Utilización de péptidos tipo LPA para el tratamiento de enfermedades inflamatorias intestinales y diabetes tipo 1.

La presente invención se relaciona con el campo de la medicina,

particularmente con el uso de un péptido tipo APL, derivado de laproteína de estrés térmico de 60 kDa humana, o sus análogos parala fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento de la enfermedad de Crohn, la colitis ulcerosa y la diabetes mellitus tipo I. Dicho péptido se biodistribuye al tracto gastrointestinal y promueve la inducción de apoptosis de células T activadas de la lámina propia intestinal y de la sangre periférica de pacientes con la enfermedad de Crohn. Además, este péptido induce apoptosis en células mononucleares de pacientes con diabetes mellitus tipo I.

Utilización de péptidos tipo LPA para el tratamiento de enfermedades inflamatorias intestinales y diabetes tipo 1

Campo de la invención La presente invención se refiere al campo de la medicina, particularmente con el uso de un péptido LPA (Ligando Peptídico Alterado, abreviado como LPA) o sus análogos para el tratamiento de enfermedades inflamatorias intestinales (como la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa) y la diabetes mellitus tipo 1.

Técnica anterior

Las enfermedades inflamatorias intestinales, como la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa, son el resultado de la activación de los linfocitos T de la lámina propia intestinal con potentes funciones efectoras contra la flora comensal. Sin embargo, el mecanismo exacto que conduce a la activación crónica de estos linfocitos permanece incierto (Balfour R (2006) Mechanism of Disease: Pathogenesis of Crohn’s disease and ulcerative colitis. Nature clinical practice. Gastroenterology and Hepatology 3 (7) : 390-407) .

En el tracto gastrointestinal residen aproximadamente 2x104 bacterias, y esta presión inmunológica representa un desafío extraordinario para el sistema inmunitario, que tiene que conseguir actuar equilibradamente entre la respuesta apropiada contra los organismos patógenos y la tolerancia con los organismos inofensivos. El sistema inmunitario de la mucosa tiene varios mecanismos para evitar una respuesta inflamatoria innecesaria y descontrolada, tales como la disminución de los linfocitos T activados por medio de la apoptosis (Peppelenbosch MP y van Deventer SJH (2004) T cell apoptosis and inflammator y bowel disease. Gut 53: 1556-1558) .

Bajo condiciones normales, el sistema inmunitario acaba rápidamente con las infecciones por bacterias entéricas invasivas, regula negativamente las respuestas inmunitarias innatas y cura la mucosa dañada sin estimular las respuestas efectoras de los linfocitos T. Por el contrario, el sistema inmunitario de huéspedes genéticamente susceptibles es incapaz de alcanzar una repuesta innata apropiada y/o generar una respuesta inmunitaria tolerogénica con los agentes microbianos comensales y evoluciona hacia la inflamación intestinal crónica (Podolsky DK (2002) Inflammator y bowel disease. N Engl J Med 347: 417-29) .

Por tanto, las enfermedades inflamatorias intestinales se producen como resultado del fracaso de los mecanismos que controlan apropiadamente los procesos inflamatorios iniciados por un desencadenante ambiental, tal como una infección intestinal aguda. La resistencia de los linfocitos T a la apoptosis, la falta de respuesta a las señales reguladoras negativas y la exposición continua a antígenos y adyuvantes luminales ayudan al sostenimiento de esta respuesta inflamatoria (Mudter J y Neurath MF (2007) Apoptosis of T cells and the control of inflammator y bowel disease: therapeutic implications. Gut 56: 293-303) .

La enfermedad de Crohn se caracteriza por un aumento del reclutamiento de macrófagos, neutrófilos y linfocitos T en el intestino, lo que conduce a un aumento en la expresión de moléculas coestimuladoras y de adhesión, así como de citoquinas proinflamatorias relacionadas con TH1 (Linfocito T auxiliar, abreviado como TH1) , por ejemplo: interleucina (IL) -6 (IL-6) y factor alfa de necrosis tumoral (TNF-!) y respuestas celulares de TH17 (linfocito T auxiliar 17, abreviado como TH17) como: IL-12, IL-23 e IL-27 (Balfour R (2006) Mechanism of Disease: pathogenesis of Crohn’s disease and ulcerative colitis. Nature clinical practice. Gastroenterology and Hepatology 3 (7) : 390-407) .

