Vacuna para modular respuestas inmunitarias entre T1 y T2.

Liposoma para su utilización como vacuna para tratar el cáncer,

la tuberculosis, el paludismo o la hepatitis B, quecomprende un dilipopéptido inmunógeno en el que un lípido está unido cada uno de dos aminoácidos en eldilipopéptido.

Vacuna para modular respuestas inmunitarias entre T1 y T2.

Campo de la invención La presente invención proporciona vacunas liposómicas capaces de modular la respuesta inmunitaria in vivo, particularmente las respuestas inmunitarias humorales y celulares.

Antecedentes de la invención Para combatir eficazmente las enfermedades, lo ideal sería que una vacuna estimulase varias reacciones inmunológicas, tales como la producción de anticuerpos (inmunidad humoral) y la movilización de los inmunocitos (inmunidad celular) .

Una respuesta inmunitaria celular provoca una proliferación y la estimulación de linfocitos T, tales como los citotóxicos (LTC) y los linfocitos T con hipersensibilidad de tipo retardado (HTR) , que van a activar los macrófagos e impedir la propagación de agentes patógenos. La provocación de una respuesta humoral hace que los linfocitos B del cuerpo produzcan anticuerpos contra el patógeno causal. Sin embargo, algunos patógenos intracelulares y retrovirus sobreviven y son extremadamente resistentes a las respuestas inmunitarias humorales y requieren la estimulación de linfocitos T citotóxicas para destruir dichos invasores biológicos.

Los péptidos sintéticos se utilizan a menudo como epítopos antigénicos y pueden ser hechos a la medida utilizando tecnologías de síntesis de péptidos convencionales, de manera que provocan efectos secundarios mínimos. Sin embargo, dichos péptidos suelen invocar a una respuesta inmunógena relativamente débil .

No obstante, la inmunogenicidad puede reforzarse acoplando un lípido al péptido sintético. Se ha demostrado, por ejemplo, que la lipidación de antígenos peptídicos sintéticos conduce a la provocación de una fuerte proliferación de linfocitos T, LTC, y las respuestas de anticuerpos en ratones, chimpancés o seres humanos inmunizados (BenMohamed et al., Vaccine, 18, 2843 - 2855 (2000) ; Gaher y -Segard et al., J. Virology., 74, 1694-1703 (2000) ;

Seth et al., AIDS Res. Hum. Retroviruses, 16, 337-343 (2000) ; Tsunoda et al., Vaccine, 17, 675-685 (1999) ; BenMohamed et al., Eur. J. Immunol., 27, 1242-1253 (1997) ; Vitiello et al., J. Clin. Invest., 95, 341-349 (1995) ) .

Una preparación de dichos antígenos se puede administrar in vivo utilizando un "portador" de la vacuna, pero el propio portador puede convertirse en el objetivo de la respuesta inmunitaria humoral del anfitrión. Por lo tanto, los 35 anticuerpos del anfitrión actúan contra el portador de la vacuna y no del epítopo antigénico, lo que puede producir la rápida eliminación de la vacuna por los anticuerpos anti-portadores, negando la utilidad de la vacuna real.

La incorporación de la fracción lipídica de un lipopéptido en un liposoma, sin embargo, demuestra ser una manera sumamente útil en la que administrar un antígeno in vivo sin provocar una respuesta inmunitaria contra el

portador. Sin embargo, ninguno de estos avances ayudar en la modulación de una respuesta inmunitaria a otro: Es decir, no se ha demostrado previamente que un lipopéptido unido con liposomas puede provocar respuestas inmunitarias celulares y humorales alterando el número de lípidos unidos a un solo péptido.

La presente invención, sin embargo, proporciona una nueva manera de invocación y modulación entre las 45 respuestas inmunitarias celulares y humorales utilizando un solo péptido antigénico y un portador que no estimula respuestas humorales contra sí mismo.

Sumario de la invención 50 La invención se refiere a una formulación de liposomas que contienen lipopéptidos inmunógenos. La presente invención se refiere además a la administración de dichos liposomas en formulaciones que son capaces tanto de invocar como de modular una respuesta inmunitaria en un paciente.

En una forma de realización, la invención proporciona un liposoma para su utilización como vacuna para tratar el 55 cáncer, la tuberculosis, el paludismo o la hepatitis B, que comprende un dilipopéptido inmunógeno en el que un lípido está unido a uno de cada dos aminoácidos en el dilipopéptido.

En otra forma de realización, la invención proporciona una composición liposómica para su utilización como vacuna para tratar el cáncer, la tuberculosis, el paludismo o la hepatitis B, que comprende por lo menos un liposoma de la 60 invención, en la que el liposoma comprende además un monolipopéptido.

En la presente memoria se describe un procedimiento para producir liposomas inmunógenos formados por lípidos autoensambladores, incluyendo derivados lipídicos de péptidos inmunógenos. La formulación liposómica puede contener y administrar ya sea monolipopéptidos, dilipopéptidos o mezclas de cada uno para invocar y, de este modo, 65 modular respuestas inmunitarias celulares, humorales, o celulares y humorales, respectivamente. El péptido es una secuencia inmunógena de aminoácidos, que representa un epítopo o una propiedad similar que es de naturaleza antigénica.

