Combinaciones de clados de RrgB neumocócicos.

Una composición inmunogénica que comprende al menos dos de:

(a) un primer polipéptido que comprende una primera secuencia de aminoácidos,

en el que la primera secuencia de aminoácidos comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 90 % de identidad de secuencias con SEC ID Nº: 1 y/o (ii) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID Nº: 1, y que comprende un epítope de SEC ID Nº: 1;

(b) un segundo polipéptido, que comprende una segunda secuencia de aminoácidos, en el que la segunda secuencia de aminoácidos comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 90 % de identidad de secuencias con SEC ID Nº: 2 y/o (ii) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID Nº: 2, y que comprende un epítope de SEC ID Nº: 2; y/o

(c) un tercer polipéptido, que comprende una tercera secuencia de aminoácidos, en el que la tercera secuencia de aminoácidos comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 90 % de identidad de secuencias con SEC ID Nº: 3 y/o (ii) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID Nº: 3, y que comprende un epítope de SEC ID Nº: 3.

CAMPO TÉCNICO

La presente invención está en el campo de inmunizar contra Streptococcus pneumoniae (neumococo).

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

S. pneumoniae tiene un pilo conocidos como pilo-1 codificado por un islote de 14 kb (PI-1) que tiene siete genes que codifican: el regulador transcripcional RlrA, tres subunidades de pilos con señales de clasificación de la pared celular tipo LPXTG y tres enzimas sortasa que participan en la síntesis del polímero de pilo y en la incorporación de componentes del pilo secundario. RrgB es la principal subunidad que forma el esqueleto de la estructura, mientras que los otros dos pilos (RrgA, RrgC) son proteínas estructurales secundarias [1-4]. RrgA es la adhesina del pilo-1 principal; bacterias que carecen de RrgA son menos adherentes a células epiteliales que los organismos naturales. La referencia 148 desvela composiciones inmunogénicas que comprenden uno o más antígenos del pilo RrgB de S. pneumoniae y también polipéptidos híbridos que comprenden antígenos del pilo RrgB que se derivan del mismo ciado.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a una composición inmunogénica que comprende al menos dos de:

(a) un primer polipéptido que comprende una primera secuencia de aminoácidos, en el que la primera secuencia de aminoácidos comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 9 % de identidad de secuencias con SEC ID N°: 1 y/o (ii) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID N°: 1, y que comprende un epítope de SEC ID N°: 1;

(b) un segundo polipéptido, que comprende una segunda secuencia de aminoácidos, en el que la segunda secuencia de aminoácidos comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 9 % de identidad de secuencias con SEC ID N°: 2 y/o (ii) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID N°: 2, y que comprende un epítope de SEC ID N°: 2; y/o

(c) un tercer polipéptido, que comprende una tercera secuencia de aminoácidos, en el que la tercera secuencia de aminoácidos comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 9 % de identidad de secuencias con SEC ID N°: 3 y/o (ii) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID N°: 3, y que comprende un epítope de SEC ID N°: 3.

La presente invención también se refiere a un polipéptido que comprende al menos dos de:

(a) una primera secuencia de aminoácidos que comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 9 % de identidad de secuencias con SEC ID N°: 1 y/o (ii) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID N°: 1, y que comprende un epítope de SEC ID N°: 1;

(b) una segunda secuencia de aminoácidos que comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 9 % de identidad de secuencias con SEC ID N°: 2 y/o (ii) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID N°: 2, y que comprende un epítope de SEC ID N°: 2; y/o

(c) una tercera secuencia de aminoácidos que comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 9 % de identidad de secuencias con SEC ID N°: 3 y/o (ii) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID N°: 3, y que comprende un epítope de SEC ID N°: 3.

La presente invención se refiere además a un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos:

A-{-X-L-}n-B

en la que: cada uno X es una secuencia de aminoácidos del primer polipéptido, segundo polipéptido o tercer polipéptido como se define en la reivindicación 1; L es una secuencia de aminoácidos de conector opcional; A es una secuencia de aminoácidos del extremo N opcional; B es una secuencia de aminoácidos del extremo C opcional; n es un número entero de 2 o más. Opcionalmente, el polipéptido comprende al menos dos de un primer, segundo y tercer polipéptido como se define en la reivindicación 1.

