Uso terapéutico de un antagonista de DII4 y un inhibidor de VEGF para inhibir el crecimiento tumoral.

Un antagonista de ligando de tipo delta 4 (Dll4) y un inhibidor del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) para su uso en un método para tratar el desarrollo o crecimiento tumoral,

siendo dicho antagonista de Dll4 un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une específicamente con Dll4 y bloquea la unión de Dll4 con un receptor Notch, o una proteína de fusión que comprende un dominio extracelular de Dll4 y un dominio Fc humano de SEC ID Nº: 20.

Uso terapéutico de un antagonista de DII4 y un inhibidor de VEGF para inhibir el crecimiento tumoral

Antecedentes de la invención

Campo de la invención La presente invención se refiere a la inhibición del crecimiento tumoral con antagonistas del ligando de tipo delta 4 (Dll4) e inhibidores de VEGF. Los antagonistas de Dll4 pueden ser particularmente útiles para tratar el crecimiento tumoral en tumores que no son sensibles a otros agentes antitumorales.

Descripción de la técnica relacionada La ruta de señalización de Notch es un sistema para comunicación entre células usado por una amplia serie de eucariotas para muchos procesos biológicos, tales como diferenciación, proliferación y homeostasis. El tipo delta 4 (Dll4) o ligando de tipo delta 4 (Dll4) (en lo sucesivo en este documento “Dll4”) es un miembro de la familia delta de los ligandos de Notch que muestra expresión altamente selectiva por el endotelio vascular (Shutter et al. (2000) Genes Develop. 14:1313-318) . Dll4 es un ligando para receptores Notch, incluyendo Notch 1 y Notch 4. Las secuencias de ácido nucleico y aminoácidos para Dll4 humano y de ratón se muestran en SEC ID Nº: 1-2 y SEC ID Nº: 3-4, respectivamente. Se han generado ratones con Dll4 dirigido a genes (Duarte et al. (2004) Genes & Dev 18: doi: 10.11 01/gad.1239004; Krebs et al. (2004) Genes & Dev 18: doi: 10.1101/gad.1239204; Gale et al. (2004) Proc Natl Acad Sci USA 101:15949-15954) .

Patel et al. (Cancer Research, Vol. 65, páginas 8690-8697 (2005) ) describen regulación positiva del ligando de tipo delta 4 en la vasculatura tumoral humana y el papel de la expresión basal en la función celular endotelial. Gale et al. (PNAS, Vol. 101, páginas 15949-15954 (2004) ) describen que la insuficiencia haploide del ligando de tipo delta 4 da como resultado letalidad embrionaria debido a defectos importantes en el desarrollo arterial y vascular. Noguera et al. (Proceedings of the Annual Meeting of the American Association for Cancer Research, Vol. 46, SuplS., página 1104 (2005) ) describen la expresión del ligando de tipo delta 4 (Dll4) en modelos de tumorales de ratón. Mailhos et al. (Differentiation, Vol. 69, páginas 135-144 (2001) ) describen delta 4, como un ligando de Notch específico endotelial expresado en sitios de angiogénesis fisiológica y tumoral. El documento WO 03/050502 describe posible identificación y caracterización de células madre de cáncer de mama. El documento WO 03/042246 describe un inhibidor de la ruta de señalización de Notch en la fabricación de un medicamento para su uso en el tratamiento de cáncer.

Breve sumario de la invención

Los experimentos descritos posteriormente muestran que los antagonistas de Dll4 son eficaces en la inhibición del crecimiento tumoral, particularmente en tumores que no son sensibles a otros agente terapéuticos antitumorales, tales como un antagonista del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) .

La invención presenta antagonistas de Dll4 capaces de inhibir Dll4. En una realización, el antagonista de Dll4 es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une específicamente a Dll4 y bloquea la unión de Dll4 con un receptor Notch, tal como por ejemplo, Notch 1. En otra realización, el antagonista de Dll4 de la invención es una proteína de fusión.

La invención proporciona de este modo un antagonista del ligando de tipo delta 4 (Dll4) y un inhibidor del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) para su uso en un método para tratar el desarrollo o crecimiento tumoral, en el que dicho antagonista de Dll4 es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une específicamente a Dll4 y bloquea la unión de Dll4 con un receptor Notch, o una proteína de fusión que comprende un dominio extracelular de Dll4 y un dominio Fc humano de SEC ID Nº: 20.

El anticuerpo o fragmento de anticuerpo usado en la invención puede ser policlonal o monoclonal, y puede ser humanizado, quimérico o completamente humano. Preferentemente el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal o fragmento de anticuerpo monoclonal completamente humano. El fragmento de anticuerpo puede ser, por ejemplo, un anticuerpo de cadena sencilla, un Fab, un F (ab') 2, un pepticuerpo, etc.

Cuando el antagonista de Dll4 es una proteína de fusión, el dominio extracelular de Dll4 o un fragmento o fragmento modificado del mismo se fusiona con un componente de multimerización. El componente de multimerización es un Fc humano de SEC ID Nº: 20. La proteína de fusión puede comprender opcionalmente una secuencia señal, que puede ser nativa de la célula, recombinante o sintética.

También se describe en este documento una composición farmacéutica útil para inhibición del crecimiento o desarrollo de vasos sanguíneos, que comprende un agente capaz de inhibir la actividad de Dll4 y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una realización, el agente es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que bloquea la unión de Dll4 con un receptor Notch. Preferentemente, el antagonista de Dll4 es un anticuerpo completamente humano o fragmento del mismo capaz de inhibir la unión de Dll4 con el receptor Notch 1. En otra realización, el agente es una proteína de Dll4 modificada que es capaz de unirse a su receptor Notch pero dicha unión no da como resultado activación del receptor.

Se describe además en este documento un método para tratar una afección mediada por Dll4, que comprende administrar un agente capaz de inhibir la actividad o expresión de Dll4. La afección mediada por Dll4 es una afección en la que es deseable inhibir el crecimiento o desarrollo de vasos sanguíneos. El antagonista de Dll4 de la invención puede ser particularmente útil en el tratamiento de tumores que no son sensibles o son sensibles de forma menor que la óptima a otros agentes terapéuticos. El antagonista de Dll4 puede bloquear la producción de vasos sanguíneos funcionales y suministro de oxígeno a los tumores. En realizaciones específicas, el antagonista es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-Dll4 o una proteína de fusión. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-Dll4 preferentemente inhibe la unión de Dll4 con el receptor Notch1. La proteína de fusión de la invención comprende un fragmento de la región extracelular nativa que conserva la capacidad para unirse a receptores Notch y carece de una región transmembrana y la cola citoplasmática de Dll4. En una realización, el antagonista de Dll4 de la invención se usa de forma terapéutica para tratar tumores que no son sensibles al tratamiento con un antagonista de VEGF.

También se describe en este documento el uso de un agente capaz de inhibir la actividad del ligando de tipo delta 4 (Dll4) para un sujeto que lo necesite para inhibir el desarrollo o crecimiento tumoral. En una realización, el agente es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo, policlonal o monoclonal. Cuando el agente es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo, puede ser un anticuerpo o fragmento de anticuerpo humanizado, quimérico o completamente humano. En algunas realizaciones, el fragmento de anticuerpo es un anticuerpo de cadena sencilla, un Fab o un F (ab') 2. En una realización, el antagonista de Dll4 es un fragmento de Dll4 fusionado con un componente de multimerización. Se describe adicionalmente en este documento el uso de un agente capaz de inhibir la actividad de Dll4 como se ha definido anteriormente como un primer agente terapéutico, y un agente terapéutico adicional que es un inhibidor de factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) en la fabricación de un medicamento para inhibir el desarrollo o crecimiento tumoral. Preferentemente, el inhibidor de VEGF es anticuerpo anti-VEGF o un bloqueador de VEGF. Cuando el inhibidor de VEGF es un bloqueador de VEGF, el agente es la proteína que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº: 19.

Otros objetos y ventajas resultarán evidentes a partir de una revisión de la descripción detallada a continuación.

Breve sumario de las figuras La Figura 1 muestra que la sobreexpresión de Dll4-Fc por células tumorales C6 da como resultado tumores C6 más pequeños.

La Figura 2 muestra que Dll4-Fc suministrado por vía sistémica es altamente eficaz en la reducción de tumores HT1080 en relación con un antagonista de VEGF basado en receptor. Panel izquierdo: Dll4-Fc o proteína bloqueadora de VEGF en un momento del implante tumoral, tumores recogidos el día 25; Panel derecho: Dll4-Fc o proteína bloqueadora de VEGF proporcionada el día 15 después del implante, tumores recogidos el día 25.

La Figura 3 muestra que los anticuerpos policlonales de Dll4 o proteína Dll4-Fc purificada inhiben el crecimiento tumoral de HT1080.

La Figura 4 muestra la inhibición de la unión... [Seguir leyendo]

1. Un antagonista de ligando de tipo delta 4 (Dll4) y un inhibidor del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) para su uso en un método para tratar el desarrollo o crecimiento tumoral, siendo dicho antagonista de Dll4 un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une específicamente con Dll4 y bloquea la unión de Dll4 con un receptor Notch, o una proteína de fusión que comprende un dominio extracelular de Dll4 y un dominio Fc humano de SEC ID Nº: 20.

2. El antagonista de Dll4 e inhibidor de VEGF para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el anticuerpo

o fragmento de anticuerpo de Dll4 es policlonal.

3. El antagonista de Dll4 e inhibidor de VEGF para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo de Dll4 es monoclonal.

4. El antagonista de Dll4 e inhibidor de VEGF para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo humanizado.

5. El antagonista de Dll4 e inhibidor de VEGF para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo quimérico.

6. El antagonista de Dll4 e inhibidor de VEGF para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo completamente humano.

7. El antagonista de Dll4 e inhibidor de VEGF para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el fragmento de anticuerpo es un anticuerpo de cadena sencilla.

8. El antagonista de Dll4 e inhibidor de VEGF para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el fragmento de anticuerpo es un Fab.

9. El antagonista de Dll4 e inhibidor de VEGF para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el fragmento de anticuerpo es un F (ab') 2.

10. El antagonista de Dll4 e inhibidor de VEGF para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el inhibidor de VEGF es un anticuerpo anti-VEGF.

11. El antagonista de Dll4 e inhibidor de VEGF para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el inhibidor de VEGF es un bloqueador de VEGF de SEC ID Nº: 19.