Dabigatrán liofilizado.
Procedimiento para fabricar dabigatrán liofilizado de fórmula I**Fórmula**
que comprende las etapas de disolver dabigatrán en disolución acuosa ácida,
añadir la disolución a plasma anticoagulado humano y liofilizar la disolución así obtenida.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2010/050925.
Solicitante: BOEHRINGER INGELHEIM INTERNATIONAL GMBH.
Nacionalidad solicitante: Alemania.
Dirección: BINGER STRASSE 173 55216 INGELHEIM AM RHEIN ALEMANIA.
Inventor/es: STANGIER,JOACHIM.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- G01N33/94 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › en los que intervienen narcóticos.
- G01N33/96 G01N 33/00 […] › en los que interviene un patrón de control de la sangre o del suero.
PDF original: ES-2525251_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
Dabigatrán liofilizado
La invención se refiere a una forma liofilizada de dabigatrán de fórmula I
I 5 NNCH3NONOHONNH2NHH
a su uso como calibrador en los ensayos para determinar los efectos farmacodinámicos del etexilato de dabigatrán, así como a dichos ensayos.
Antecedentes de la invención 10
El etexilato de dabigatrán de fórmula II
II NNCH3NONOONNHNHOOCH3HEt
es un inhibidor directo oral de la trombina útil en la profilaxis de la tromboembolia en pacientes que se someten a sustitución total de la rodilla o la cadera y también es adecuado para la prevención del accidente cerebrovascular, en particular en pacientes con fibrilación auricular. Aunque no es necesario el seguimiento clínico del etexilato de 15 dabigatrán, sería útil un método de laboratorio fiable para medir los efectos farmacodinámicos del etexilato de dabigatrán. Dicho método podría usarse no solo para el seguimiento de la cinética de la actividad del fármaco en el cuerpo, sino también para ajustar la dosificación y posología del fármaco. Mediante dicho método se podría determinar la concentración de fármaco en el cuerpo del paciente, lo que podría ser útil para evitar la administración de sobredosis. Por lo tanto, el objeto general de la invención es proporcionar un ensayo que sea útil para analizar 20 los efectos farmacodinámicos del etexilato de dabigatrán.
Técnica Anterior
ï· Stangier et al. (Clinical Pharmacokinetics, Vol. 47, Nº 1 (01-01-2008) , páginas 47-59 enseña la 25 determinación de dabigatrán en muestras de sangre mediante LC-MS, que implica un isótopo 13C de dabigatrán como patrón interno, para estudiar la farmacocinética y la farmacodinámica de este fármaco.
ï· El documento WO 2006/031387 describe reactivos de tromboplastina liofilizados para medir el tiempo de coagulación y vigilar la terapia anticoagulante. 30
ï· El documento WO 2001/07921 describe composiciones de plasma liofilizadas y composiciones de plasma que comprenden inhibidores de la coagulación como disolución patrón para uso en la medición de parámetros de la coagulación.
Descripción detallada de la invención
La presente invención se dirige específicamente a un método para la determinación cuantitativa del dabigatrán en muestras de sangre. El método comprende la determinación del tiempo de coagulación que se inicia mediante trombina humana purificada.
Para determinar las concentraciones de dabigatrán, resultó ser particularmente útil el siguiente principio de ensayo. Para medir la concentración de dabigatrán, se diluye una parte alícuota de la muestra de plasma de ensayo con disolución salina fisiológica. Después se inicia la coagulación por adición de una cantidad constante de trombina 5 humana altamente purificada, en la forma ï?¡. El tiempo de coagulación medido es directamente proporcional a la concentración de dabigatrán en la muestra ensayada.
Con el fin de poder determinar la concentración del principio activo en la muestra de sangre investigada mediante la estrategia mencionada en lo que antecede, es necesario tener una curva de calibración generada que efectúe una 10 correlación entre el tiempo de coagulación y la concentración de dabigatrán en la posible muestra.
Con el fin de permitir generar dicha curva de calibración, el producto de ensayo tiene que contener patrones de dabigatrán de una concentración definida que se pueden enviar junto con el producto de ensayo. En la presente invención, la expresión "patrón de dabigatrán" también se puede sustituir por la expresión "calibrador de 15 dabigatrán". Dichos patrones tienen que ser estables y la cantidad de fármaco tiene que ser estable cuando el patrón se almacena a -20º C o superior. Los patrones deben poder aplicarse fácilmente en el sistema de ensayo con el fin de asegurar que se puede establecer fácilmente una curva de calibración fiable.
El compuesto de fórmula I (dabigatrán) es un compuesto que tiende a cristalizar en formas polimórficas diferentes. 20 Además, el compuesto es higroscópico tendiendo, por lo tanto, también a la formación de diferentes formas hidratadas. El compuesto es poco soluble.
El objeto principal de la invención es proporcionar una forma de dabigatrán que se pueda usar como un calibrador o patrón para establecer una curva de calibración en un ensayo de tiempo de coagulación. La presente invención 25 propone como solución a este problema, que el dabigatrán se transfiera a una forma liofilizada como sigue.
Una cantidad definida del fármaco dabigatrán se disuelve en ácido acuoso y se diluye con agua. Esta disolución se usa como una disolución madre para preparar las diferentes muestras de calibrador de dabigatrán. Al plasma anticoagulado humano que se ha obtenido de donantes voluntarios sanos (mezcla de plasma humano) de acuerdo 30 con métodos conocidos en la técnica, se añaden diferentes partes alícuotas de la disolución madre de dabigatrán mencionada en lo que antecede, para dar disoluciones con diferentes concentraciones de dabigatrán. Se transfieren volúmenes específicos de estas disoluciones diferentes a tubos adecuados y se liofilizan hasta sequedad completa en un dispositivo de liofilización adecuado.
