Elementos reguladores de plantas y usos de los mismos.

Una molécula de ADN que comprende un elemento regulador que tiene una secuencia de ADN seleccionada de:

(a) una secuencia con al menos un 95 por ciento de identidad de secuencia con la longitud completa de una secuencia de ADN seleccionada de las SEC ID Nº 1-2 con actividad de promotor,

(b) una secuencia seleccionada de las SEC ID Nº 1-2, y

(c) un fragmento que comprende al menos 95 nucleótidos contiguos de la secuencia de (a) o (b) con actividad de promotor,

en la que dicho elemento regulador está unido operativamente a una molécula de polinucleótido transcribible heteróloga.

Elementos reguladores de plantas y usos de los mismos Campo de la invención La invención se refiere al campo de la biología molecular de plantas y de la ingeniería genética de las plantas y a las 5 moléculas de ADN útiles para la modulación de la expresión génica en plantas.

Antecedentes Los elementos reguladores son elementos genéticos que regulan la actividad de los genes mediante la modulación de la transcripción de una molécula de polinucleótido transcribible unida operativamente. Tales elementos incluyen promotores, líderes, intrones, y regione 3 'no traducidas y son útiles en el campo de la biología molecular de plantas y la ingeniería genética de las plantas. El documento US 2007/0130645 describe promotores de maíz que impulsan la expresión en, entre otros, las hojas.

Sumario de la invención La presente invención proporciona nuevos elementos reguladores de mijo menor (Setaria italica (L.) Beauv) para su uso en plantas. En particular, la presente invención proporciona (1) una molécula de ADN que comprende un elemento regulador que tiene una secuencia de ADN seleccionada de:

(a) una secuencia con al menos un 95 por ciento de identidad de secuencia con la longitud completa de una secuencia de ADN seleccionada de las SEC ID Nº 1-2 con la actividad de promotor,

(b) una secuencia seleccionada de las SEC ID Nº 1-2, y

(c) un fragmento que comprende al menos 95 nucleótidos contiguos de la secuencia de (a) o (b) con actividad de promotor,

en la que dicho elemento regulador está unido operativamente a una molécula de polinucleótido transcribible heteróloga;

(2) una construcción de ADN que comprende un elemento regulador que tiene una secuencia de ADN 25 seleccionada de:

(a) una secuencia con al menos un 95 por ciento de identidad de secuencia con la longitud completa de una secuencia de ADN seleccionada de las SEC ID Nº 1-2 con actividad de promotor,

(b) una secuencia seleccionada de las SEC ID Nº 1-2, y

(c) un fragmento que comprende al menos 95 nucleótidos contiguos de la secuencia de (a) o (b) con 30 actividad de promotor,

en el que dicho elemento regulador está unido operativamente a una molécula de polinucleótido transcribible heteróloga;

(3) una célula vegetal transgénica transformada de manera estable con la molécula de ADN como se define en

(1) anteriormente;

(4) una planta transgénica transformada de manera estable con la molécula de ADN como se define en (1) anteriormente;

(5) una parte de planta de la planta transgénica de (4) anterior, en la que la parte de la planta comprende la molécula de ADN; y

(6) una semilla de la planta transgénica de (4) anterior, en la que la semilla comprende la molécula de ADN.

Breve descripción de las figuras

La Figura 1 ilustra las tres variantes de promotor diseñadas a partir de los elementos reguladores del gen de la proteína de transferencia de lípidos. La SEC ID Nº 15 es P-Setit.RCC3-1: 01:01 y tiene una longitud de 2.062 pares de bases nucleotídicos; la SEC ID Nº 20 es P-Setit.RCC3-1: 01:11 y tiene una longitud de 915 pares de bases nucleotídicos, y la SEC ID Nº 18 es P-Setit.RCC3-1: 1:10 y tiene una longitud de 1.563 pares de bases de nucleotídicos.

La Figura 2 ilustra las dos variantes de promotor diseñadas a partir de los elementos reguladores del gen de la proteína similar a la metalotioneína. La SEC ID Nº 5 es P-Setit.Mtha-1: 01:01 y tiene una longitud de 483 pares de bases, la SEC ID Nº 8 es P-Setit.MThB-1: 01:02 y tiene una longitud de 1.516 pares de bases.

Las figuras 3A y 3B ilustran colectivamente una alineación de secuencia producida utilizando la alineación de secuencias múltiples CLUSTAL W (1.82) de las dos variantes alélicas de los promotores del gen de la proteína relacionada con la deshidratación. En el consenso siguiente debajo de las secuencias alineadas, los apareamientos se marcan con "*", los apareamientos erróneos se marcan con “.” y las deleciones / inserciones están marcadas con el "-". Las dos variantes alélicas tenían secuencias líder idénticas, pero las secuencias del promotor eran variantes de la secuencia cuando estaban alineadas. La SEC ID Nº 10 es P-Setit.DRPA-1: 01:01 y la SEC ID Nº 13 es p-Setit.DRPb-1: 01:01.

Descripción detallada de la invención Las siguientes definiciones y procedimientos se proporcionan para definir mejor la presente invención y para guiar a los expertos en la técnica en la práctica de la presente invención. A menos que se indique lo contrario, los términos y expresiones se deben entender según su uso convencional por los expertos en la técnica relevante.

Moléculas de ADN

Tal como se usa en el presente documento, el término "ADN" o la expresión "molécula de ADN" se refiere a una molécula de doble cadena de ADN de origen genómico o sintético, es decir, un polímero de bases de desoxirribonucleótidos o una molécula de polinucleótido, léase desde el extremo 5 ' (cadena arriba) al extremo 3' (cadena abajo) . Como se usa en el presente documento, la expresión "secuencia de ADN" se refiere a la secuencia de nucleótidos de una molécula de ADN. La nomenclatura utilizada en el presente documento es la requerida por el Título 37 del Código de Regulaciones Federales de los Estados Unidos § 1.822, y se establece en las tablas en la Norma ST.25 de la OMPI (1998) , Apéndice 2, Tablas 1 y 3.

