Combinación de un Mycobacterium recombinante y un agente biológicamente activo como vacuna.

Una combinación adecuada para uso en un método para provocación de una respuesta inmune TH1,

en donde la combinación comprende un primer constituyente y un segundo constituyente separado, en donde el primer constituyente es una célula bacteriana que comprende al menos una molécula de ácido nucleico recombinante que codifica un péptido o polipéptido de escape fagolisosómico, en donde la célula bacteriana es una célula de Mycobacterium que es deficiente en ureasa; y en donde el segundo constituyente es un antígeno.

Combinación de un Mycobacterium recombinante y un agente biológicamente activo como vacuna La presente invención se refiere a una combinación adecuada para uso en un método de provocación de una respuesta inmune TH1 , en la que la combinación comprende un primer constituyente y un segundo constituyente 5 separado, una célula bacteriana para uso como adyuvante, una composición farmacéutica que comprende la combinación, el uso de la composición o de la composición farmacéutica para la fabricación de un medicamento, la composición para uso en un método de tratamiento, y un método para la fabricación de la composición farmacéutica.

La medicina molecular moderna está fuertemente centrada en el uso de compuestos inmunógenos o compuestos que modulen el sistema inmunitario de un paciente para el tratamiento de dicho paciente. Enfermedades respectivas son, entre otras, tumores y enfermedades infecciosas.

En ambos casos, se administran al cuerpo del paciente compuestos antigénicos, es decir, compuestos que son adecuados para provocar una respuesta inmune o para reforzar una respuesta inmune. Sin embargo, la utilidad de los compuestos respectivos está limitada en muchos casos, lo que requiere un refuerzo de la respuesta inmune a fin de alcanzar un nivel clínicamente relevante de eficiencia y eficacia. Dicho refuerzo puede realizarse por

administración repetida del agente respectivo, o por utilización de un adyuvante.

La técnica anterior proporciona varios adyuvantes tales como aceites minerales, micobacterias desactivadas, compuestos de aluminio y análogos.

Los adyuvantes conocidos en la técnica, sin embargo, no se comportan siempre de una manera suficiente para conseguir las necesidades médicas, en particular en conexión con nuevos regímenes de tratamiento tales como el

uso de células expresantes de citocinas como se describe, por ejemplo, en la Solicitud de Patente Internacional PCT/US94/01631.

La Solicitud de Patente Europea 0902086A1 da a conocer vacunas recombinantes que proporcionan inmunidad protectora contra la tuberculosis. Dicha vacuna comprende una célula Mycobacterium bovis recombinante que comprende al menos una molécula de ácido nucleico recombinante que codifica un polipéptido de fusión que comprende (a) al menos un dominio capaz de provocar una respuesta inmune en un mamífero y (b) un péptido o polipéptido de escape fagolisosómico.

El problema subyacente de la presente invención es por tanto proporcionar composiciones, más particularmente composiciones farmacéuticas, que comprenden al menos un primer constituyente y un segundo constituyente, en donde el primer constituyente es un adyuvante y el segundo constituyente es un agente biológicamente activo.

Este problema se resuelve por la materia que constituye el objeto de las reivindicaciones independientes adjuntas. Realizaciones preferidas pueden deducirse de las reivindicaciones dependientes adjuntas.

Más específicamente, el problema subyacente en la presente invención se resuelve en un primer aspecto por una combinación adecuada para uso en un método de provocar una respuesta inmune TH1, en donde la combinación comprende un primer constituyente y un segundo constituyente separado, en donde el primer constituyente es una célula bacteriana que comprende al menos una molécula de ácido nucleico recombinante que codifica un péptido o polipéptido de escape fagolisosómico, en donde la célula bacteriana es una célula de Mycobacterium que es deficiente en ureasa; y en donde el segundo constituyente es un antígeno.

Más específicamente, el problema subyacente de la presente invención se resuelve en un segundo aspecto por una célula bacteriana que comprende al menos una molécula de ácido nucleico recombinante que codifica un péptido o polipéptido de escape fagolisosómico, en donde la célula bacteriana es una célula de Mycobacterium que es deficiente en ureasa, para uso como adyuvante.

En una realización del primer y el segundo aspecto, la célula es una célula de Mycobacterium bovis.

En una realización del primer y el segundo aspecto, al menos un ácido nucleico que codifica una subunidad celular de ureasa de la célula bacteriana está desactivado.

En una realización del primer y el segundo aspecto, al menos la secuencia codificante de la subunidad C de ureasa bacteriana está desactivada.

En una realización del primer y el segundo aspecto, el dominio de escape fagolisosómico es un dominio de escape fagolisosómico de Listeria.

