Anticuerpo anti-factor B humanizado.

Un anticuerpo anti-factor B humano modificado o un fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de manera selectiva al factor B en el tercer dominio de repeticiones consenso cortas ("SCR") e impide la formación del complejo C3bBb,

en el que el anticuerpo humano modificado o el fragmento de unión al antígeno del mismo tiene una constante de disociación en equilibrio ("KD") de entre 3,0x10-9 M y 7,0x10-9 M, y en el que:

(a) el anticuerpo anti-factor B humano modificado o el fragmento de unión al antígeno del mismo comprende un polipéptido de la región VH seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID Nº:14, SEQ 10 NO:16, SEQ ID Nº:18, y SEQ ID Nº:20, y un polipéptido de la región VH seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID Nº:15, SEQ ID Nº:17, SEQ ID Nº:35, SEQ ID Nº:19, SEQ ID Nº:36, SEQ ID Nº:21 y SEQ ID Nº:37; o

(b) el anticuerpo anti-factor B humano modificado o un fragmento de unión al antígeno del mismo comprende un polipéptido de la región VH que comprende la región CDR3-FR4 seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID Nº:22, SEQ ID Nº:24, SEQ ID Nº:26 y SEQ ID Nº:28, y un polipéptido de la región VH que comprende la región CDR3-FR4 seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID Nº:23, SEQ ID Nº:25, SEQ ID Nº:27, y SEQ ID Nº:29.

Anticuerpo anti-factor B humanizado Campo de la invención

La presente invención se refiere a nuevas formas modificadas de un anticuerpo monoclonal y a los fragmentos de unión al antígeno del mismo que se unen a la proteína del complemento factor B y que Inhiben de manera selectiva la ruta alternativa del complemento. La invención también se refiere en general al uso de tales anticuerpos y fragmentos de unión al antígeno de los mismos para tratar enfermedades en las que desempeña un papel la ruta alternativa del complemento. En particular, la invención se refiere al uso de tales anticuerpos y fragmentos de unión al antígeno de los mismos para inhibir la activación de la ruta alternativa del complemento, y para tratar enfermedades en las que está implicada la activación de la ruta alternativa del complemento. Tales trastornos incluyen, pero sin limitación, hipersensibilidad de las vías respiratorias e inflamación de las vías respiratorias, lesión por isquemia-reperfusión, y trastornos relacionados en animales, que incluyen seres humanos.

Antecedentes de la invención

Ciertas células del sistema ¡nmunitario producen proteínas denominadas anticuerpos o ¡nmunoglobulinas ("Ig") en respuesta a la presencia de proteínas exógenas en el cuerpo, tales como proteínas bacterianas o virales. Los anticuerpos se unen y neutralizan las proteínas exógenas en el cuerpo.

Los anticuerpos se unen en general firmemente y de manera específica a sus antígenos proteicos objetivo, lo que los hace agentes terapéuticos potencialmente útiles para tratar una amplia diversidad de enfermedades caracterizadas por la expresión alterada de proteínas. Se han identificado muchos objetivos proteicos adecuados para la terapia de enfermedades mediada por anticuerpos mediante el uso de moléculas de anticuerpos no humanos. Para muchas aplicaciones terapéuticas, sin embargo, la eficacia y la seguridad de los anticuerpos no humanos está comprometida, debido a que las moléculas Ig no humanas son inmunógenas por sí mismas (es decir, capaces de inducir una respuesta inmunitaria). Así, antes de que se puedan aprobar los anticuerpos para el uso terapéutico, normalmente se deben modificar para reducir o eliminar su inmunogenicidad. El procedimiento Humaneering de anticuerpos produce anticuerpos modificados para reducir la inmunogenicidad a la vez que se conserva la capacidad de unirse de manera específica a su antígeno objetivo.

La presente solicitud describe la "humanización" de un anticuerpo monoclonal murino que se une al factor B y bloquea de manera selectiva la ruta alternativa del complemento. La ruta alternativa del complemento se activa normalmente por bacterias, parásitos, virus u hongos, aunque también se ha informado que los anticuerpos IgA y ciertas cadenas ligeras de Ig activan la ruta. La activación de la ruta alternativa se inicia cuando el factor B circulante se une a C3 activado (C3b o C3H2O). Este complejo se escinde después mediante el factor circulante D para producir un fragmento enzimátlcamente activo, C3bBb o C3(H20)Bb. Estas dos enzimas pueden escindir el C3 circulante y generar C3b, que controla la Inflamación y también amplifica adicionalmente el proceso de activación, por lo que se genera un bucle de retroactlvaclón. El factor B es necesario para posibilitar la activación de la ruta alternativa.

