Anticuerpos anti IgE apoptóticos que se unen con el IgE unido a membrana.

Un anticuerpo anti IgE/M1' que se une específicamente con un epítopo en el segmento M1' de IgE definido por los restos 317 a 351 de SEC ID Nº:

1 y que induce apoptosis en linfocitos B que expresan IgE.

Anticuerpos anti IgE apoptóticos que se unen con el IgE unido a membrana Retroactividad

La invención reivindica el beneficio de prioridad según 35 U.S.C. § 119 (e) del documento U.S.S.N. 60/896.339, presentado el 22 de marzo de 2007.

Antecedentes de la invención Campo de la invención La presente invención se refiere a anticuerpos anti IgE apoptóticos, ácidos nucleicos que los codifican, composiciones terapéuticas de los mismos, y su uso en el tratamiento de trastornos mediados por IgE.

Descripción de la técnica relacionada La alergia se refiere a ciertas enfermedades en las que respuestas inmunitarias a antígenos ambientales provocan inflamación tisular y disfunción orgánica. Las características clínicas de cada enfermedad alérgica reflejan la respuesta inflamatoria inducida de forma inmunológica en el órgano o tejido implicado. Estas características son generalmente independientes de las propiedades químicas o físicas del antígeno. La diversidad de respuestas alérgicas surge de la aplicación de diferentes rutas efectoras inmunológicas, cada una de las cuales genera un patrón único de inflamación.

La alergia es común en todo el mundo. La predilección de enfermedades específicas, sin embargo, varía entre diferentes grupos de edad, sexos y razas. La prevalencia de sensibilidad a alérgenos específicos se determina tanto por predilección genética como por los factores geográficos y culturales que son responsables de la exposición al alérgeno. Un estado clínico de alergia afecta solamente a algunos individuos que se encuentran con cada alérgeno. La aparición de enfermedad alérgica tras la exposición a un alérgeno requiere no solamente “sensibilización” anterior sino también otros factores que determinan la localización de la reacción en un órgano particular.

Un proceso biológico que precede a la enfermedad de alergia tras la exposición a alérgeno induce una respuesta inmunitaria conocida como “sensibilización” o la fase de sensibilización. Una vez que se produce la sensibilización, un individuo no se hace sintomático hasta que haya una exposición posterior al alérgeno. El efecto de la sensibilización también se conoce como memoria inmunitaria.

Una de las rutas primarias por las que se induce una inflamación es mediante la inmunoglobulina E (IgE) . IgE desempeña un papel central en las alergias según su papel como receptor de alérgeno en la superficie de mastocitos y basófilos. Los anticuerpos IgE se fijan a la superficie de mastocitos y basófilos en la parte Fc de la molécula con un receptor de superficie celular de alta afinidad, llamado FcRI. La reacción alérgica se inicia cuando la molécula de alérgeno polivalente se une con anticuerpos que ocupan estos receptores. El resultado es un enlace del FcRI, que a su vez señaliza de forma intracelular provocando la liberación y activación de mediadores de inflamación: histamina, leucotrienos, factores quimiotácticos, factor activador de plaquetas y proteinasas. Estos mediadores activados actúan localmente y provocan aumento de la permeabilidad vascular, vasodilatación, contracción del músculo liso y secreción de glándulas mucosas. Dichos acontecimientos se denominan clínicamente la fase inmediata o temprana, y se producen en los primeros 15-30 minutos después de la exposición al alérgeno. Durante las 12 horas siguientes hay una infiltración tisular progresiva de las células inflamatorias, que avanzan desde neutrófilos a eosinófilos a células mononucleares en respuesta a otros mediadores químicos no completamente entendidos. Este periodo de tiempo 6-12 horas después de la exposición a alérgeno se designa la fase tardía y se caracteriza por manifestaciones clínicas de inflamación celular. Ya que se producen reacciones de fase tardía, especialmente en el pulmón, en ausencia de reacciones de fase temprana, aún no se entiende completamente si la reacción de fase tardía está necesariamente mediada por IgE.

