculo farmacïuticamente aceptable y (ii) SICN junto con

un vehïculo farmacïuticamente aceptable, en donde SICN es una mezcla de un lïpido y un acelerador de la coagulaciïn sanguïnea, en donde el acelerador de coagulaciïn sanguïnea se selecciona del grupo de ïcido elïgico, zeolita, sïlice y materiales de ïxido inorgïnico, en donde el lïpido se selecciona del grupo de un esfingolïpido y un lïpido con base glicerol, en donde el esfingolïpido se selecciona del grupo de ceramida-1-fosfato, fosfatidiletanolamina glicosilado, sulfatidos hidroxilados y no hidroxilados y gangliïsidos y, en donde el lïpido con base glicerol se selecciona del grupo de fosfatidilserina, fosfatidilinositol, fosfatidilinositol fosfato, ïcido fosfatïdico, fosfatidilgliceroles y cardiolipina; o

(e) producto segïn la reivindicaciïn 14, junto con un vehïculo farmacïuticamente aceptable; o

(f) de manera separada, (i) FT lipidado junto con un vehïculo farmacïuticamente aceptable, (ii) FXa junto con un

vehïculo farmacïuticamente aceptable, y (iii) SICN junto con un vehïculo farmacïuticamente aceptable, en donde SICN es una mezcla de un lïpido y un acelerador de la coagulaciïn sanguïnea, en donde el acelerador de coagulaciïn sanguïnea se selecciona del grupo de ïcido elïgico, zeolita, sïlice y materiales de ïxido inorgïnico, en donde el lïpido se selecciona del grupo de un esfingolïpido y un lïpido con base glicerol, en donde el esfingolïpido se selecciona del grupo de ceramida-1-fosfato, fosfatidiletanolamina glicosilado, sulfatidos hidroxilados y no hidroxilados y gangliïsidos y, en donde el lïpido con base glicerol se selecciona del grupo de fosfatidilserina, fosfatidilinositol, fosfatidilinositol fosfato, ïcido fosfatïdico, fosfatidilgliceroles y cardiolipina; o

(g) un complejo FT::FXa segïn la reivindicaciïn 19 junto con un vehïculo farmacïuticamente aceptable, o

(h) un complejo FT::SICN segïn la reivindicaciïn 20 junto con un vehïculo farmacïuticamente aceptable, o

(i) un complejo FT::FXa::SICN segïn la reivindicaciïn 21 junto con un vehïculo farmacïuticamente aceptable.

26. Composiciïn farmacïutica segïn la reivindicaciïn 15 en una forma de administraciïn farmacïutica para su administraciïn tïpica.

27. Producto que comprende una composiciïn farmacïutica segïn cualquiera de las reivindicaciones 25 a 26 y un soporte.

28. Producto que comprende una composiciïn farmacïutica que comprende:

(i) un soporte y

(ii) un producto o complejo seleccionado del grupo que consiste en:

(i) un producto segïn la reivindicaciïn 12 junto con un vehïculo farmacïuticamente aceptable,

(ii) un producto segïn la reivindicaciïn 13 junto con un vehïculo farmacïuticamente aceptable,

(iii) un producto segïn la reivindicaciïn 14 junto con un vehïculo farmacïuticamente aceptable, o

(iv) un complejo FT::FXa segïn la reivindicaciïn 19 junto con un vehïculo farmacïuticamente aceptable, o

(v) un complejo FT::SICN segïn la reivindicaciïn 20 junto con un vehïculo farmacïuticamente aceptable, o

(vi) un complejo FT::FXa::SICN segïn la reivindicaciïn 21 junto con un vehïculo farmacïuticamente aceptable.