En una realización particular, los polipéptidos de la invención comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: SEC ID N°: 11, 13, 15, 17, 19 y 21.

La presente invención también se refiere a una bacteria que expresa al menos dos de:

(a) un primer polipéptido que comprende una primera secuencia de aminoácidos, en el que la primera secuencia de aminoácidos comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 9 % de identidad de secuencias con SEC ID N°: 1 y/o (ii) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID N°: 1, y que comprende un epítope de SEC ID N°: 1;

(b) un segundo polipéptido, que comprende una segunda secuencia de aminoácidos, en el que la segunda secuencia de aminoácidos comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 9 % de identidad de secuencias con SEC ID N°: 2 y/o (ii) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID N°: 2, y que comprende un epítope de SEC ID N°: 2; y/o

(c) un tercer polipéptido, que comprende una tercera secuencia de aminoácidos, en el que la tercera secuencia de aminoácidos comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 9 % de identidad de secuencias con SEC ID N°: 3 y/o (ii) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID N°: 3, y que comprende un epítope de SEC ID N°: 3.

La invención también se refiere a una composición inmunogénica o un polipéptido de la invención para su uso en un procedimiento de producir una respuesta inmunitaria en un mamífero.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La Figura 1 muestra los resultados de un estudio de bacteremia con cinco quimeras de RrgB y un control. Las figuras son UFC/ml. Cada marca muestra datos para un único ratón.

La Figura 2 muestra los resultados de un estudio de mortalidad con cinco quimeras de RrgB y un control. Las figuras son tiempo de supervivencia en días. Cada marca muestra datos para un único ratón.

La Figura 3 muestra un gel con cuatro carriles. De izquierda a derecha los carriles contienen: marcadores de MW; una quimera l-ll-lll; una quimera l-ll-lll; y un patrón de BSA. La flecha indica un MW de 214 kDa.

La Figura 4A muestra datos de protección pasiva usando cuatro mAb producidos contra el RrgB de TIGR4, o un control de solución salina. El eje y muestra UFC/ml durante bacteremia de 24 horas. La Figura 4B muestra los resultados de un estudio de mortalidad con los cuatro mAb producidos contra RrgB de TIGR4

Las Figuras 5 y 6 muestran transferencias Western usando mAb producidos contra la secuencia de TIGR4 (Figura 5) o la secuencia de 6B (Figura 6). Los carriles son, de izquierda a derecha: marcador; l-ll-lll de RrgB; ll-l-lll de RrgB;

II- lll-l de RrgB; lll-ll de RrgB; lll-ll-l de RrgB; TIGR4 de RrgB; 6B de RrgB; 23F de RrgB; control de BSA.

La Figura 7 muestra (A) bacteremia y (B) datos de mortalidad después de la inmunización con quimera l-ll-lll, quimera lll-ll-l adyuvantadas con alumbre, TIGR4 o alumbre solo. En la Figura 7A, los datos son UFC/ml y en la Figura 7B los datos son tiempo de supervivencia en días.

La Figura 8 muestra resultados de OPKA contra la cepa TIGR4, que muestran % de destrucción de OPKA contra la dilución en suero. Los diamantes muestran sueros de control positivo; los sueros preinmunes son los recuadros rellenos, visibles cerca del eje x; las otras cinco líneas son para sueros producidos contra las cinco quimeras.

La Figura 9 muestra un árbol basado en el % de identidad para SEC ID N°: 1-3 y 85-96. La marca es la SEC ID.

La Figura 1 muestra resultados de OPKA contra S. pneumoniae serotipo 6B, que muestran el % de destrucción contra la dilución en suero.

La Figura 11 muestra resultados de OPKA contra S. pneumoniae serotipo 6B, que muestran el % de destrucción contra la dilución en suero hasta una dilución de 1/13122.

La Figura 12 muestra (A) bacteremia y (B) datos de mortalidad después de la Inmunización con la quimera lll-ll-l a diferentes dosis. En la Figura 12A los datos son UFC/ml y en la Figura 12B los datos son tiempo de supervivencia en días.