En una realización del primer y el segundo aspecto, el dominio fagolisosómico está codificado por una molécula de 50 ácido nucleico seleccionada del grupo que comprende:

a) una secuencia nucleotídica que comprende los nucleótidos 211-1722 que se muestran en SEQ. ID. NO. 1;

b) una secuencia nucleotídica que codifica la misma secuencia de aminoácidos que la secuencia de a) ; y

c) una secuencia nucleotídica que se hibrida en condiciones severas con la secuencia de a) o b) .

En una realización del primer y el segundo aspecto, la célula bacteriana comprende al menos una molécula de ácido nucleico recombinante que codifica un péptido o polipéptido capaz de provocar una respuesta inmune en un 5 mamífero.

En una realización del primer y el segundo aspecto, el péptido o polipéptido se selecciona de autoantígenos, antígenos tumorales, antígenos virales, antígenos parasitarios, antígenos bacterianos y fragmentos inmunógenos de los mismos.

En una realización del primer y el segundo aspecto, el péptido o polipéptido forma parte de un polipéptido de fusión.

En una realización del primer y el segundo aspecto, el péptido de fusión comprende a) al menos un dominio de un polipéptido, en donde el dominio de polipéptido es capaz de provocar una respuesta inmune en un mamífero, y

b) un dominio de escape fagolisosómico.

En una realización del primer y el segundo aspecto, el polipéptido es el polipéptido que se define en las 15 realizaciones anteriores o parte del mismo.

En una realización del primer y el segundo aspecto, el dominio de escape fagolisosómico es un dominio del dominio de escape fagolisosómico que se define en cualquiera de las realizaciones anteriores.

En una realización del primer y el segundo aspecto, la célula bacteriana es rBCGAureC:Hly.

En una realización del primer aspecto, en donde el antígeno se selecciona del grupo que comprende una célula 20 tumoral inmunógena, una célula eucariota que expresa un antígeno asociado a un tumor, una célula eucariota que expresa un antígeno específico de tumor y una célula que expresa un antígeno parasitario.

En una realización del primer aspecto, la célula tumoral es un tumor inmunógeno y en la que la célula tumoral se selecciona preferiblemente del grupo que comprende células de melanoma, células de carcinoma renal, células de tumor de mama, células de tumor cerebral, células de tumor prostático, cáncer de pulmón no microcítico, carcinoma de colon, y tumor escamoso de cabeza y cuello.

En una realización del primer aspecto, la célula es una célula alogénica y es coincidente con el HLA clase I.

En una realización del primer aspecto, el antígeno parasitario es la proteína gp190/MSP1 de Plasmodium, preferiblemente Plasmodium falciparum, o fragmento del mismo, capaz de provocar una respuesta inmune en un mamífero.

En una realización del primer aspecto, el antígeno es la proteína gp190/MSP1 de Plasmodium, preferiblemente Plasmodium falciparum, o fragmento del mismo capaz de provocar una respuesta inmune en un mamífero.

En una realización del primer aspecto, el antígeno es citomegalovirus humano.

En una realización del primer aspecto, el antígeno es una partícula viral o una multitud de las mismas, liberada preferiblemente después de infección de células de mamífero por citomegalovirus humano, en donde las partículas 35 (a) están rodeadas por una membrana lipídica en la que están embebidas glicoproteínas virales, y (b) no contiene DNA viral ni cápsidas.

En una realización del primer aspecto, las partículas contienen una proteína de fusión que comprende una o más partes del antígeno de las células T pp65 (UL83) y una o más partes de una o más proteínas que no son pp65.

En una realización del primer aspecto, el antígeno de las células T pp65 está fusionado a una o más partes de una 40 glicoproteína del citomegalovirus humano, en donde la glicoproteína se selecciona del grupo que comprende la glicoproteína gH de HCMV, la proteína IE1 de HCMV (ppUL123) , y la glicoproteína gB de HCMV.

En una realización del... [Seguir leyendo]

1. Una combinación adecuada para uso en un método para provocación de una respuesta inmune TH1, en donde la combinación comprende un primer constituyente y un segundo constituyente separado, en donde el primer constituyente es una célula bacteriana que comprende al menos una molécula de ácido nucleico recombinante que codifica un péptido o polipéptido de escape fagolisosómico, en donde la célula bacteriana es una célula de Mycobacterium que es deficiente en ureasa; y en donde el segundo constituyente es un antígeno.

2. Una célula bacteriana que comprende al menos una molécula de ácido nucleico recombinante que codifica un péptido o polipéptido de escape fagolisosómico, en donde la célula bacteriana es una célula de Mycobacterium que es deficiente en ureasa, para uso como adyuvante.

