Ácido nucleico aislado que codifica un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos que es por lo menos un 80% idéntica a la secuencia de aminoácidos de los residuos 20 a 273 mostrada en las figuras 2 y 4,

o el complemento de la misma, en el que dicha identidad de secuencia se determina sobre la longitud completa de las secuencias que se comparan, y en el que dicho ácido nucleico es amplificado en tumores de pulmón y/o colon humanos.

Proteína gas-6 (growth arrest-specific gene 6) humana y ácidos nucleicos que la codifican.

Campo de la invención

La presente invención hace referencia en general a la identificación y aislamiento de un nuevo DNA y a la producción recombinante de polipéptidos nuevos codificados por dicho DNA.

Antecedentes de la invención

Las proteínas extracelulares juegan un papel importante en la formación, diferenciación y mantenimiento de organismos multicelulares. El destino de muchas células individuales, por ejemplo, su proliferación, migración, diferenciación o interacción con otras células está gobernado generalmente por la información recibida de otras células y/o el entorno inmediato. Esta información, a menudo se transmite por polipéptidos secretados (por ejemplo, factores mitogénicos, factores de supervivencia, factores citotóxicos, factores de diferenciación, neuropéptidos y hormonas) que, a su vez, son recibidos e interpretados por diversos receptores celulares o proteínas unidas a membrana. Estos polipéptidos secretados o moléculas de señalización tras su secreción por la célula de forma específica alcanzan su sitio de acción en el entorno extracelular.

Las proteínas secretadas tienen diversas aplicaciones industriales, incluyendo las farmacéuticas, diagnósticas, los biosensores y los bioreactores. La mayoría de fármacos proteicos disponibles en la actualidad, como los agentes trombolíticos, los interferones, las interleucinas, las eritropoyetinas, los factores estimulantes de la formación de colonias y diversas otras citocinas, son proteínas de secreción. Sus receptores, que son proteínas de membrana, también tienen un potencial como agentes terapéuticos o diagnósticos. Se han realizado numerosos esfuerzos, tanto en la industria como en el ámbito académico para identificar nuevas proteínas de secreción. Muchos de los esfuerzos se han concentrado en el rastreo de librerías de DNA recombinante de mamífero para identificar secuencias codificantes de nuevas proteínas secretadas. En la literatura se describen diversos ejemplos de procedimientos y técnicas de rastreo [véase por ejemplo, Klein y col., Proc. Natl. Acad. Sci., 93:7108-7113 (1996); patente americana U.S. 5.536.637)].

Las proteínas unidas a membrana y los receptores pueden desempeñar una importante función en la formación, diferenciación y mantenimiento de los organismos multicelulares. El destino de muchas células individuales, por ejemplo, su proliferación, migración, o interacción con otras células está gobernado en general por la información recibida de otras células y/o el entorno inmediato. Esta información, a menudo se transmite por polipéptidos secretados (por ejemplo, factores mitogénicos, factores de supervivencia, factores citotóxicos, factores de diferenciación, neuropéptidos y hormonas) que, a su vez, son recibidos e interpretados por diversos receptores celulares o proteínas unidas a membrana. Dichas proteínas unidas a membrana y receptores celulares incluyen, pero no se limitan a, los receptores de citocinas, los receptores quinasas, los receptores fosfatasas, los receptores implicados en las interacciones célula-célula y las moléculas de adhesión como las selectinas e integrinas. Por ejemplo, la transducción de señales que regulan el crecimiento y la diferenciación celular está regulada en parte por la fosforilación de diversas proteínas celulares. Las proteína tirosina quinasas, enzimas que catalizan dicho proceso, también pueden actuar como receptores de factores de crecimiento. Se incluyen como ejemplos el receptor del factor de crecimiento de fibroblastos y el factor de crecimiento nervioso.

Las proteínas unidas a membrana y las moléculas de receptor tienen diversas aplicaciones industriales, por ejemplo, como agentes farmacéuticos y diagnósticos. Los receptores inmunoadhesinas, por ejemplo, pueden utilizarse como agentes terapéuticos para bloquear la interacción con el receptor-ligando. Las proteínas unidas a membrana también pueden utilizarse para el rastreo de inhibidores potenciales de moléculas pequeñas o de péptidos de la interacción relevante receptor/ligando. Se han realizado esfuerzos tanto en la investigación industrial como académica para identificar nuevas proteínas receptoras nativas. Muchos esfuerzos se han centrado en el rastreo de librerías de DNA recombinantes para identificar las secuencias codificantes de nuevas proteínas receptoras.

En la presente invención se describe la identificación y la caracterización de nuevos polipéptidos de secreción y transmembrana, así como los nuevos ácidos nucleicos que los codifican.