La Figura 13 muestra (A) bacteremia y (B) datos de mortalidad después de la Inmunización con 2 pg de la quimera

III- ll-l de RrgB. En la Figura 13A los datos son UFC/ml y en la Figura 13B los datos son tiempo de supervivencia en días.

La Figura 14 demuestra que la quimera de RrgB de lll-ll-l es protectora usando el adyuvante MF59. Los diamantes muestran quimera de RrgB adyuvantada, los círculos muestran MF59 solo.

La Figura 15 muestra (A) bacteremia y (B) datos de mortalidad después de la inmunización subcutánea con la

quimera lll-ll-l de RrgB.... [Seguir leyendo]

1. Una composición inmunogénica que comprende al menos dos de:

(a) un primer polipéptido que comprende una primera secuencia de aminoácidos, en el que la primera secuencia de aminoácidos comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 9 % de identidad de secuencias con SEC ID N°: 1 y/o (ii) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID N°: 1, y que comprende un epítope de SEC ID N°: 1;

(b) un segundo poli péptido, que comprende una segunda secuencia de aminoácidos, en el que la segunda secuencia de aminoácidos comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 9 % de identidad de secuencias con SEC ID N°: 2 y/o (ii) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID N°: 2, y que comprende un epítope de SEC ID N°: 2; y/o

(c) un tercer poli péptido, que comprende una tercera secuencia de aminoácidos, en el que la tercera secuencia de aminoácidos comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 9 % de identidad de secuencias con SEC ID N°: 3 y/o (¡i) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID N°: 3, y que comprende un epítope de SEC ID N°: 3.

2. Un polipéptido que comprende al menos dos de:

(a) una primera secuencia de aminoácidos que comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 9 % de identidad de secuencias con SEC ID N°: 1 y/o (¡i) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID N°: 1, y que comprende un epítope de SEC ID N°: 1;

(b) una segunda secuencia de aminoácidos que comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 9 % de identidad de secuencias con SEC ID N°: 2 y/o (¡i) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID N°: 2, y que comprende un epítope de SEC ID N°: 2; y/o

(c) una tercera secuencia de aminoácidos que comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 9 % de identidad de secuencias con SEC ID N°: 3 y/o (¡i) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID N°: 3, y que comprende un epítope de SEC ID N°: 3.

3. Un polipéptido que comprende al menos dos del primer, segundo y/o tercer polipéptidos de la reivindicación 1 que comprende la secuencia de aminoácidos:

A-{-X-L-}n-B

en la que: cada X es una secuencia de aminoácidos del primer polipéptido, segundo polipéptido o tercer polipéptido como se define en la reivindicación 1; L es una secuencia de aminoácidos de conectar opcional; A es una secuencia de aminoácidos del extremo N opcional; B es una secuencia de aminoácidos del extremo C opcional; n es un número entero de 2 o más.

4. El polipéptido de la reivindicación 2 o la reivindicación 3, que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: SEC ID N°: 11, 13, 15, 17, 19 y 21.

5. Una bacteria que expresa al menos dos de:

(a) un primer polipéptido que comprende una primera secuencia de aminoácidos, en el que la primera secuencia de aminoácidos comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 9 % de identidad de secuencias con SEC ID N°: 1 y/o (ii) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID N°: 1, y que comprende un epítope de SEC ID N°: 1;

(b) un segundo polipéptido, que comprende una segunda secuencia de aminoácidos, en el que la segunda secuencia de aminoácidos comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 9 % de identidad de secuencias con SEC ID N°: 2 y/o (ii) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID N°: 2, y que comprende un epítope de SEC ID N°: 2; y/o

(c) un tercer polipéptido, que comprende una tercera secuencia de aminoácidos, en el que la tercera secuencia de aminoácidos comprende una secuencia de aminoácidos (i) que tiene al menos el 9 % de identidad de secuencias con SEC ID N°: 3 y/o (ii) que consiste en un fragmento de al menos 7 aminoácidos contiguos de SEC ID N°: 3, y que comprende un epítope de SEC ID N°: 3.

6. Un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 83.

7. Una composición inmunogénica según la reivindicación 1, o un polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 2-4, para su uso en un procedimiento de producción de una respuesta inmunitaria en un mamífero.