El número de células inflamatorias en el intestino está determinado por el reclutamiento celular, la proliferación y la muerte por necrosis o apoptosis. Los linfocitos T de la lámina propia de la mucosa intestinal normal son susceptibles a la muerte celular inducida por la activación (por medio de un sistema Fas/FasL) , que es capaz de controlar la proliferación de linfocitos (Bu P y col. (2001) Apoptosis: one of the mechanisms that maintains unresponsiveness of the intestinal mucosal immune system. J Immunol 166: 6399-6403) . Sin embargo, los datos indican que los linfocitos T de la lámina propia en los pacientes con enfermedad de Crohn son resistentes a la apoptosis lo que podría conducir a una expansión de la población de células TH1 efectoras activadas que podría contribuir a la perpetuación de la enfermedad y la inflamación crónica (Boirivant M y col. (1999) Lamina propria T cells in Crohn’s disease and other gastrointestinal inflammation show defective CD2 pathroute-induced apoptosis. Gastroenterology 116: 557565) .

La deficiencia en la apoptosis en los linfocitos T de la mucosa de los pacientes con enfermedad de Crohn se ha atribuido a un desequilibrio entre las proporciones de moléculas anti-apoptóticas como Bcl-2 y las moléculas proapoptóticas como Bax, lo que prolonga la supervivencia de estas células y da lugar a resistencia a las señales apoptóticas (Ina K y col. (1999) Resistence of Crohn’s disease T cells of multiple apoptotic signals is associated with Bcl2/Bax mucosal imbalance. J Immunol 163:1081-90; Itoh J y col. (2001) Decreased Bax expression by mucosal T cells favours resistance to apoptosis in Crohn’s disease. Gut 49: 35-41) . Por otro lado, Sturm y colaboradores estudiaron las propiedades del ciclo celular de los linfocitos T de la mucosa en pacientes con enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y controles sanos. Estos autores demostraron que los linfocitos T de la mucosa en los pacientes con enfermedad de Crohn tienen una capacidad impresionante para la expansión celular debido a un ciclo más rápido en comparación con las células de la mucosa de pacientes con colitis ulcerosa o las de los controles sanos, probablemente como resultado de una deficiencia de la apoptosis dependiente de la activación. Esto podría explicar por qué la mucosa de los pacientes con enfermedad de Crohn contiene un exceso de linfocitos T que indica un estado de hiperreactividad y también la pérdida de tolerancia a las bacterias comensales (Sturm A y col. (2004) Divergent cell cycle kinetics underlies the distinct functional capacity of mucosal T cells in Crohn’s disease and ulcerative colitis. Gut 53:1624-1631) .

Estas pruebas experimentales sostienen el hecho de que la enfermedad de Crohn es un trastorno en el que los sucesos de proliferación celular sobrepasan la muerte por apoptosis conduciendo a la acumulación de linfocitos T reactivos en el sitio de la inflamación, lo que podría ser un factor importante en la patogénesis de la enfermedad. En este sentido, los productos biológicos más potentes que se han utilizado en el tratamiento de esta enfermedad parecen ser aquellos que inducen la apoptosis en monocitos y en linfocitos T, por ejemplo: los anticuerpos contra el

TNF-!, IL-12 o receptor de IL-6 (Lügering y col. (2001) Infliximab induces apoptosis in monocytes from patients with chronic Crohn’s disease by using it activates to caspase dependent pathroute. Gastroenterology 121: 1145-57) , (Stallmach y col. (2004) An interleukin 12 p40-IgG2b coalition protein abrogates T cell mediated inflammation: antiinflammator y activity in Crohn’s disease and experimental colitis in alive. Gut 53: 339-45) , (Atreya R y col. (2000) Blockade of interleukin 6 trans-signaling suppresses T-cell resistance against apoptosis in chronic intestinal

inflammation: evidence in Crohn’s disease and experimental colitis in alive. Nat Med 6: 583-588) . En particular, los anticuerpos contra TNF-! son una opción importante para inducir la remisión a largo plazo en pacientes con enfermedad de Crohn refractarios a los esteroides.

