Vacuna contra el virus herpes equino.

Vacuna para la protección de un caballo frente a enfermedades asociadas a VHE-1,

VHE-4 ó unacombinación de los mismos, que comprende:

virus VHE-1 KyA químicamente inactivado, y

un adyuvante.

Vacuna contra el virus herpes equino Antecedentes Las enfermedades respiratorias son una causa importante de pérdidas económicas para la industria equina. El virus herpes equino (VHE) , los virus influenza equinos (VIE) y la bacteria Streptococcus equi son patógenos que con mayor frecuencia se asocian a enfermedades respiratorias infecciosas en caballos. En todo el mundo, los virus herpes equinos son patógenos importantes asociados a morbilidad en caballos como resultado de la infección respiratoria. Tanto el virus herpes equino de tipo 1 (VHE-1) y de tipo 4 (VHE-4) pueden causar una enfermedad respiratoria. El VHE-1 también se asocia a abortos y a enfermedad neurológica. Debido al elevado grado de movilidad y a la naturaleza internacional de la industria equina, se necesitan vacunas eficaces para reducir la enfermedad y controlar la expansión de estos patógenos.

Se encuentran disponibles comercialmente varias vacunas del VHE. Sin embargo, ninguna es capaz generalmente de proporcionar una protección duradera y la mayoría requiere inmunizaciones de refuerzo frecuentes para alcanzar un nivel significativo de protección frente a la infección por VHE. La vía de administración más habitualmente recomendada es la inyección por vía intramuscular, a pesar de que el sistema respiratorio es un sitio primario de infección en muchos casos. Además, se ha informado de que algunas de las vacunas comerciales provoca efectos secundarios no deseables. Se ha informado de varios intentos para desarrollar una vacuna recombinante para el VHE. Sin embargo, este enfoque todavía no ha resultado en la introducción de una vacuna recombinante comercial que haya conseguido una aceptación generalizada.

Las publicaciones de la literatura han documentado consistentemente un grado elevado de variabilidad en la capacidad de las vacunas basadas en cepas de VHE-1 de proporcionar protección cruzada frente a la infección por cepas de VEH-4. Aunque las vacunas basadas en cepas de VHE-4 han demostrado una mayor tendencia a proporcionar cierta protección frente a ambas cepas, VHE-1 y VHE-4, la protección cruzada basada en las cepas de VHE-4 también se ha informado de que muestra variabilidad.

La patente EP nº 0978286 da a conocer una vacuna que resulta adecuada para proteger los caballos frente al reto con VHE-1 y VHE-4, que comprende la cepa de VHE-1 AB69 no atenuada e inactivada químicamente y un adyuvante. Se ha demostrado que VHE-1 KyA muerto por calor protege a los caballos inmunizados frente al reto con VHE-1 virulento (Zhang et al., Virology 268:482-492, 2000) .

Por consiguiente, todavía existe una necesidad de desarrollar vacunas adicionales que sean capaces de proteger a los caballos frente a enfermedades asociadas a VHE-1 y/o VHE-4. También resultaría ventajoso desarrollar una vacuna que resultase efectiva frente a VHE-1 y/o VHE-4 que pudiese administrarse por vía intranasal además de mediante métodos por vía parenteral (por ejemplo por vía intramuscular, subcutánea o intravenosa) .

Descripción resumida La presente invención se refiere a composiciones inmunogénicas según se definen en las reivindicaciones, que incluyen una forma inactivada de VHE-1. En particular, la solicitud proporciona una vacuna para proteger los caballos frente a enfermedades asociadas a VHE-1 y/o VHE-4. La vacuna incluye VHE-1 inactivado (por ejemplo virus VHE-1 KyA inactivado químicamente) y también incluye un adyuvante. La vacuna también puede incluir otros componentes, tales como uno o más conservantes, uno o más estabilizadores y antígenos contra otros patógenos equinos. Típicamente, los antígenos contra otros patógenos equinos también se encuentran presentes en una forma inactivada, tal como formas inactivadas de VHE-4 y cepas inactivadas de virus influenza equino ("VIE") . Por ejemplo, la vacuna puede ser una vacuna de combinación que incluya formas inactivadas de cepa A1 y/o A2 del virus influenza equino además de VHE-1 inactivado. Entre los ejemplos de antígenos adecuados contra VIE se incluyen el virus VIE A1 inactivado cepa A/EQ1/Newmarket/77, el virus VIE A2 inactivado cepa Newmarket/2/93 y el virus VIE A2 inactivado cepa Kentucky/95.