Como se usa en el presente documento, la expresión "molécula de AND aislada" se refiere a una molécula de ADN al menos parcialmente separada de otras moléculas asociadas normalmente con ella en su estado nativo o natural. En una realización, el término "aislado" se refiere a una molécula de ADN que está al menos parcialmente separada de los ácidos nucleicos que normalmente flanquean a la molécula de ADN en su estado nativo o natural. Por lo tanto, las moléculas de ADN fusionadas a secuencias reguladoras o codificantes con las que no se asocian normalmente, por ejemplo como resultado de técnicas recombinantes, se consideran aisladas en el presente documento. Tales moléculas se consideran aisladas aun cuando se integren en el cromosoma de una célula huésped o estén presentes en una solución de ácido nucleico con otras moléculas de ADN.

Cualquier número de procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica se puede utilizar para aislar y manipular una molécula de ADN, o fragmento de la misma, divulgado en la presente invención. Por ejemplo, se puede usar la tecnología de PCR (reacción en cadena de la polimerasa) para amplificar una molécula de ADN de partida en particular y / o para producir variantes de la molécula original. Moléculas de ADN, o fragmentos de la misma, también se pueden obtener mediante otras técnicas tales como mediante la síntesis directa del fragmento por medios químicos, como se practica habitualmente mediante el uso de un sintetizador automático de oligonucleótidos.

Como se usa en el presente documento, la expresión "identidad de secuencia" se refiere a la medida en la cual dos secuencias de polinucleótidos alineadas óptimamente son idénticas. Una alineación de secuencia óptima se crea mediante la alineación manual de dos secuencias, por ejemplo, una secuencia de referencia y otra secuencia, para maximizar el número de apareamientos de nucleótidos en la alineación de secuencia con inserciones, deleciones o huecos de nucleótidos internos adecuados. Tal como se usa en el presente documento, la expresión "secuencia de referencia" se refiere a una secuencia proporcionada como SEC ID Nº 1-2.

Como se usa en el presente documento, , la expresión "porcentaje de identidad de secuencia" o "porcentaje de identidad" o "% de identidad" es la fracción de identidad por 100. La "fracción de identidad" para una secuencia alineada óptimamente con una secuencia de referencia es el número de apareamientos de nucleótidos en la alineación óptima, dividido por el número total de nucleótidos en la secuencia de referencia, por ejemplo, el número total de nucleótidos en la longitud completa de la totalidad de la secuencia de referencia. Por lo tanto, una forma de realización de la invención es una molécula de ADN que comprende una secuencia que cuando se alinea de manera óptima con una secuencia de referencia, proporcionada en el presente documento como la SEC ID N º: 1-2, tiene un 95 por ciento de identidad o superior, o al menos un 96 por ciento de identidad, un 97 por ciento identidad, un 98 por ciento de identidad o un 99 por ciento de identidad con la secuencia de referencia y tiene actividad reguladora de genes.

Elementos reguladores Un elemento regulador es una molécula de ADN que tiene actividad de... [Seguir leyendo]

1. Una molécula de ADN que comprende un elemento regulador que tiene una secuencia de ADN seleccionada de:

(a) una secuencia con al menos un 95 por ciento de identidad de secuencia con la longitud completa de una secuencia de ADN seleccionada de las SEC ID Nº 1-2 con actividad de promotor,

(b) una secuencia seleccionada de las SEC ID Nº 1-2, y

(c) un fragmento que comprende al menos 95 nucleótidos contiguos de la secuencia de (a) o (b) con actividad de promotor,

en la que dicho elemento regulador está unido operativamente a una molécula de polinucleótido transcribible heteróloga.

2. Una construcción de ADN que comprende un elemento regulador que tiene una secuencia de ADN seleccionada de:

(a) una secuencia con al menos un 95 por ciento de identidad de secuencia con la longitud completa de una secuencia de ADN seleccionada de las SEC ID Nº 1-2 con actividad de promotor,

(b) una secuencia seleccionada de las SEC ID Nº 1-2, y

(c) un fragmento que comprende al menos 95 nucleótidos contiguos de la secuencia de (a) o (b) con actividad de promotor,

en la que dicho elemento regulador está unido operativamente a una molécula de polinucleótido transcribible heteróloga.

3. La construcción de ADN de la reivindicación 2, en la que la molécula de polinucleótido transcribible es un gen de interés agronómico.

4. La construcción de ADN de la reivindicación 2, en la que la molécula de polinucleótido transcribible es un gen capaz de proporcionar resistencia a herbicidas en las plantas.

5. La construcción de ADN de la reivindicación 2, en la que la molécula de polinucleótido transcribible es un gen capaz de proporcionar control de plagas de las plantas en plantas.

6. Una célula vegetal transgénica transformada de manera estable con la molécula de ADN de la reivindicación 1.

7. La célula vegetal transgénica de la reivindicación 6, en la que dicha célula vegetal transgénica es una célula de planta monocotiledónea.

8. Una planta transgénica transformada de manera estable con la molécula de ADN de la reivindicación 1.

9. Una parte de la planta de la planta transgénica de la reivindicación 8, en el que la parte de la planta comprende la molécula de ADN.

10. Una semilla de la planta transgénica de la reivindicación 8, en la que la semilla comprende la molécula de ADN.

FIGURA 3A FIGURA 3B