Por lo tanto, la invención se refiere a un procedimiento para fabricar dabigatrán liofilizado que comprende las etapas de disolver dabigatrán en disolución acuosa ácida, añadir la disolución al plasma anticoagulado humano y liofilizar la disolución así obtenida.
La disolución acuosa ácida usada para la disolución del dabigatrán se caracteriza preferiblemente por un pH < 3, 40 más preferiblemente < 2. Los ácidos se seleccionan preferiblemente de entre ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metanosulfónico, ácido acético, ácido fumárico, ácido cítrico, ácido tartárico y ácido maleico. Tiene un interés particular el ácido clorhídrico.
El plasma anticoagulado humano se puede obtener de acuerdo con métodos conocidos en la técnica. 45 Preferiblemente es plasma humano tratado con citrato.
El dabigatrán liofilizado de acuerdo con la invención se reconstituye fácilmente y, por lo tanto, es útil como calibrador para determinar la concentración de dabigatrán en muestras de sangre. Por lo tanto, la invención se refiere además al dabigatrán liofilizado que se puede obtener de acuerdo con el método mencionado en lo que 50 antecede.
Además, la invención se refiere al uso del dabigatrán liofilizado de acuerdo con la invención como un agente calibrador en un ensayo. En particular, la invención se refiere al uso del dabigatrán liofilizado de acuerdo con la invención como un agente calibrador en un ensayo de anticoagulación. 55
La invención se refiere además, a un ensayo para determinar la concentración de dabigatrán en una muestra de sangre, que comprende el uso de dabigatrán liofilizado como calibrador. La invención se refiere además, al ensayo mencionado antes, caracterizado por que la concentración de dabigatrán se determina por medición del tiempo de coagulación de la muestra de sangre. La invención se refiere además, al ensayo mencionado antes, en el que la 60 coagulación se inicia por adición de una cantidad constante de trombina humana altamente purificada en la forma ï?¡.
En otro objeto de la invención, se proporciona un kit de ensayo que contiene el calibrador dabigatrán de acuerdo con la invención. Por consiguiente, la invención se refiere, además, a un ensayo para determinar la concentración de dabigatrán en una muestra de sangre, que comprende el uso de dabigatrán liofilizado obtenido de acuerdo con el método mencionado en lo que antecede.
La invención se refiere además, a un kit que consiste en un ensayo para determinar la concentración de dabigatrán en una muestra de sangre junto con dabigatrán liofilizado obtenido de acuerdo con el método mencionado en lo que antecede.
La invención se refiere además, al kit mencionado antes en el que el ensayo para determinar la concentración de 10 dabigatrán en una muestra de sangre comprende un reactivo 1 que es un plasma anticoagulado humano y un reactivo 2 que comprende trombina humana altamente purificada en la forma ï?¡. En otra realización preferida, el kit contiene el reactivo 1 y el reactivo 2 en forma liofilizada.
Con las muestras de dabigatrán liofilizadas de concentraciones conocidas está disponible un sistema de control de 15 calidad. La medición del tiempo de coagulación de la muestra de control de calidad y la posterior determinación de la concentración de dabigatrán correspondiente usando la curva de calibración... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Procedimiento para fabricar dabigatrán liofilizado de fórmula I
I
que comprende las etapas de disolver dabigatrán en disolución acuosa ácida, añadir la disolución a plasma 5 anticoagulado humano y liofilizar la disolución así obtenida.
2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque la disolución acuosa ácida usada para la disolución de dabigatrán tiene un pH < 3.
3. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque la disolución acuosa ácida se prepara usando ácidos seleccionados de entre ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metanosulfónico, ácido acético, ácido fumárico, ácido cítrico, ácido tartárico y ácido maleico.
4. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque la disolución acuosa ácida se prepara usando 15 ácido clorhídrico.
5. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque el plasma anticoagulado humano es plasma humano tratado con citrato o plasma anticoagulado con EDTA.
6. El dabigatrán liofilizado que se puede obtener de acuerdo con el procedimiento según una de las reivindicaciones 1-5.
7. Uso de dabigatrán liofilizado según la reivindicación 6 como un agente calibrador.
8. Uso según la reivindicación 7, como un agente calibrador en un ensayo de anticoagulación.
9. Ensayo para determinar la concentración de dabigatrán en una muestra de sangre, que comprende el uso de dabigatrán liofilizado según la reivindicación 6.
10. Ensayo según la reivindicación 9, caracterizado porque la concentración de dabigatrán se determina por medición del tiempo de coagulación de la muestra de sangre.
11. Ensayo según la reivindicación 10, caracterizado porque la coagulación se inicia por adición de una cantidad constante de trombina humana altamente purificada en la forma ï?¡. 35
12. Un kit para determinar la concentración de dabigatrán en una muestra de sangre en un ensayo según las reivindicaciones 9 a 11, que comprende dabigatrán según la reivindicación 6.
13. Un kit según la reivindicación 12 para uso en el ensayo según las reivindicaciones 9 a 11 que comprende un 40 reactivo 1 que es plasma anticoagulado humano y un reactivo 2 que comprende trombina humana altamente purificada en la forma ï?¡.
14. Un kit según la reivindicación 13, en el que el reactivo 1 es plasma anticoagulado humano, y el reactivo 2 que comprende trombina humana altamente purificada en la forma ï?¡ están liofilizados. 45
15. Uso del dabigatrán liofilizado según la reivindicación 6, para determinar la exactitud de un ensayo.
16. Uso según la reivindicación 15, para determinar la exactitud de un ensayo de anticoagulación.
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