Las expresiones "vacuna" y "composición inmunogénica" se definen en la presente memoria en un sentido amplio para referirse a cualquier tipo de agente biológico en una forma administrable capaz de inducir una respuesta inmunológica en un animal en el que se ha inoculado la vacuna. Para los fines de la presente invención, la vacuna (composición inmunogénica) incluye el agente vírico en una forma inactivada. Las vacunas en general pueden estar basadas en el virus mismo o en un componente inmunogénico (antigénico) del virus. En la presente memoria, el término "protección" utilizado en referencia a una vacuna se refiere a la mejora (parcial o completa) de cualquiera de los síntomas asociados a la enfermedad o condición en cuestión. De esta manera, la protección de los caballos frente al VHE por las presentes vacunas generalmente resulta en una reducción de la propagación del virus y/o de

uno o más de los síntomas clínicos asociados a la infección por VHE-1 y/o VHE-4 (por ejemplo pirexia, descarga nasal, conjuntivitis, tos, disnea, depresión y necesidad de tratamiento antibiótico para una infección bacteriana secundaria) .

Las presentes composiciones inmunogénicas tal como se dan a conocer incluyen una forma químicamente inactivada de VHE-1. Las vacunas que incluyen virus VHE-1 Kya químicamente inactivado resultan particularmente deseables. Puede utilizarse una diversidad de agentes químicos inactivadores que son conocidos por el experto en la materia para inactivar el virus. La etilenimina y derivados relacionados, tales como la etilenimina binaria ("EIB") y la acetiletilenimina, son ejemplos de agentes químicos inactivadores adecuados para la utilización para inactivar el virus VHE-1. También pueden utilizarse otros agentes químicos inactivadores, por ejemplo la -propiolactona o los aldehídos (tales como el formaldehído y el glutaraldehído) para inactivar el virus.

Las presentes vacunas tal como se dan a conocer de manera general incluyen un adyuvante que deseablemente puede presentar propiedades bioadhesivas, particularmente en el caso de que se haya diseñado que el virus pueda administrarse por vía intranasal. Entre los ejemplos de adyuvantes adecuados se incluyen los polímeros reticulados olefínicamente insaturados de ácido carboxílico, tales como los polímeros de ácido acrílico reticulado. Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión "polímero de ácido acrílico reticulado" se refiere a polímero y copolímeros formados a partir de una mezcla de monómeros que incluye ácido acrílico como monómero predominante en la mezcla. Entre los ejemplos de polímeros de ácido acrílico reticulado adecuados se incluyen los disponibles comercialmente bajo los nombres comerciales Carbopol® 934P y Carbopol® 971 (disponibles de B.F. Goodrich Co., Cleveland, Ohio) . Un adyuvante particularmente adecuado para la utilización en las presentes vacunas es un polímero de ácido acrílico reticulado que presenta una viscosidad de Brookfield no superior a aproximadamente 20.000 cPs (medida a 20 rpm en forma de una solución acuosa al 1, 0% en peso a pH 7, 5) . En el caso de que se desee un adyuvante bioadhesivo, puede resultar ventajoso utilizar un adyuvante que presente una propiedad bioadhesiva de por lo menos aproximadamente 50 dinas/cm2, medida entre dos trozos de tejido estomacal de conejo recién extraídos (determinada mediante el procedimiento descrito en la patente US nº 4.615.697) .