IgE existe en una forma unida a membrana y en una forma secretada. Estas formas distintas parecen ser variantes de corte y empalme. Previos enfoques para conseguir efecto terapéutico regulando negativamente IgE que se dirige principalmente a la forma secretada (por ejemplo, omalizumab XOLAIR®) , para prevenir o desmontar “montaje” adicional del sistema inmunitario. La forma secretada de IgE es una forma más corta, esencialmente la región Fc termina en el dominio CH4 (Figura 1) , mientras que la forma más larga incluye restos C terminales adicionales incluyendo los péptidos codificados por los exones conocidos como M1/M1’ y M2. Aunque algunos han indicado dos formas distintas de IgE unido a membrana, tanto con como sin un segmento de 52 aminoácidos conocido como M1’ [Batista et al., J. Exp. Med. 184: 2197-2205 (1996) ], los Solicitantes fueron incapaces de verificar que ninguna forma unida a membrana carezca de este segmento M1’. La terapia convencional con anticuerpos anti IgE, que se unen con la forma secretada de IgE, da como resultado reducción IgE en suero libre, pero no en suero total. Casale et al.,

J. Allergy Clin. Immunol. 100 (1) : 110-121 (1997) .

Chen et al. (2002) International Archives of Allergy and Immunology 128 (4) , 315-324, Chang (2006) Allergy and Asthma Proceedings: The Official Journal of Regional and State Allergy Societies 27 (2) , S7-14, Chen et al. (2001) Faseb Journal 15 (5) , A1018 y Poggianella et al. (2006) Journal of Immunology 177 (6) , 3597-3605 se refieren, en general, al segmento M1’ de IgE. Chang (2006) describe el dominio de 52 aminoácidos localizado entre el dominio CH4 y el péptido de anclaje de membrana C terminal de IgE, denominado el dominio CépsilonmX. Por separado, Chen et al. (2002) y Chen et al. (2001) describen anticuerpos que se unen con este dominio, generalmente o en una región próxima al extremo C terminal. Por separado, Poggianella et al. (2006) indica que este dominio, denominado el dominio próximo a membrana extracelular (EMPD) , puede estar implicado en la apoptosis.

Se ha indicado además que en ausencia de señal de antígeno, los receptores de linfocitos B (es decir, inmunoglobulinas) que están entrecruzados son propensos a apoptosis.

Resultar sorprendente que los Solicitantes han descubierto que la dirección de una región N terminal de segmento M1’ de IgE con anticuerpos anti IgE puede dar como resultado la inducción de apoptosis de linfocito B. Dado que la descendencia de linfocitos B activados puede dar como resultado células plasmáticas que realizan y secretan la forma secretada de IgE, el agotamiento de linfocitos B productores de IgE mediante apoptosis ofrece un nuevo enfoque terapéutico para el tratamiento de alergia.

Sumario de la invención La presente invención proporciona anticuerpos anti IgE apoptóticos, o fragmentos funcionales de los mismos, y su uso en el tratamiento de trastornos mediados por IgE como se definen en las reivindicaciones. La invención proporciona además composiciones, métodos para inhibir la producción y secreción de IgE desde linfocitos B, y métodos para agotar específicamente linfocitos B productores de IgE, y reducir IgE en suero total como se define en las reivindicaciones.

En una realización la invención proporciona un anticuerpo anti IgE/M1’ que se une específicamente con el segmento M1’ de IgE y que induce la apoptosis en linfocitos B que expresan IgE como se define en las reivindicaciones. En un aspecto específico, el anticuerpo agota específicamente los linfocitos B productores de IgE. En otro aspecto específico, el anticuerpo reduce IgE en suero total. En otro aspecto específico más, el anticuerpo reduce tanto IgE en suero total como en suero libre. En un aspecto específico adicional, el IgE en suero es específico de alérgeno. En un aspecto específico adicional, el anticuerpo se une con IgE que es de origen humano, de mono Rhesus y de mono cynomolgus. En un aspecto específico adicional, el anticuerpo es quimérico. Es un aspecto específico adicional, el anticuerpo está humanizado. En un aspecto adicional, el anticuerpo es humano.

En otra realización, la invención proporciona un anticuerpo anti IgE/M1’ que se une específicamente con uno cualquiera de los epítopos de M1’ correspondientes a los péptidos identificados en la Figura 5. En un aspecto específico, el anticuerpo se une específicamente con el mismo epítopo que el que se une con un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en: 47H4, 7A6, 26A11, 47H4v5, 7A6v1 y 26A11v6. En otro aspecto específico, el anticuerpo se une con un epítopo correspondiente a un péptido seleccionado del grupo que consiste en: péptido 4 (SEC ID Nº : 8) , péptido... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo anti IgE/M1’ que se une específicamente con un epítopo en el segmento M1’ de IgE definido por los restos 317 a 351 de SEC ID Nº : 1 y que induce apoptosis en linfocitos B que expresan IgE.