PRO213-1, PRO1330 y PRO1449

El cáncer se caracteriza por el incremento en el número de células anormales, o neoplásicas, derivadas de un tejido normal que proliferan para formar una masa tumoral, la invasión de tejidos adyacentes por estas células tumorales neoplásicas, y la generación de células malignas que finalmente se extienden a través de la sangre o el sistema linfático hasta los nódulos linfáticos regionales y hasta sitios distantes (metástasis). En un estado canceroso, una célula prolifera bajo condiciones en las que células normales no crecerían. El cáncer se manifiesta por sí mismo en una gran variedad de formas, caracterizadas por diferentes grados de invasión y agresividad.

La alteración de la expresión génica está íntimamente relacionada con el crecimiento incontrolado de células y la desdiferenciación, las cuales son una característica común a todos los cánceres. Se ha observado que los genomas de ciertos tumores bien estudiados muestran una menor expresión de genes recesivos, a los que habitualmente se hace referencia como genes supresores de tumores, que funcionarían normalmente para evitar el crecimiento de células malignas, y/o la sobreexpresión de ciertos genes de dominio, tales como oncogenes, que actúan para inducir el crecimiento maligno. Cada uno de estos cambios genéticos parece ser responsable de la importación de algunos de los rasgos que, agregados, representan el fenotipo neoplásico completo (Hunter. Cell 64, 1129 [1991]; Bishop, Cell 64, 235-248 [1991]).

Un mecanismo bien conocido de la sobreexpresión de genes (por ejemplo, oncogén) en células cancerígenas es la amplificación génica. Este es un procedimiento en el que en el cromosoma de la célula ancestral se producen múltiples copias de un gen particular. El procedimiento implica la replicación no programada de la región del cromosoma que comprende el gen, seguido por la recombinación de los segmentos replicados de nuevo en el cromosoma (Alitalo et al., Adv. Cancer Res. 47. 235-281 [1986]). Se cree que la sobreexpresión del gen va en paralelo con la ampliación génica, es decir, es proporcional al número de copias realizadas.

Se ha identificado que los proto-oncogenes que codifican factores de crecimiento y receptores de factores de crecimiento juegan papeles importantes en la patogénesis de varios tumores humanos, incluyendo cáncer de mama. Por ejemplo, se ha observado que el gen de ErbB2 humano (erbB2, también conocido como her2 o c-erbB-2), que codifica un receptor de glicoproteína transmembrana de 185 kD (p185HER2, HER2) relacionado con el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), se sobreexpresa en aproximadamente de un 25% a un 30% del cáncer de mama humano (Slamon et al., Science 235: 177-182 [1987]; Slamon et al., Science 244: 707-712 [1989]).

Se ha descrito que la amplificación génica de un protooncogén en un suceso implicado habitualmente en las formas más malignas de cáncer, y podría actuar como un factor de pronóstico del resultado clínico (Schwab et al., Genes Chromosomes Cancer 1, 181-193 [1990]; Alitalo et al., supra). De este modo, la sobreexpresión de erbB2 se considera habitualmente como un factor de pronóstico de una mala prognosis, especialmente en pacientes con enfermedad primaria que implica nódulos linfáticos auxiliares (Slamon et al., [1987] y [1989], supra; Ravdin y Chamness, Gene 159: 19-27 [1995]; y Hynes y Stem, Biochim. Biophys. Hacia 1198: 165-184 [1994]) y se ha relacionado con la sensibilidad y/o resistencia a la terapia con hormonas y pautas quimioterapéuticas, incluyendo CMF (ciclofosfamida, metotrexato y fluorouracilo) y antraciclinas (Baselga et al., Oncology 11 (3 Suppl 1): 43-48 [1997]). Sin embargo, a pesar de la asociación de la sobreexpresión de erbB2 con una... [Seguir leyendo]

1. Ácido nucleico aislado que codifica un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos que es por lo menos un 80% idéntica a la secuencia de aminoácidos de los residuos 20 a 273 mostrada en las figuras 2 y 4, o el complemento de la misma, en el que dicha identidad de secuencia se determina sobre la longitud completa de las secuencias que se comparan, y en el que dicho ácido nucleico es amplificado en tumores de pulmón y/o colon humanos.

2. Ácido nucleico según la reivindicación 1, en el que el nivel de identidad es por lo menos del 85%.

3. Ácido nucleico según la reivindicación 2, en el que el nivel de identidad es por lo menos del 95%.

4. Ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que codifica un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de los residuos 20 a 273 mostrada en cualquiera de las figuras 2, 4 y 6.

5. Ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicha secuencia de nucleótidos comprende la secuencia codificante completa de cualquiera de las secuencias mostradas en las figuras 1, 3 y 5, o el complemento de las mismas.

6. Ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicha secuencia de nucleótidos comprende la secuencia de nucleótidos mostrada en cualquiera de las figuras 1, 3 y 5, o el complemento de las mismas.