3. La combinación conforme a la reivindicación 1 y la célula bacteriana conforme a la reivindicación 2 para uso como se define en la reivindicación 2, en donde la célula es una célula de Mycobacterium bovis.

4. La combinación conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3, y la célula bacteriana conforme a una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 3 para uso como se define en la reivindicación 2, en donde al menos un ácido nucleico codificante de una subunidad celular de ureasa de la célula bacteriana está desactivado.

5. La combinación conforme a la reivindicación 4 y la célula bacteriana conforme a la reivindicación 4 para uso como se define en la reivindicación 2, en donde al menos la secuencia codificante de la subunidad C de ureasa bacteriana está desactivada.

6. La combinación conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 5, y la célula bacteriana conforme a una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5 para uso como se define en la reivindicación 2, en donde el dominio de 20 escape fagolisosómico es un dominio de escape fagolisosómico de Listeria.

7. La combinación conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 6 y la célula bacteriana conforme a una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 6 para uso como se define en la reivindicación 2, en donde el dominio fagolisosómico está codificado por una molécula de ácido nucleico seleccionada del grupo que comprende:

a) una secuencia de nucleótidos que comprende los nucleótido.

21. 1722 como se muestra en SEQ. ID. NO. 25 1;

b) una secuencia de nucleótidos que codifica la misma secuencia de aminoácidos que la secuencia de a) ; y

c) una secuencia de nucleótidos que se hibrida en condiciones severas con la secuencia de a) o b) .

8. La combinación conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 7 y la célula bacteriana conforme a una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7 para uso como se define en la reivindicación 2, en donde la célula bacteriana comprende al menos una molécula de ácido nucleico recombinante que codifica un péptido o polipéptido capaz de provocar una respuesta inmune en un mamífero.

9. La combinación conforme a la reivindicación 8 y la célula bacteriana conforme a la reivindicación 8 para uso como se define en la reivindicación 2, en donde el péptido o polipéptido se selecciona de autoantígenos, antígenos tumorales, antígenos virales, antígenos parasitarios, antígenos bacterianos y fragmentos inmunógenos de los mismos.

10. La combinación conforme a la reivindicación 8 ó 9 y la célula bacteriana conforme a la reivindicación 8 ó 9 para uso como se define en la reivindicación 2, en donde el péptido o polipéptido forma parte de un polipéptido de fusión.

11. La combinación conforme a la reivindicación 10 y la célula bacteriana conforme a la reivindicación 10 para 40 uso como se define en la reivindicación 2, en donde el polipéptido de fusión comprende a) al menos un dominio de un polipéptido, en donde el dominio de polipéptido es capaz de provocar una respuesta inmune en un mamífero, y

b) un dominio de escape fagolisosómico.

12. La combinación conforme a la reivindicación 11 y la célula bacteriana conforme a la reivindicación 11 para 45 uso como se define en la reivindicación 2, en donde el polipéptido es el polipéptido que se define en la reivindicación 8 o parte del mismo.

13. La combinación conforme a la reivindicación 11 ó 12 y la célula bacteriana conforme a la reivindicación 11 ó 12 para uso como se define en la reivindicación 2, en donde el dominio de escape fagolisosómico es un dominio del dominio de escape fagolisosómico como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.

14. La combinación conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 13 y la célula bacteriana conforme a una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 13 para uso como se define en la reivindicación 2, en donde la célula bacteriana es rBCG ΔureC:Hly.

15. La combinación conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 14, en donde el antígeno se selecciona

del grupo que comprende una célula tumoral inmunógena, una célula eucariota que expresa un antígeno asociado a un tumor, una célula eucariota que expresa un antígeno específico de tumor y una célula que expresa un antígeno parasitario.

16. La combinación conforme a la reivindicación 6, en donde la célula del tumor es un tumor inmunógeno y en donde la célula del tumor se selecciona preferiblemente del grupo que comprende células de melanoma, células de carcinoma renal, células de tumor de mama, células de tumor cerebral, células de tumor prostático, cáncer de pulmón no microcítico, carcinoma de colon, y tumor escamoso de cabeza y cuello.

17. La combinación conforme a cualquiera de las reivindicaciones 15 a 16, en donde la célula es una célula alogénica y está adaptada al HLA clase I.

18. La combinación conforme a la reivindicación 15, en donde el antígeno parasitario es la proteína gp190/MSP1

de Plasmodium, preferiblemente Plasmodium falciparum, o un fragmento de la misma capaz de provocar una respuesta inmune en un mamífero.

19. La combinación conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 14, en donde el antígeno es la proteína gp190/MSP1 de Plasmodium, preferiblemente Plasmodium falciparum, o un fragmento de la misma capaz de provocar una respuesta inmune en un mamífero.