2. El anticuerpo de la reivindicación 1, en donde el anticuerpo es capaz de unirse con IgE que es de origen humano, de mono rhesus o de mono cynomolgus.

3. El anticuerpo de la reivindicación 1 o de la reivindicación 2, en donde el anticuerpo agota específicamente linfocitos B productores de IgE cuando se administra in vivo una cantidad terapéuticamente eficaz a un mamífero y opcionalmente reduce IgE en suero total o reduce IgE en suero libre; en donde opcionalmente el IgE es específico de alérgeno.

4. El anticuerpo de la reivindicación 3 que es quimérico, humanizado o humano.

5. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores que se une específicamente con el mismo epítopo que uno que se une con un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en: 47H4 (ATTC Dep. Nº PTA8270) , 7A6 (ATTC Dep. Nº PTA-8268) , 26A11 (ATTC Dep. Nº PTA-8262) , 47H4v5 que comprende una cadena ligera variable que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada como SEC ID Nº : 31 (Figura 6C) y una cadena pesada variable que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada como SEC ID Nº : 41 (Figura 6F) , 7A6v1 que comprende una cadena ligera variable que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada como SEC ID Nº : 28 (Figura 6B) y una cadena pesada variable que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada como SEC ID Nº : 37 (Figura 6E) y 26A11 v6 que comprende una cadena ligera variable que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada como SEC ID Nº : 24 (Figura 6A) y una cadena pesada variable que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada como SEC ID Nº : 35 (Figura 6D) .

6. El anticuerpo de la reivindicación 5 en el que el epítopo corresponde a un péptido seleccionado del grupo que consiste en: péptido 4 (SEC ID Nº : 8) , péptido 5 (SEC ID Nº : 9) , péptido 7 (SEC ID Nº : 11) o péptido 8 (SEC ID Nº : 12) y preferentemente en el que el epítopo corresponde al péptido 4 (SEC ID Nº : 8) .

7. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores que se une con una afinidad de unión de Scatchard que es equivalente a la del anticuerpo murino anti IgE/M1’ 47H4 (ATTC Dep. Nº PTA-8270) , y opcionalmente en el que la afinidad es entre 0, 30 y 0, 83 nm.

8. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores que se une específicamente con un segmento M1’ de IgE con una afinidad de unión de Scatchard que es equivalente a la del anticuerpo humanizado anti IgE/M1’ 47H4v5 que comprende una cadena ligera variable que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada como SEC ID Nº : 31 (Figura 6C) y una cadena pesada variable que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada como SEC ID Nº : 41 (Figura 6F) , y opcionalmente en el que la afinidad es aproximadamente 1, 5 nm.

9. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores que comprende las HVR de cadena pesada y de cadena ligera de un anticuerpo o de un fragmento de unión a antígeno del mismo seleccionadas del grupo que consiste en: 26A11 como se muestra en SEC ID Nº : 21 (Figura 6A) y SEC ID Nº : 33 (Figura 6D) , 26A11v.1-16 como se muestra SEC ID Nº .

2. 26 (Figura 6A) and SEC ID Nº , : 34 y 35 (Figura 6D) , 7A6 como se muestra en SEC ID Nº : 27 (Figura 6B) and SEC ID Nº : 36 (Figura 6E) , 7A6v1 como se muestra en SEC ID Nº : 28 (Figura 6B) y SEC ID Nº : 37 (Figura 6E) , 47H4 como se muestra en SEC ID Nº : 29 (Figura 6C) y SEC ID Nº : 38 (Figura 6F) , y 47H4v1-6 como se muestra en SEC ID Nº : 30 y 31 (Figura 6C) y SEC ID Nº .

3. 42 (Figura 6F) , y que comprende preferentemente las HVR de cadena pesada y de cadena ligera o un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo de 47H4v1-6 como se muestra en SEC ID Nº : 30 y 31 (Figura 6C) y SEC ID Nº .

3. 42 (Figura 6F) .

10. El anticuerpo de la reivindicación 9 que comprende regiones variables de las cadenas pesada y ligera del anticuerpo o del fragmento de unión a antígeno del mismo seleccionado del grupo que consiste en: 26A11 como se muestra en SEC ID Nº : 21 (Figura 6A) y SEC ID Nº : 33 (Figura 6D) , 26A11v.1-16 como se muestra en SEC ID Nº .