7. Ácido nucleico que comprende la secuencia codificante completa del inserto de ADN (DNA30943-1-1163-1, DNA64907-1163-1 o DNA64908-1163-1) depositado bajo el número de acceso ATCC 209791, ATCC 203243 o ATCC 203242, o el complemento del mismo.

8. Vector que comprende el ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.

9. Vector según la reivindicación 8, en el que dicho ácido nucleico está unido operativamente a secuencias de control reconocidas por una célula huésped transformada con el vector.

10. Célula huésped que comprende el vector según la reivindicación 8 o la reivindicación 9.

11. Célula huésped según la reivindicación 10, en la que dicha célula es una célula CHO, un E. coli o una célula de levadura.

12. Procedimiento para la producción de un polipéptido que comprende cultivar la célula huésped según la reivindicación 10 o la reivindicación 11 en condiciones adecuadas para la expresión de dicho polipéptido y recuperar dicho polipéptido del cultivo celular.

13. Polipéptido aislado que es por lo menos un 80% idéntico a la secuencia de aminoácidos de residuos 20 a 273 mostrada en las figuras 2 y 4, en el que dicha identidad de secuencia se determina sobre la longitud completa de las secuencias que se comparan, y en el que dicho polipéptido es codificado por un ácido nucleico que es amplificado en tumores de pulmón y/o colon humanos.

14. Polipéptido según la reivindicación 13, en el que el nivel de identidad es por lo menos del 85%.

15. Polipéptido según la reivindicación 14, en el que el nivel de identidad es por lo menos del 95%.

16. Polipéptido aislado según cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15, que incluye la secuencia de aminoácidos de residuos 20 a 273 mostrada en las figuras 2 y 4.

17. Polipéptido aislado según cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15, que incluye la secuencia de aminoácidos de residuos 20 a 273 mostrada en las figura 6.

18. Polipéptido aislado según la reivindicación 16, que consiste en la secuencia de aminoácidos de residuos 20 a 273 mostrada en las figuras 2 y 4.

19. Polipéptido aislado según la reivindicación 18, que consiste en la secuencia de aminoácidos de residuos 20 a 273 mostrada en la figura 6.

20. Polipéptido aislado, que es obtenible mediante la expresión del inserto de ADN (DNA30943-1-1163-1, DNA64907-1163-1 o DNA64908-1163-1) depositado bajo el número de acceso ATCC 209791, ATCC 203243 o ATCC 203242.

21. Molécula quimérica que comprende un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 13 a 20, fusionado a una secuencia de aminoácidos heteróloga.

22. Molécula quimérica según la reivindicación 21, en la que dicha secuencia de aminoácidos heteróloga es una secuencia epítopo etiqueta.

23. Molécula quimérica según la reivindicación 21, en la que dicha secuencia de aminoácidos heteróloga es una región Fc de una inmunoglobulina.

24. Anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 16 a 20.

25. Anticuerpo según la reivindicación 24, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo humanizado.

26. Anticuerpo según la reivindicación 24, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.

27. Anticuerpo según la reivindicación 26, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo quimérico.

28. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 27, para su uso en un método de tratamiento médico.

29. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 27, para su uso en el tratamiento del crecimiento de células neoplásicas.

30. Uso de un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 27, en la preparación de un medicamento para el tratamiento del crecimiento de células neoplásicas.

31. Composición que comprende un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 27 en mezcla con un portador farmacéuticamente aceptable.

32. Método para determinar la presencia de un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 16 a 20, que comprende exponer una célula sospechosa de contener dicho polipéptido a un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 27, y determinar la unión del anticuerpo a la célula.

33. Método de diagnóstico de un tumor en un mamífero, que comprende detectar el nivel de expresión del ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 (a) en una muestra de prueba de células de tejido del mamífero y (b) en una muestra de control de células de tejido normales conocidas del mismo tipo de células, donde un nivel de expresión más elevado en la muestra de prueba indica la presencia de un tumor en el mamífero del que se obtuvieron las células de tejido de prueba.

34. Método de diagnóstico de un tumor en un mamífero, que comprende (a) poner en contacto un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 27 con una muestra de prueba de células de tejido obtenidas del mamífero, y (b) detectar la formación en la muestra de prueba de un complejo entre el anticuerpo y un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 16 a 20.

35. Método según la reivindicación 34, en el que la detección se realiza en comparación con la monitorización de la formación del complejo en una muestra de control de células de tejido normales conocidas del mismo tipo de células, indicando una mayor cantidad de complejos formados en la muestra de prueba la presencia de un tumor en el mamífero del que se obtuvieron las células de tejido de prueba.

36. Método según la reivindicación 34 o la reivindicación 35, en el que el anticuerpo transporta una marca detectable.

37. Kit de diagnóstico del cáncer, que comprende un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 27 y un portador en un envase adecuado, junto con instrucciones para el uso del anticuerpo para detectar un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 16 a 20.