Los estudios recientes han demostrado que la ruta alternativa del complemento desempeña un papel importante en la patogénesis de varios modelos animales de enfermedad. La activación del complemento en el riñón tras la lesión por isquemia/reperfusión está mediada casi exclusivamente por la ruta alternativa, y la ruta alternativa desempeña un papel crucial en el desarrollo de la artritis. Quizás muy sorprendentemente, se ha demostrado que los ratones deficientes de la ruta alternativa están protegidos de nefritis en el modelo MRL/lpr de nefritis lúpica y de muerte fetal mediada por anti-fosfolípido, modelos de enfermedades que tradlcionalmente se habría supuesto que estuvieran mediadas por la ruta clásica del complemento.

El anticuerpo murino anti-factor B del cual derivaron las variantes humanizadas descritas en la presente memoria se produjo inyectando en ratones deficientes de factor B ("fB"7"") una proteína de fusión que comprende el segundo y tercer dominios de repeticiones consenso cortas ("SCR") del factor B fusionados con una ¡nmunoglobulina. Los ratones se cribaron después en busca de anticuerpos hacia el factor B. Las células de bazo de un ratón sometido a inyección que produjo anticuerpos anti-factor B se fusionaron con células de mleloma según los procedimientos habituales conocidos en la técnica. Una de las células de hlbrldoma resultantes, número 1379, produjo un anticuerpo IgGi ("mAb 1379") que inhibe completamente la activación de la ruta alternativa del complemento in vitro e in vivo. Los fragmentos Fab' de unión al antígeno del mAb 1379 también Inhiben completamente la activación de la ruta alternativa del complemento. La línea celular de hibridoma que produce mAb 1379 se ha depositado en la American Type Culture Collection ("ATCC") con el N° de depósito PTA-6230.

La cartografía de epítopos demostró que el mAb 1379 se une al factor B en el tercer dominio de SCR. Los experimentos posteriores demostraron que el mAb 1379 Inhibe la activación alternativa del complemento impidiendo la formación del complejo C3bBb. Finalmente, el mAB 1379 se une a un epítopo conservado en múltiples especies de mamíferos, tal como se demuestra por su capacidad de Inhibir la activación alternativa del complemento en el suero de varias especies diferentes, que Incluyen ratones, ratas, seres humanos, babuinos, monos rhesus, monos cinomolgos, cerdos, conejos, y caballos. La producción y caracterización del anticuerpo anti-factor B mAb 1379 se

describe con más detalle en la publicación de patente de EE.UU. N° US 2005/0260198 A1.

Compendio breve de la invención

En un aspecto, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-factor B humanizado o un fragmento de unión al antígeno del mismo según la reivindicación 1 que se une de manera selectiva al factor B en el tercer dominio de repeticiones consenso cortas ("SCR") e impide la formación del complejo C3bBb, en el que el anticuerpo humanizado o el fragmento de unión al antígeno del mismo tiene una constante de disociación en equilibrio ("Kd") entre 3,0 x 10'9 M y 7,0 x 10'9 M. En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-factor B humanizado o el fragmento de unión al antígeno del mismo tiene una Kd de alrededor de 3,7 x 10"9 M o menos, alrededor de 4,5 x 10'9 M o menos, alrededor de 5,4 » 10'9Mo menos, o alrededor de 6,5 * 10"9 M o menos.

En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-factor B humanizado o los fragmentos de unión al antígeno del mismo comprenden un polipéptido de la reglón VK seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID N°: 14 (anticuerpo de referencia TA10), SEQ ID N°: 16 (Fab1 de TA101-1), SEQ ID N°: 18 (Fab' de TA102-4), y SEQ ID N°: 20 (Fab' de TA103-2), y un polipéptido de la región Vh seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID N°: 15 (anticuerpo de referencia TA10), SEQ ID N°: 17 (Fab1 de TA101-1), SEQ ID N°: 19 (Fab' de TA102-4), y SEQ ID N°: 21 (Fab' de TA103-2). En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-factor B humanizado o un fragmento de unión al antígeno del mismo comprende un polipéptido de la reglón VK que comprende SEQ ID N°: 14 (anticuerpo de referencia TA10) y un polipéptido de la reglón Vh que comprende SEQ ID N°: 15 (anticuerpo de referencia TA10), y tiene una Kd de 6,55 x 10'9 M o menos. En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-factor B humanizado o un fragmento de unión al antígeno del mismo comprende un polipéptido de la región VK que comprende SEQ ID N°: 16 (Fab1 de TA101-1) y un polipéptido de la reglón Vh que comprende SEQ ID N°: 17 (Fab' de TA101-1), y tiene una Kd de 4,53 x 10'9 M o menos. En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-factor B humanizado o un fragmento de unión al antígeno del mismo comprende un polipéptido de la reglón VK que comprende SEQ ID N°: 18 (Fab1 de TA102-4) y un polipéptido de la región VH que comprende SEQ ID N°: 19 (Fab1 de TA102-4), y tiene una Kd de 5,40 x 10'9 M o menos. En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-factor B humanizado o un fragmento de unión al antígeno del mismo comprende un polipéptido de la reglón VK que comprende SEQ ID N°: 20 (Fab1 de TA103-2) y un polipéptido de la región VH que comprende SEQ ID N°: 21 (Fab1 de TA103-2), y tiene una Kd de 3,73 x 10"9 M o menos. En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-factor B humanizado o un fragmento de unión al antígeno del mismo comprende un fragmento de unión al antígeno seleccionado del grupo que consiste... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo anti-factor B humano modificado o un fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de manera selectiva al factor B en el tercer dominio de repeticiones consenso cortas ("SCR") e impide la formación del complejo C3bBb, en el que el anticuerpo humano modificado o el fragmento de unión al antígeno del mismo tiene una constante de disociación en equilibrio ("KD") de entre 3,0x10'8 9 M y 7,0x10'9 M, y en el que:

(a) el anticuerpo anti-factor B humano modificado o el fragmento de unión al antígeno del mismo comprende un polipéptido de la región VK seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID N°:14, SEQ 10 NO:16, SEQ ID N°:18, y SEQ ID N°:20, y un polipéptido de la reglón Vh seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID N°:15, SEQ ID N°:17, SEQ ID N°:35, SEQ ID N°:19, SEQ ID N°:36, SEQ ID N°:21 y SEQ ID N°:37; o

(b) el anticuerpo anti-factor B humano modificado o un fragmento de unión al antígeno del mismo comprende un polipéptido de la región VK que comprende la región CDR3-FR4 seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID N°:22, SEQ ID N°:24, SEQ ID N°:26 y SEQ ID N°:28, y un polipéptido de la región VH que comprende la región CDR3-FR4 seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID N°:23, SEQ ID N°:25, SEQ ID N°:27, y SEQ ID N°:29.

2. El anticuerpo anti-factor B humano modificado o un fragmento de unión al antígeno del mismo de la reivindicación 1, que comprende un polipéptido de la región VK de SEQ ID N°:14 y un polipéptido de la región Vh de SEQ ID N°:15, un polipéptido de la región VK de SEQ ID N°:16 y un polipéptido de la región Vh de SEQ ID N°:17, un polipéptido de la región VK de SEQ ID N°:18 y un polipéptido de la región Vh de SEQ ID N°:19, un polipéptido de la región VK de SEQ ID N°:20 y un polipéptido de la región Vh de SEQ ID N°:21, un polipéptido de la región VK de SEQ ID N°:16 y un polipéptido de la región Vh de SEQ ID N°:35, un polipéptido de la región VK de SEQ ID N°:18 y un polipéptido de la región Vh de SEQ ID N°:36, o un polipéptido de la región VK de SEQ ID N°:20 y un polipéptido de la región VH de SEQ ID N°:37.

3. El anticuerpo anti-factor B humano modificado o un fragmento de unión al antígeno del mismo de la reivindicación 1, que comprende un polipéptido de la región VK que comprende una región CDR3-FR4 de SEQ ID N°:22 y un polipéptido de la región Vh que comprende una región CDR3-FR4 de SEQ ID N°:23, un polipéptido de la región VK que comprende una reglón CDR3-FR4 de SEQ ID N°:24 y un polipéptido de la región VH que comprende una región CDR3-FR4 de SEQ ID N°:25, un polipéptido de la región VK que comprende una región CDR3-FR4 de SEQ ID N°:26 y un polipéptido de la región Vh que comprende una región CDR3-FR4 de SEQ ID N°:27, o un polipéptido de la reglón VK que comprende una región CDR3-FR4 de SEQ ID N°:28 y un polipéptido de la región VH que comprende una reglón CDR3-FR4 de SEQ ID N°:29.

4. El anticuerpo anti-factor B humano modificado o un fragmento de unión al antígeno del mismo de la reivindicación 1, en el que el fragmento de unión al antígeno se selecciona del grupo que consiste en Fab', (Fab')2, Fv, scFv, y dlacuerpos.

5. Un anticuerpo anti-factor B humano modificado o un fragmento de unión al antígeno del mismo según la reivindicación 1 para el uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno seleccionado de hipersensibilidad de las vías respiratorias ("AHR"), inflamación de las vías respiratorias y lesión por isquemia-reperfusión, en el que la activación de la ruta alternativa del complemento desempeña un papel en un individuo que tiene, o corre el riesgo de desarrollar, dicha enfermedad o trastorno.

6. El anticuerpo anti-factor B humano modificado o un fragmento de unión al antígeno del mismo para el uso según la reivindicación 5, en el que el anticuerpo anti-factor B humano modificado o el fragmento de unión al antígeno del mismo reduce la enfermedad o el trastorno en el Individuo en comparación con antes de la administración del anticuerpo o el fragmento de unión al antígeno del mismo.

7. El anticuerpo anti-factor B humano modificado o un fragmento de unión al antígeno del mismo para el uso según la reivindicación 6, en el que dicha AHR o inflamación de las vías respiratorias está asociada a una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica ("EPOC"), aspergilosis broncopulmonar alérgica, inflamación alérgica, neumonía por hipersensibilidad, neumonía eosinofílica, enfisema, bronquitis, bronquitis alérgica, bronquiectasia, fibrosis quística, tuberculosis, neumonitis por hipersensibilidad, asma ocupacional, sarcoidosis, síndrome de enfermedad reactiva de las vías respiratorias, enfermedad pulmonar intersticial, síndrome hipereosinofílico, rinitis, sinusitis, asma inducida por el ejercicio, asma inducida por la contaminación, asma de variante tusiva, parasitosis pulmonar, infección por virus sincitial respiratorio ("RSV"), infección por virus paragripal ("PIV"), infección porrinovirus ("RV"), e infección por adenovirus.

8. Un anticuerpo anti-factor B humano modificado o un fragmento de unión al antígeno del mismo según la reivindicación 1 para el uso en la inhibición selectiva de la activación de la ruta alternativa del complemento en un individuo que tiene, o corre el riesgo de desarrollar, una afección o enfermedad seleccionada de hipersensibilidad de las vías respiratorias ("AHR"), inflamación de las vías respiratorias y lesión por isquemia-reperfusión, en el que la

activación de la ruta alternativa del complemento contribuye a la afección o enfermedad, exacerba al menos un síntoma de la afección o enfermedad, o provoca la afección o enfermedad, en el que dicha hipersensibilidad de las vías respiratorias ("AHR") o inflamación de las vías respiratorias está asociada a una enfermedad seleccionada del

grupo que consiste en asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica ("EPOC"), aspergilosis broncopulmonar alérgica, inflamación alérgica, neumonía por hipersensibllidad, neumonía eosinofílica, enfisema, bronquitis, bronquitis alérgica, bronquiectasia, fibrosis quística, tuberculosis, neumonitis por hipersensibilidad, asma ocupacional, sarcoidosis, síndrome de enfermedad reactiva de las vías respiratorias, enfermedad pulmonar 5 intersticial, síndrome hipereosinofílico, rinitis, sinusitis, asma inducida por el ejercicio, asma inducida por la contaminación, asma de variante tusiva, parasitosis pulmonar, infección por virus sincitial respiratorio ("RSV"), infección por virus paragripal ("PIV"), infección por rinovirus ("RV"), e infección por adenovirus.

9. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz del anticuerpo anti-factor B humano modificado o un fragmento de unión al antfgeno del mismo de la reivindicación 1, y un vehículo farmacéuticamente 10 aceptable.