20. La combinación conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 14, en donde el antígeno es citomegalovirus humano.

21. La combinación conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 14, en donde el antígeno es una partícula viral o una multitud de las mismas, liberada (s) preferiblemente después de infección de células de mamífero por el citomegalovirus humano, en donde las partículas (a) están rodeadas por una membrana lipídica en la cual están embebidas glicoproteínas virales, y (b) no contienen cantidad alguna de DNA viral ni cápsidas.

22. La combinación conforme a la reivindicación 21, en donde las partículas contienen una proteína de fusión que comprende una o más partes del antígeno de las células T pp65 (UL83) y una o más partes de una o más proteínas que no son pp65.

23. La combinación conforme a la reivindicación 22, en donde el antígeno pp65 de las células T está fusionado a

una o más partes de una glicoproteína del citomegalovirus humano, en donde la glicoproteína se selecciona del grupo que comprende la glicoproteína gH de HCMV, la proteína IE1 de HCMV (ppUL123) , y la glicoproteína gB de HCMV.

24. La combinación conforme a la reivindicación 22, en donde el antígeno de las células T está fusionado a una o más partes de una proteína que forma parte de un patógeno humano distinto de HCMV.

25. La combinación conforme a la reivindicación 24, en donde el patógeno se selecciona del grupo que comprende HIV-1, HBV, HCV y gripe.

26. La combinación conforme a la reivindicación 21 a 25, en donde la (s) partícula (s) contiene (n) partes de al menos dos glicoproteínas que son variantes de una glicoproteína particular de cepas de HCMV diferentes.

27. La combinación conforme a la reivindicación 26, en donde una de las dos variantes de la glicoproteína 40 particular de HCMV es la variante de la cepa Towne de HCMV, y la otra es la variante de la cepa Ad 169 de HCMV.

28. La combinación conforme a cualquiera de las reivindicaciones 21 a 27, en donde las células de mamífero son fibroblastos, preferiblemente fibroblastos de prepucio.

29. La combinación conforme a cualquiera de las reivindicaciones 21 a 28, en donde la partícula es un cuerpo denso.

30. La combinación conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 14, en donde el antígeno es un cuerpo denso, preferiblemente un cuerpo denso de HCMV, o un cuerpo denso conforme a la reivindicación 29.

31. Una composición farmacéutica, en donde la composición comprende una combinación conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 30 y un portador farmacéuticamente aceptable.

32. Uso de una combinación conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 30 o de una composición

farmacéutica conforme a la reivindicación 31 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de una enfermedad seleccionada del grupo que comprende cáncer y enfermedades infecciosas.

33. Uso conforme a la reivindicación 32, en donde el cáncer es un tumor inmunógeno y se selecciona más preferiblemente del grupo que comprende cáncer de próstata, melanoma, carcinoma renal, tumor de mama, tumores cerebrales, cáncer de pulmón no microcítico, carcinoma de colon, y tumor escamoso de cabeza y cuello.

34. Uso conforme a la reivindicación 32, en donde la enfermedad infecciosa es malaria.

35. Uso conforme a la reivindicación 34, en donde el antígeno es la proteína gp190/MSP1 de Plasmodium o un fragmento de la misma capaz de provocar una respuesta inmune en un mamífero.

36. Uso conforme a la reivindicación 32, en donde la enfermedad infecciosa es infección de HCMV.

37. Uso conforme a la reivindicación 36, en donde el antígeno es un cuerpo denso como se define en cualquiera de las reivindicaciones anteriores.

38. Uso de una combinación conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 30 para la fabricación de una vacuna terapéutica y/o profiláctica para provocar una respuesta inmune TH1.

39. La combinación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 30 o la composición farmacéutica de la reivindicación 31, para uso en un método para el tratamiento de un paciente que sufre una enfermedad y se encuentra en necesidad de dicho tratamiento, que comprende administrar la combinación conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 30 o la composición farmacéutica conforme a la reivindicación 31.

40. La combinación y composición farmacéutica conforme a la reivindicación 39, en donde la enfermedad se selecciona del grupo que comprende cáncer y enfermedades infecciosas.

41. Un método para la fabricación de una composición farmacéutica conforme a la reivindicación 31, que comprende los pasos de

- proporcionar como primer constituyente una célula bacteriana que comprende al menos una molécula de ácido nucleico recombinante que codifica un péptido o polipéptido de escape fagolisosómico, en donde la célula bacteriana es una célula de Mycobacterium que es deficiente en ureasa;

- proporcionar como segundo constituyente un antígeno; y

- formular el primer constituyente y el segundo constituyente en una composición farmacéutica.