En una forma de realización la invención proporciona una composición que puede estimular y modular una respuesta inmunitaria. Dicha composición comprende una vesícula liposómica, en el que la bicapa lipídica de la vesícula liposómica comprende al menos un monolipopéptido inmunógeno y por lo menos un dilipopéptido, en el que el porcentaje del monolipopéptido oscila entre más de aproximadamente 0 y menos de aproximadamente 100% y en el que el porcentaje del dilipopéptido oscila entre más de aproximadamente 0 y menos de aproximadamente 100%.

También se describe en la presente memoria un procedimiento de estimulación de una respuesta inmunitaria celular que comprende administrar a un paciente una cantidad eficaz de por lo menos un monolipopéptido y por lo menos un dilipopéptido, en el que el monolipopéptido y el dilipopéptido están asociados a la misma o diferente vesícula liposómica. En un caso, el porcentaje del monolipopéptido administrado es más de aproximadamente 50%. El porcentaje del monolipopéptido también puede ser más de aproximadamente 70% o más de aproximadamente 90%.

También se describe un procedimiento para estimular una respuesta inmunitaria humoral que comprende administrar a un paciente una cantidad eficaz de por lo menos un monolipopéptido y por lo menos un dilipopéptido, en el que el monolipopéptido y el dilipopéptido están asociados a la misma o diferente vesícula liposómica. En un caso, el porcentaje del monolipopéptido administrado es más de aproximadamente 50%. El porcentaje del monolipopéptido también puede ser más de aproximadamente 70% o más de aproximadamente 90%.

La presente invención también abarca composiciones en las que la fracción peptídica del monolipopéptido o del dilipopéptido procede de una proteína asociada a una enfermedad seleccionada del grupo formado por la tuberculosis, la hepatitis B, el paludismo y el cáncer. En una forma de realización preferida, el péptido comprende al menos 5 aminoácidos contiguos de una región inmunógena de la proteína. En una forma de realización más preferida, el monolipopéptido o el dilipopéptido está diseñado a partir de una secuencia de proteína MUC I. En una forma de realización aún más preferida, el lipopéptido MUC I comprende la secuencia GVTSAPDTRPAPGSTA. En otra forma de realización preferida, el monolipopéptido o el dilipopéptido está diseñado a partir de un lipopéptido de la tuberculosis comprende la secuencia DQVHFQPLPPAVVKLSDALIK. En otra forma de realización preferida, un péptido antigénico MUC I de la presente invención se puede seleccionar de cualquier parte de la secuencia SGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVSSL (SEC. ID. nº 1) .

En otra forma de realización, el monolipopéptido o el dilipopéptido está diseñado a partir de un péptido de la tuberculosis. En una forma de realización más preferida, el péptido de la tuberculosis tiene la secuencia, DQVHFQPLPPAVVKLSDALIK (SEC. ID. nº 2) .

Aún en otra realización, la presente invención utiliza un péptido antigénico lipidado de la hepatitis B. En una realización preferida, el péptido de la hepatitis B tiene la secuencia, IRTPPAYRPPNAPILK (SEC. ID. nº 3) . En otra forma de realización preferida, un péptido del paludismo puede ser modificado para que contenga lípidos. En una forma de realización preferida, el péptido tiene la secuencia, VTHESYQELVKKLEALEDAVK (SEC ID N º. 4) .

Por lo tanto, un aspecto de la presente invención proporciona una composición liposómica que comprende por lo menos un liposoma que comprende por lo menos un monolipopéptido y por lo menos un dilipopéptido.

En una forma de realización preferida, el monolipopéptido y el dilipopéptido se seleccionan del grupo formado por los péptidos MUC... [Seguir leyendo]

1. Liposoma para su utilización como vacuna para tratar el cáncer, la tuberculosis, el paludismo o la hepatitis B, que comprende un dilipopéptido inmunógeno en el que un lípido está unido cada uno de dos aminoácidos en el dilipopéptido.

2. Liposoma para su utilización según la reivindicación 1, en el que una fracción peptídica de dicho dilipopéptido procede de una proteína de cáncer, tuberculosis, paludismo o hepatitis B.

3. Liposoma para su utilización según la reivindicación 2, en el que la fracción peptídica de dicho dilipopéptido se deriva de una proteína de cáncer.

4. Liposoma para su utilización según la reivindicación 2 ó 3, en el que la fracción peptídica comprende por lo menos 5 aminoácidos contiguos que comprende un epítopo de una fracción inmunógena de la proteína.

5. Liposoma para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que la fracción peptídica de dicho dilipopéptido comprende una secuencia, en su totalidad o en parte, seleccionada de entre las SEC. ID. nº 1 a

4.

6. Liposoma para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que consiste esencialmente en un dilipopéptido.

7. Liposoma para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6, en el que la fracción peptídica de dicho dilipopéptido procede de MUC-1.

8. Liposoma para su utilización según la reivindicación 7, en el que la fracción peptídica de dicho dilipopéptido comprende en su totalidad o en parte la secuencia SEC. ID. nº 1.

