Uso de iones ferrosos para incrementar la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas.

Utilización de iones ferrosos para incrementar in vitro la inmunorreactividad de las preparaciones deinmunoglobulinas.

Uso de iones ferrosos para incrementar la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas Campo de la invención La invención se refiere al uso de iones ferrosos (Fe (II) ) para incrementar la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas, en particular para incrementar su actividad de fijación a autoantígenos y a antígenos foráneos, su actividad antiidiotípica y sus propiedades antiinflamatorias.

Antecedentes de la invención Los anticuerpos naturales de IgG contra autoantígenos y contra antígenos foráneos se sabe que son una parte del repertorio de anticuerpos normales (1, 2) . Estos anticuerpos naturales acaban formando parte de preparaciones de inmunoglobulinas terapéuticas (IgIV) para la administración intravenosa que se producen en las mezclas de plasma de donantes sanos. Las preparaciones de IgIV se utilizan para el tratamiento de muchas enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias localizadas tanto en un órgano como sistémicas (3) . Se ha sugerido que los autoanticuerpos de IgG naturales presentes en la IgIV son responsables de al menos una parte del efecto terapéutico beneficioso observado en los pacientes tratados (4-6) .

Las preparaciones de inmunoglobulinas contienen anticuerpos antiidiotípicos contra idiotipos de autoanticuerpos asociados a la enfermedad y neutralizan a estos últimos (7-9) .

La solicitud de patente internacional PCT/US95/14869 describe un método para enriquecer las preparaciones de inmunoglobulinas con anticuerpos contra los receptores de antígeno de los linfocitos T. Este método se basa en el uso de una fracción de una preparación de inmunoglobulinas obtenida mediante la elución de una columna de inmunoafinidad en la que se ha inmovilizado un péptido sintético del receptor de antígeno mencionado.

Se ha publicado un método para el tratamiento del lupus eritematoso diseminado en los animales que utiliza una fracción de una preparación con mezcla de inmunoglobulinas enriquecida en anticuerpos contra determinantes idiotípicos de los anticuerpos anti-ADN de los pacientes con lupus. Estos anticuerpos antiidiotípicos se obtuvieron mediante cromatografía de inmunoafinidad de Mg sobre una mezcla inmovilizada de anticuerpos anti-ADN de 55 pacientes con lupus (10) .

Se publicó un método para aumentar la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas (11) que se basa en el procedimiento siguiente. La solución de inmunoglobulinas se pasa a través de una columna de filtración en gel. Esto da lugar a la elución posterior de las fracciones monoméricas y diméricas. La fracción dimérica obtenida está enriquecida en los autoanticuerpos naturales.

Dietrich et al. 1992 han publicado un método para enriquecer las preparaciones de inmunoglobulinas con autoanticuerpos naturales y con anticuerpos antiidiotípicos que se basa en el aislamiento de la fracción de inmunoglobulinas que se fija a los fragmentos F (ab') 2 inmovilizados de las IgIV (12) .

La solicitud de patente BG108223 describe un método para incrementar la autorreactividad de las soluciones de inmunoglobulinas terapéuticas mediante el tratamiento en un campo magnético estático.

Sin embargo, el efecto que todos los métodos descritos más arriba tienen sobre la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas es débil.

La patente europea EP1237928 describe un método para realzar la actividad de una preparación de inmunoglobulinas mediante su tratamiento a pH bajo, a pH alto o con agentes caotrópicos (urea, sales o tiocianatos de guanidina y guanidinio) . Sin embargo, todavía no está claro si este tratamiento da lugar a la aparición de nuevas características beneficiosas para la preparación tratada que sean relevantes desde el punto de vista biológico.

El efecto biológico de los iones ferrosos (Fe (II) ) sobre los linfocitos de rata se estudia con experimentos in vitro (13) . No se encontraron efectos tóxicos, pero la aplicación de este tratamiento a la vez que un campo magnético constante que dio lugar a la muerte de las células. Se sabe que los iones ferrosos pueden potenciar la generación de radicales libres en determinados sistemas biológicos, lo que da lugar a la supresión del crecimiento bacteriano (14) .

La patente de los Estados Unidos US-A-6465511 describe el tratamiento del choque septicémico con un complejo de metal de transición, que incluye metales de transición tales como hierro, cobre, cinc, manganeso, níquel y los atrapadores adecuados. Este complejo de metales de transición puede administrarse solo o con un inhibidor de NO sintetasa y actúa depurando el NO (óxido nítrico) del cuerpo. La invención citada se basa únicamente en el efecto supresor de la concentración del NO y se centra en el tratamiento de la hipotensión en el choque septicémico en el cual un exceso de NO contribuye a la fisiopatología de la afección.

Gracias a Nordström, D et al. (1997) Rheumatol. Int. 17: 67-73 se sabe que la complementación de hierro por vía oral se utiliza durante la investigación de la respuesta a la eritropoyetina humana recombinante (r-HuEPO) cuando se está tratando la anemia por enfermedad crónica en los pacientes con artritis reumatoide (AR) . El protocolo original para el estudio de la pauta terapéutica incluía monitorizar la respuesta a la r-HuEPO administrada como inyección subcutánea y sólo para los pacientes que eran ferropénicos en combinación con la complementación de hierro por vía oral. Esto último se administra con el objetivo de elevar la concentración de hemoglobina en la sangre del paciente. Los autores no investigan el comportamiento de las citocinas en la respuesta a la EPO, asociada a la AR.

El asunto central de la publicación de de Silva, A. D. et al. (2003) Inflammator y Bowel Diseases (IBD) 9: 316-320 es la comparación retrospectiva del uso, de la tolerancia y de la eficacia del tratamiento con hierro por vía oral en los pacientes con enteropatía inflamatoria y causas no inflamatorias de ferropenia. Se explica que el tratamiento con hierro a menudo se utiliza sin que se haya hecho un diagnóstico formal de ferropenia; en la publicación no se sugiere que se traten las afecciones ocasionadas por la producción incontrolada de citocinas inflamatorias.

Hasta la fecha no se han descrito resultados sobre la capacidad que tienen los iones ferrosos para afectar a la inmunorreactividad y a la actividad antiinflamatoria de las preparaciones de inmunoglobulinas.

Descripción La presente invención se refiere al uso de iones ferrosos que con el objetivo de incrementar la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas, en particular para incrementar su actividad de fijación a antígenos foráneos y a autoantígenos, su actividad antiidiotípica y sus propiedades antiinflamatorias. En concreto, la invención se refiere al uso de un agente para incrementar la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas, en donde el agente representa iones ferrosos (Fe (II) ) en forma de una sal ferrosa, y se añade a una dosis única de una preparación de inmunoglobulinas a una concentración final de 0, 5 a 2 mM.

La nueva propiedad inesperada de los iones ferrosos de acuerdo con la invención, que aumenta la actividad antiinflamatoria de las preparaciones de inmunoglobulinas, se confirma mediante los resultados de experimentos in vitro así como de experimentos in vivo (figuras 1-11) . Todos los datos obtenidos demuestran que el tratamiento con Fe (II) altera la inmunorreactividad, la actividad antiidiotípica y las propiedades antiinflamatorias de las preparaciones de inmunoglobulinas terapéuticas. Se mostró que el contacto de la preparación con iones de Fe (II) da lugar a un incremento de la fijación a la citocina proinflamatoria hIFN-y y a un incremento de la supervivencia de los animales con choque septicémico.

Para conocer mejor los mecanismos de acción de los iones ferrosos sobre las preparaciones de inmunoglobulinas terapéuticas se realizaron análisis con quimioluminiscencia. La señal fue débil (0, 5 mV) en el control de la solución con Mg. Sin embargo, la adición de los iones ferrosos a 0, 5 mM incrementó drásticamente la fuerza de la señal (a 20 mV) (figura 11) . Esta señal se suprimía en presencia de la superóxido dismutasa, pero no de la catalasa, una observación que indicó que en el sistema se estaban generando aniones superóxido. A través de una serie de reacciones, este radical se convertiría en especies reactivas de oxígeno aún más agresivas (oxígeno singulete y radical hidroxilo) que tienen la capacidad de introducir cambios en las macromoléculas.

Se utilizó la espectrofluorimetría para estudiar las modificaciones estructurales de las moléculas de inmunoglobulinas de resultas del... [Seguir leyendo]

1. Utilización de iones ferrosos para incrementar in vitro la inmunorreactividad de las preparaciones de inmunoglobulinas.

2. Utilización de iones ferrosos de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada por que se añade una única 5 dosis de iones ferrosos a una preparación de inmunoglobulinas a una concentración final de 0, 5 a 2, 0 mM.

3. Utilización de una preparación de inmunoglobulinas con la inmunorreactividad incrementada, que se puede obtener de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2 para la fabricación de un medicamento para tratar el choque septicémico.