Entre los métodos para proteger caballos frente a enfermedades asociadas a VHE-1 y/o VHE-4 tal como se da a conocer se incluyen la administración de una vacuna que contiene VHE-1 inactivado en los caballos. La vacuna puede administrarse utilizando una diversidad de métodos, incluyendo la administración intranasal y/o parenteral (por ejemplo intramuscular) . La vacuna que contiene VHE-1 inactivado puede administrarse en primer lugar por vía intramuscular una o más veces (por ejemplo a intervalos de 2 a 4 semanas) , seguido de la administración de la vacuna por lo menos una vez intranasalmente (por ejemplo 2 a 4 semanas después de la última administración parenteral de vacuna) . Se recomienda que la vacuna se administre en caballos de 6 ó más meses de edad. Idealmente todos los caballos en la manada son vacunados cada año para protegerlos frente a la extensión de los síntomas respiratorios de la enfermedad.

Se describe además un método para producir una vacuna contra el virus herpes equino. El método típicamente incluye inocular células de simio con virus VHE-1, por ejemplo con virus VHE-1 KyA. Las células de simio inoculadas se incuban,... [Seguir leyendo]

1. Vacuna para la protección de un caballo frente a enfermedades asociadas a VHE-1, VHE-4 ó una combinación de los mismos, que comprende:

virus VHE-1 KyA químicamente inactivado, y un adyuvante.

2. Vacuna según la reivindicación 1, en la que el virus VHE-1 KyA se ha inactivado químicamente mediante tratamiento con un agente inactivador químico que incluye un compuesto seleccionado de entre el grupo que consiste de etilenimina o derivados de etilenimina tales como etilenimina binaria o acetietilenimina.

3. Vacuna según la reivindicación 2, en la que el virus VHE-1 KyA ha sido inactivado químicamente mediante tratamiento con etilenimina binaria.

4. Vacuna según la reivindicación 1, que comprende además VHE-4 inactivado.

5. Vacuna según la reivindicación 1, que comprende además virus influenza equino inactivado.

6. Vacuna según la reivindicación 5, en la que el virus influenza equino inactivado incluye virus VIE subtipo A1 inactivado.

7. Vacuna según la reivindicación 6, en la que el virus VIE inactivado subtipo A1 incluye virus VIE A1 inactivado cepa A/EQ1/Newmarket/77.

8. Vacuna según la reivindicación 5, en la que el virus influenza equino inactivado incluye virus VIE subtipo A2 inactivado.

9. Vacuna según la reivindicación 8, en la que el virus VIE subtipo A2 inactivado incluye el virus VIE A2 de la 30 cepa Newmarket/2/93, el virus VIE A2 inactivado de cepa Kentucky/95 ó una mezcla de los mismos.

10. Vacuna según la reivindicación 5, que comprende el virus VIE subtipo A1 inactivado y el virus VIE subtipo A2 inactivo equino inactivado.

11. Vacuna según la reivindicación 10, que comprende virus VIE A1 inactivado de cepa A/EQ1/Newmarket/77, virus VIE A2 inactivado de la cepa Newmarket/2/93 y virus VIE A2 inactivado de la cepa Kentucky/95.

12. Vacuna según la reivindicación 1, en la que dicha vacuna es capaz de proteger los caballos frente a VHE-1 y VHE-4.

13. Vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para la utilización en la inmunización de caballos frente al virus herpes equino.

14. Vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 11 para la utilización en la inmunización de caballos 45 frente al virus herpes equino y el virus influenza equino.

15. Método para producir una vacuna de virus herpes equino según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, que comprende:

(a) inocular células de simio con un VHE-1 KyA,

(b) incubar las células de simio inoculadas,

(c) recolectar el VHE-1 KyA de las células incubadas, y

(d) tratar el VHE-1 KyA recolectado con un agente inactivador químico que incluye etilenimina, formando VHE-1 KyA

inactivado, y 55 (e) añadir un adyuvante.

16. Método según la reivindicación 15, en el que las células de simio son células Vero A139 ó células EVero.