9. Liposoma para su utilización según la reivindicación 7, en el que la fracción peptídica de dicho dilipopéptido comprende la secuencia SGVTSAPDTRPAPGSTA o STAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPP.

10. Liposoma para su utilización según la reivindicación 7, en el que los lípidos están colocados en el terminal N o el terminal C del péptido MUC I.

11. Liposoma para su utilización según la reivindicación 7, en el que el dilipopéptido es GVTSAPDTRPAPGSTAS (miristil) S (miristil) L

12. Liposoma para su utilización según la reivindicación 7, en el que el dilipopéptido es TAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPK (palmitoíl) K (palmitoíl) L.

13. Liposoma para su utilización según la reivindicación 7, en el que el dilipopéptido es TSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVS (lipo) S (lipo) L.

14. Liposoma para su utilización según la reivindicación 7, en el que el dilipopéptido es TSAPDTRPAPGSS (lipo) S (lipo) STSAPDTRPAPGS.

15. Liposoma para su utilización según la reivindicación 7, en el que el dilipopéptido es S (lipo) GVTSAPDTRPAPGSAS (lipo) L.

16. Liposoma para su utilización según la reivindicación 7, en el que el dilipopéptido es GVISAPDTRPAPGSTAS (lipo) SSSS (lipo) L.

17. Liposoma para su utilización según la reivindicación 7, en el que el dilipopéptido es TAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPK (palmitoíl) K (palmitoíl) G.

18. Liposoma para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones 2 ó 4 a 6, en el que la fracción peptídica de dicho dilipopéptido se deriva de una proteína de la tuberculosis.

19. Liposoma para su utilización según la reivindicación 18, en el que la fracción peptídica de dicho dilipopéptido comprende la secuencia DQVHFQPLPPAVVKLSDALIK.

20. Liposoma para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones 2 ó 4 a 6, en el que la fracción peptídica de dicho dilipopéptido se deriva de una proteína de la hepatitis B.

21. Liposoma para su utilización según la reivindicación 20, en el que la fracción peptídica de dicho dilipopéptido comprende la secuencia IRTPPAYRPPNAPILK.

22. Liposoma para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones 2 ó 4 a 6, en el que la fracción peptídica de dicho dilipopéptido se deriva de una proteína del paludismo.

23. Liposoma para su utilización según la reivindicación 22, en el que la fracción peptídica de dicho dilipopéptido comprende la secuencia VTHESYQELVKKLEALEDAVK.

24. Liposoma para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que cada aminoácido lipidado es una treonina, serina, lisina, arginina o cisteína. 10

25. Liposoma para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que cada aminoácido lipidado se lipida independientemente con un resto de miristilo, palmitoílo o laurilo.

26. Liposoma para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que los lípidos están 15 colocados en tres aminoácidos del terminal C del dilipopéptido.

27. Liposoma para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para su utilización en el tratamiento del paciente estimulando una respuesta inmunitaria humoral a dicho dilipopéptido en el paciente.

28. Liposoma para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, destinado a ser utilizado en el tratamiento del paciente estimulando una respuesta inmunitaria celular a dicho dilipopéptido en el paciente.

29. Composición liposómica para su utilización como vacuna para el tratamiento del cáncer, la tuberculosis, el

paludismo o la hepatitis B, que comprende por lo menos un liposoma como se ha definido en cualquiera de las 25 reivindicaciones anteriores, en la que el liposoma comprende además un monolipopéptido.

30. Composición liposómica para su utilización según la reivindicación 29, en la que el porcentaje de dicho dilipopéptido oscila entre más de 0 y menos de 100%, sobre la base de los lipopéptidos totales incorporados en dicho liposoma.

31. Composición liposómica para su utilización según la reivindicación 29, en la que el porcentaje de dicho dilipopéptido incorporado en dicho liposoma es del 50%.

32. Composición liposómica para su utilización según la reivindicación 29, en la que el porcentaje de dicho 35 dilipopéptido está comprendido entre el 50% y el 99%.

33. Composición liposómica para su utilización según la reivindicación 29, en la que el monolipopéptido es STAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPP-Lys (palmitoíl) G.

34. Composición liposómica para su utilización según la reivindicación 29, en la que el monolipopéptido es GVTSAPDTRPAPGSTAS (miristil) L.

35. Composición liposómica para su utilización según la reivindicación 29, en la que el monolipopéptido es TSAPDTRPAPGSS (lipo) STSAPDTRPAPGS. 45

36. Composición liposómica para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones 29 a 35, en la que el monolipopéptido y el dilipopéptido comprenden diferentes epítopos peptídicos.

37. Composición liposómica para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones 29 a 35, en la que el 50 monolipopéptido y el dilipopéptido comprenden el mismo epítopo peptídico.

38. Composición liposómica para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones 29 a 37, que comprende además un adyuvante.

39. Vacuna liposómica para su utilización en la estimulación de una respuesta inmunitaria en un paciente, que comprende un dilipopéptido inmunógeno, comprendiendo dicho dilipopéptido por lo menos un epítopo peptídico, en el que un lípido está unido a uno de cada dos aminoácidos en el dilipopéptido.