El Infliximab es un anticuerpo monoclonal quimérico (AcM) que contiene la región variable murina y la región constante de una molécula de inmunoglobulina G1 (IgG1) humana que se une y neutraliza los efectos de TNF-!

tanto libre como unido, con una afinidad y especificidad enormes (Knight DMK y col. (1993) Construction and initial characterization of a mousehuman chimeric anti-TNF antibody. Mol Immunol 30: 1443-1453) .

El Etanercept es una proteína recombinante que contiene dos cadenas monoméricas de la porción soluble del receptor 2 del factor de necrosis tumoral humano (TNFR2) , fusionadas con la porción Fc de una IgG1 humana (Mohler KM y col. (1993) Soluble tumor necrosis factor (TNF) receptors are effective therapeutic agents in lethal 25 endotoxemia and function simultaneously as both TNF carriers and TNF antagonists. J Immunol 151: 1548-1561) . Esta molécula se ha utilizado satisfactoriamente en el tratamiento de otras enfermedades inflamatorias como la artritis reumatoide (AR) (Moreland LW y col. (1999) Etanercept therapy in rheumatoid arthritis. To randomized,... [Seguir leyendo]

1. Un péptido LPA derivado de la hsp60 humana, e identificado como Sec ID Nº 1, o sus análogos para su uso en el tratamiento de enfermedad inflamatoria intestinal y/o Diabetes tipo 1, en el que dichos análogos tienen una actividad de inducción de apoptosis de linfocitos T patógenos, en el que dichos análogos comprenden menos de 9

modificaciones de la SEC ID Nº 1, y en el que dicha modificación es una sustitución, deleción o inserción de un único aminoácido.

2. El péptido LPA para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la enfermedad inflamatoria intestinal se selecciona de entre el grupo que comprende la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa.

3. Un péptido LPA, derivado de la hsp60 humana e identificado como Sec ID Nº 1, o sus análogos para su uso en la

inducción de apoptosis de clones patógenos de linfocitos T en pacientes con enfermedad inflamatoria intestinal y Diabetes tipo 1, en el que dichos análogos comprenden menos de 9 modificaciones de la SEC ID Nº 1, y en el que dicha modificación es una sustitución, deleción o inserción de un único aminoácido.

4. El péptido LPA para uso de acuerdo con la reivindicación 3, en el que la enfermedad inflamatoria intestinal se selecciona de entre el grupo que comprende la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa.

5. Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de enfermedad inflamatoria intestinal y Diabetes tipo 1 que comprende un péptido LPA derivado de la hsp60 humana, e identificado como Sec ID Nº 1, o sus análogos, en la que la composición farmacéutica además comprende un vehículo o un excipiente farmacéuticamente aceptable, en la que dichos análogos tienen una actividad de inducción de apoptosis de los linfocitos T patógenos y en la que dichos análogos comprenden menos de 9 modificaciones de la SEC ID Nº 1, y en la que dicha modificación es una sustitución, deleción o inserción de un único aminoácido.

6. La composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la reivindicación 5, en la que la composición farmacéutica se administra por vía parenteral o mucosa.

7. La composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la reivindicación 5, en la que la composición

farmacéutica se administra por una vía parenteral seleccionada de entre el grupo que comprende la vía intradérmica, 25 la vía subcutánea, la vía intramuscular y la vía intravenosa.

8. La composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la reivindicación 5, en la que la composición farmacéutica se administra por una vía mucosa seleccionada de entre el grupo que comprende la vía rectal y la vía oral.

9. La composición farmacéutica para su uso de la reivindicación 5, en la que la enfermedad inflamatoria intestinal se 30 selecciona de entre el grupo que comprende la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa.