UNA COMPOSICIÓN FARMACÉUTICA O COSMÉTICA QUE COMPRENDE UN OLIGONUCLEÓTIDO DE RNA DE DOBLE CADENA Y USO DEL MISMO EN LA PREPARACIÓN DE UN MEDICAMENTO PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES RELACIONADAS CON EL METABOLISMO DE ANDRÓGENOS.

La presente invención se refiere a nuevos oligonucleótidos de ácido ribonucleico de doble cadena,

los cuales poseen actividad antiandrogénica y en particular, a la utilización de los mismos en el tratamiento de enfermedades relacionadas con el metabolismo de andrógenos. De preferencia, los oligonucleótidos pueden ser formulados con un soporte farmacéuticamente aceptable en composiciones farmacéuticas o cosméticas destinadas al tratamiento de enfermedades relacionadas con el metabolismo de andrógenos o para proveer un efecto beneficioso en la piel y/o el cabello.

Una composición farmacéutica o cosmética que comprende un oligonucleótido de RNA de doble cadena y uso del mismo en la preparación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades relacionadas con el metabolismo de andrógenos.

Antecedentes de la invención Hacia fines de la década de 1960, la manipulación del material genético de diversos organismos sentó las bases de lo que actualmente se denomina ingeniería genética. Mediante esta técnica, secuencias de DNA (ácido desoxirribonucleico por su sigla en inglés) , provenientes de organismos totalmente diferentes (por ejemplo virus y bacterias) , pudieron ser unidas en una sola molécula.

En 1970 se encontró que los retrovirus -virus con un genoma constituido por RNA (ácido ribonucleico) -eran capaces de incluir en su genoma secuencias génicas ajenas, quizás tomadas del material genético de la última célula que infectaron, para luego transportarlas a manera de vector al interior de una nueva célula receptora e integrarlas en el genoma de ésta. La así denominada “terapia génica” surgiría años más tarde de la observación de que las secuencias integradas podían ser tomadas como propias por la célula y expresadas como proteínas funcionales, lo cual dió la pauta para que se postulara que algunas enfermedades genéticas podrían ser tratadas mediante la sustitución o reparación del ADN deficiente y, en el caso de las infecciones, destruir los genes vitales de los agentes patógenos. La aplicación clínica de la terapia génica en seres humanos despertó grandes expectativas en la comunidad científica y médica. No obstante, el desaliento en el terreno de la clínica se presentó cuando los pacientes mostraron complicaciones posteriores al tratamiento. Al parecer, dichas complicaciones fueron consecuencia de la expresión de los genes insertados y al mismo tiempo de los genomas virales usados como vectores. Además, la inserción incorrecta de secuencias génicas en sitios de control del genoma del paciente provocó alteraciones a nivel molecular cuyas consecuencias fisiológicas fueron, en casi todos los casos fatales.

Los obstáculos encontrados en la aplicación de la terapia génica alentaron a los científicos a buscar nuevos tratamientos clínicos y, en general, la ciencia biomédica ha continuado la exploración de nuevas estrategias de manipulación genética. Es así que en años recientes, las investigaciones se han enfocado más que a sustituir a algún gen dañado, a tratar de inhibir su expresión. Esto significa, en última instancia, evitar que se lleve a cabo la síntesis de la proteína para la que ese gen dañado codifica.

Tras un arduo proceso de investigación se ha encontrado que en las células eucarióticas que son infectadas con algunos tipos de virus existe un mecanismo de regulación génica que controla la presencia de las moléculas de RNA virales potencialmente expresables. Dicho mecanismo, encontrado en plantas y hongos, constituyó un descubrimiento sorprendente ya que significaba un nuevo mecanismo de inmunidad antiviral desconocido hasta ese momento. Además de en plantas y en hongos, algunos componentes de este mecanismo fueron encontrados en células de animales invertebrados tales como gusanos planos, protozoarios como el ciliado Paramecium, la ameba Dictyostelium discoideum y en algunos tripanosomas. Es sabido que este tipo de organismos no posee la maquinaria necesaria para montar una respuesta inmune mediada por interferón y que es característica en infecciones virales en vertebrados. Quizá por esta razón los patógenos virales que infectan a los organismos invertebrados tienen la capacidad de duplicar su genoma en las células infectadas de manera relativamente fácil. Entonces, la pregunta obligada es cómo responden los invertebrados a este tipo de infecciones? La respuesta está dada por el mismo mecanismo molecular empleado por las plantas y los hongos: el sistema de RNA de interferencia (RNAi) . Este mecanismo es inducido por una molécula de RNA de doble cadena, tal vez generada por los intermediarios replicativos de los virus infectantes. Se ha propuesto que la interferencia por RNAi es un mecanismo evolutivamente conservado que mantiene la integridad genómica de los organismos eucariotas, controla la expresión de los genes y protege contra las infecciones virales exógenas.

Un avance importante se conoce en 1998, cuando un grupo de embriólogos del Instituto Carnegie de Washington estaba estudiando en Caenorhabditis elegans la interferencia que se produce en la expresión génica mediante la introducción de RNA antisentido en las células [Fire et al., Nature 391:806-11 (1998) ]. Desde 1990, y gracias a estudios en las plantas, se conocía que la unión de moléculas antisentido de DNA o RNA al mRNA bloqueaba su traducción. Lo original del estudio del grupo del Carnegie consistió en introducir en las células RNA de doble cadena (es decir, sentido y antisentido hibridados) . La sorpresa debió ser grande cuando comprobaron que el efecto de silenciamiento génico era mucho más potente que con RNA de cadena sencilla, contra lo que cabría esperar. Aún más sorprendente fue constatar que la estequiometría del proceso no coincidía con la idea de un simple bloqueo del mRNA por hibridación. Unas pocas moléculas de RNA de doble cadena bastaban para silenciar la expresión génica a pesar de la cantidad mucho mayor de mRNA existente en la célula. Es por ello que los investigadores apuntaron a la existencia de un mecanismo amplificador o catalítico de naturaleza desconocida.

Aunque el silenciamiento génico es diferente en los animales respecto al producido en hongos y plantas, el proceso y sus actores moleculares son esencialmente los mismos. La vía normal, fisiológica, de silenciamiento comienza cuando se expresa un pre-miRNA (precursor micro-RNA) , una cadena sencilla que puede plegarse y formar una horquilla de doble cadena denominada miRNA. Otra posibilidad es la aparición de RNA de doble cadena que puede proceder de virus o transposones. En ambos casos, estas cadenas dobles de RNA son cortadas en pequeños fragmentos (19 a 24 nucleótidos) de doble cadena denominados siRNAs (short interfering RNA) por una endonucleasa denominada Dicer.

La caracterización de Dicer [Bernstein et al., Nature 409:363-6 (2001) ] permitió identificarla como una RNAsaIII así como localizar en su estructura un dominio de unión a RNA de doble cadena.

Los siRNA se ligan con un complejo denominado RISC (RNA-induced silencing complex) , activándolo y manifestando una actividad helicasa que separa las dos hebras y, de preferencia, utiliza una de las hebras de RNA como guía para degradar moléculas de RNA complementarias. El complejo ribonucleoproteico resultante se une al mRNA diana. Si la complementariedad no es perfecta, RISC queda asociado al mensajero y se atenúa la traducción. Pero si es perfecta, RISC actúa como una ribonucleasa (RNAsa) , cortando al mensajero y quedando libre para repetir el proceso. Esto es lo que explica que un número pequeño de moléculas de siRNA puedan destruir un número mucho mayor de mRNA.

Hasta hace muy poco se pensaba que RISC era un complejo multiproteico de componentes desconocidos. Los análisis señalaban la familia de proteínas Argonauta, una familia muy conservada en todos los eucariotas, cuyos miembros se presentan en un número variable en cada especie. Era conocido que algunas mutaciones en los integrantes específicos de esta familia causaban defectos en procesos también específicos y en ocasiones muy interesantes. Es el caso de uno de los más conocidos representantes de las Argonautas, la proteína Piwi de Drosophila, fundamental para la generación de las señales moleculares que se generan en el nicho de las GSC (germ-line stem cells) [Lin y Spradling, Development 124:2463-76 (1997) ]. En éste y en muchos de estos procesos se descubrió que la alteración se producía en procesos específicos de silenciamiento. Sin embargo, no se pudo determinar cuál era el papel real de las Argonautas en el proceso, hasta que en septiembre de 2004 la revista Science publicó la estructura tridimensional de un homólogo de Piwi [Joshua-Tor et al., Science 305:1434-7. (2004) ]. Estos autores mostraron la homología estructural entre un dominio común de las Argonautas, el dominio Piwi, y un dominio de una RNAsa, la ribonucleasa H, concluyendo que los integrantes de la familia Argonauta eran precisamente los RISC, al menos en sus actividades más importantes, lo cual no descarta la posibilidad de que participen otros péptidos con funciones accesorias.

Las funciones fisiológicas conocidas que posee el sistema RNAi son muy variadas. Entre otras, el sistema funcionaría como un sistema de defensa contra virus, control de transposones o elementos génicos anómalos.... [Seguir leyendo]

1. Una composición cosmética, caracterizada porque comprende al menos un oligonucleótido de ARN doble cadena seleccionado del grupo consistente en IRA-1, IRA-2, IRA-3, IRA-4, IRA-5, IRA-6 y IRA-7, en donde dicho oligonucleótido de ARN doble cadena inhibe la expresión del receptor de andrógenos; y vehículos; donde:

2. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada porque al menos un oligonucleótido de ARN doble cadena es seleccionado del grupo comprendido por IRA-5, IRA-6 y IRA-7.

3. La composición de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizada porque dicha composición se encuentra en la forma seleccionada del grupo comprendido por gel, emulsión, crema, pasta, pomada, aerosol, parches y loción.

4. La composición de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizada porque dichos vehículos son seleccionados del grupo comprendido por medios oleosos, acuosos, hidrosolubles, promotores de la absorción, mejoradores de la absorción y mezclas de los mismos.

5. La composición de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizada porque dichos vehículos son seleccionados del grupo comprendido por liposomas, partículas, coloides y polímeros.

6. La composición de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizada porque el oligonucleótido de ARN doble cadena se une al ARNm del receptor de andrógenos.

7. La composición de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizada porque comprende una cantidad de oligonucleótido de ARN doble cadena entre 0, 005% y 35% p/p.

8. El uso de la composición de la reivindicación 2 para la elaboración de una composición cosmética que disminuye la caída del cabello.

9. El uso de acuerdo con la reivindicación 8, en donde la composición cosmética es de aplicación tópica.

10. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende al menos un oligonucleótido de ARN doble cadena seleccionado del grupo consistente en IRA-1, IRA-2, IRA-3, IRA-4, en donde dicho oligonucleótido de ARN doble cadena inhibe la expresión del receptor de andrógenos; y excipientes.

11. La composición de acuerdo con la reivindicación 10, caracterizada porque se encuentra en la forma seleccionada del grupo comprendido por gel, emulsión, crema, pasta, pomada, aerosol, parches, solución, sólida y loción.

12. La composición de acuerdo con la reivindicación 10, caracterizada porque el oligonucleótido de ARN doble cadena se une al ARNm del receptor de andrógenos.

13. El uso de la composición de la reivindicación 10 para preparar un medicamento para el tratamiento de individuos que padecen desórdenes en el metabolismo de andrógenos.

14. El uso de acuerdo con la reivindicación 13 en donde la administración de la composición es seleccionada del grupo comprendido por tópica, oral, sublingual, transdermal y endovenosa.

LISTA DE SECUENCIAS

<110> Pablo Cassará do Brasil, comercio de medicamentos Ltda;

KERNER, Néstor; DUGOUR, Andrea; BALAÑÁ, María Eugenia; ÁLVAREZ-ROGER, María Carolina <120> UN OLIGONUCLEÓTIDO DE RNA DE DOBLE CADENA UNA COMPOSICIÓN FARMACÉUTICA O COSMÉTICA QUE LO COMPRENDE Y USO DEL MISMO EN LA PREPARACIÓN DE UN MEDICA-

MENTO PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES RELACIONADAS CON EL METABOLISMO DE ANDRÓGENOS

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<140> PCT/IB2007/053786

<141> 2007-09-19

<150> ARP060104146

<151> 2006-09-12

<160> 14

<170> PatentIn version 3.5

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<211> 21

<212> RNA

<213> Secuencia Artificial

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<223> oligonucleótido sintético con actividad antiandrogénica -hebra sentido <400> 1

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<212> RNA

<213> Secuencia Artificial

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<223> oligonucleótido sintético con actividad antiandrogénica -hebra sentido <400> 3

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