2. 26 (Figura 6A) y SEC ID Nº : 34 y 35 (Figura 6D) , 7A6 como se muestra en SEC ID Nº : 27 (Figura 68) y SEC ID Nº : 36 (Figura 6E) , 7A6v1 como se muestra en SEC ID Nº : 28 (Figura 6B) y SEC ID Nº : 37 (Figura 6E) , 47H4 como se muestra en SEC ID Nº : 29 (Figura 6C) y SEC ID Nº : 38 (Figura 6F) , y 47H4v1-6 como se muestra en SEC ID Nº : 30 y 31 (Figura 6C) y SEC ID Nº .

3. 42 (Figura 6F) .

11. El anticuerpo de la reivindicación 10 que está afucosilado.

12. Un péptido seleccionado del grupo que consiste en: péptido 4 (SEC ID Nº : 8) , péptido 5 (SEC ID Nº : 9) , péptido 7 (SEC ID Nº : 11) o péptido 8 (SEC ID Nº : 12) .

13. Una composición que comprende el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-11 en combinación con al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.

14. La composición de la reivindicación 13 que comprende además uno o más fármacos seleccionados del grupo que consiste en: anticuerpo anti IgE, antihistamínico, broncodilatador, glucocorticoide, AINE, antagonista de TNF, antagonista de integrina, agente inmunosupresor, antagonista de IL-4, antagonista de IL-13, antagonista doble de IL4/IL-13, DMARD, anticuerpo que se une con un marcador de superficie de linfocitos B y antagonista de BAFF.

15. Un ácido nucleico que codifica un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende las HVR de cadenas pesada y ligera de un anticuerpo anti IgE/M1’ apoptótico o de un fragmento de unión a antígeno del mismo seleccionado del grupo que consiste en: 26A11 como se muestra en SEC ID Nº : 21 (Figura 6A) y SEC ID Nº : 33 (Figura 6D) , 26A11 v1-16 como se muestra en SEC ID Nº .

2. 26 (Figura 6A) y SEC ID Nº : 34 y 35 (Figura 6D) , 7A6 como se muestra en SEC ID Nº : 27 (Figura 6B) y SEC ID Nº : 36 (Figura 6E) , 7A6v1 como se muestra en SEC ID Nº : 28 (Figura 6B) y SEC ID Nº : 37 (Figura 6E) , 47H4 como se muestra en SEC ID Nº : 29 (Figura 6C) y SEC ID Nº : 38 (Figura 6F) , y 47H4v1-6 como se muestra en SEC ID Nº : 30 y 31 (Figura 6C) y SEC ID Nº .

3. 42 (Figura 6F) .

16. El ácido nucleico de la reivindicación 15, que comprende además ácido nucleico que codifica las regiones variables de las cadenas pesada y ligera de la secuencia de anticuerpo seleccionada del grupo que consiste en: 26A11 como se muestra en SEC ID Nº : 21 (Figura 6A) y SEC ID Nº : 33 (Figura 6D) , 26A11v1-16 como se muestra en SEC ID Nº .

2. 26 (Figura 6A) y SEC ID Nº : 34 y 35 (Figura 6D) , 7A6 como se muestra en SEC ID Nº : 27 (Figura 6B) y SEC ID Nº : 36 (Figura 6E) , 7A6v1 como se muestra en SEC ID Nº : 28 (Figura 6B) y SEC ID Nº : 37 (Figura 6E) , 47H4 como se muestra en SEC ID Nº : 29 (Figura 6C) y SEC ID Nº : 38 (Figura 6F) , y 47H4v1-6 como se muestra en SEC ID Nº : 30 y 31 (Figura 6C) y SEC ID Nº .

3. 42 (Figura 6F) .

17. El ácido nucleico de la reivindicación 16, en el que el anticuerpo codificado está afucosilado.

18. Un vector en el que el ácido nucleico de una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17 está unido operativamente.

19. Una célula hospedadora que comprende el vector de la reivindicación 18.

20. La célula hospedadora de la reivindicación 19 que es de mamífero, y preferentemente que es Ovario de Hámster Chino.

21. Un proceso para producir un anticuerpo anti IgE/M1’ apoptótico o fragmento funcional que comprende cultivar la célula hospedadora de la reivindicación 19 o de la reivindicación 20 en condiciones adecuadas para expresión del anticuerpo o del fragmento, y recuperar el anticuerpo o el fragmento.

22. Un artículo de fabricación que incluye la composición de la reivindicación 13 o de la reivindicación 14 y un prospecto que indica el uso para el tratamiento de un trastorno mediado por IgE.

23. El artículo de la reivindicación 22 que es (i) un vial o (ii) una jeringa precargada, que comprende opcionalmente además un dispositivo de inyección, tal como un autoinyector.

24. Un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 para uso en un método para agotar específicamente linfocitos B productores de IgE, comprendiendo el método administrar a un mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de dicho anticuerpo anti IgE/M1’, y opcionalmente en donde el anticuerpo tiene actividad ADCC.

25. Un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 para uso en un método para tratar un trastorno mediado por IgE, comprendiendo el método administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de dicho anticuerpo anti IgE/M1’.

26. El anticuerpo para uso en un método de tratamiento de la reivindicación 25 en el que:

(i) el trastorno mediado por IgE se selecciona del grupo que consiste en: rinitis alérgica, asma alérgica, asma no alérgica, dermatitis atópica, gastroenteropatía alérgica, anafilaxis, urticaria, alergias alimentarias, aspergilosis broncopulmonar alérgica, enfermedades parasitarias, cistitis intersticial, síndrome de híper IgE, ataxia telangiectasia, síndrome de Wiskott-Aldrich, linfoplasia atímica, mieloma de IgE, reacción de injerto contra hospedador y púrpura alérgica; y/o

(ii) el anticuerpo es para administración en combinación con una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un fármaco seleccionado del grupo que consiste en: anticuerpo anti IgE, antihistamínico, broncodilatador, glucocorticoide, AINE, descongestionador, supresor de la tos, analgésico, antagonista de TNF, antagonista de integrina, agente inmunosupresor, antagonista de IL-4, antagonista de IL-13, antagonista doble de IL-4/IL-13, DMARD, anticuerpo que se une con un marcador de superficie de linfocitos B y antagonista de BAFF; y/o

(iii) el anticuerpo es para administración en un régimen de tratamiento combinado que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de dicho anticuerpo anti IgE/M1’ antes de, simultáneamente con o después de la administración de un método conocido del tratamiento para trastornos alérgicos.

27. El anticuerpo para uso en un método de tratamiento de la reivindicación 26 (iii) , en el que:

(a) el tratamiento conocido para trastorno alérgico comprende la administración de un anticuerpo anti IgE, antihistamínico, un broncodilatador, un glucocorticoide, un fármaco antiinflamatorio no esteroideo, un inmunosupresor, un antagonista de IL-4, un antagonista de IL-13, un antagonista doble de IL-4/IL-13, un descongestionador, un supresor de la tos o un analgésico; o

(b) el tratamiento conocido para trastorno alérgico comprende un régimen de tratamiento de desensibilización de alérgenos.

28. El anticuerpo para uso en un método de tratamiento de una cualquiera de las reivindicaciones 24 a 27, en el que el método es para prevenir o reducir la producción de IgE inducida por alérgenos.

29. Uso de un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno mediado por IgE.

30. El uso de la reivindicación 29, en el que:

(i) el trastorno mediado por IgE se selecciona del grupo que consiste en: rinitis alérgica, asma alérgica, asma no alérgica, dermatitis atópica, gastroenteropatía alérgica, anafilaxis, urticaria, alergias alimentarias, aspergilosis broncopulmonar alérgica, enfermedades parasitarias, cistitis intersticial, síndrome de híper IgE, ataxia telangiectasia, síndrome de Wiskott-Aldrich, linfoplasia atímica, mieloma de IgE, reacción de injerto contra hospedador y púrpura alérgica; y/o

(ii) el anticuerpo es para administración en combinación con una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un fármaco seleccionado del grupo que consiste en: anticuerpo anti IgE, antihistamínico, broncodilatador, glucocorticoide, AINE, descongestionador, supresor de la tos, analgésico, antagonista de TNF, antagonista de integrina, agente inmunosupresor, antagonista de IL-4, antagonista de IL-13, antagonista doble de IL-4/IL-13, DMARD, anticuerpo que se une con un marcador de superficie de linfocitos B y antagonista de BAFF.

31. Un hibridoma murino depositado en la ATCC el 21 de marzo de 2007 seleccionado del grupo que consiste en: PTA-8260, PTA-8261, PTA-8262, PTA-8263, PTA-8264, PTA-8265, PTA-8266, PTA-8267, PTA-8268, PTA-8269, PTA-8270.

32. Un anticuerpo que es secretado por el hibridoma de la reivindicación 31.

33. Un animal transgénico que expresa el segmento M1’ humano de IgE que comprende los restos 317 a 351 de SEC ID Nº : 1.