Proteína ciclica libre de cisteína.

Proteína, seleccionada de la secuencia de aminoácidos de la región valina Val(91) a glicina Gly(121) delfactor de necrosis tumoral maduro humano,

o de una parte de la misma, con la condición de que la proteínacomprende al menos la secuencia de aminoácidos de la región lisina Lys(98) a ácido glutámico Glu(116),estando sustituida la cisteína Cys(101) por una glicina y estando formado un enlace amida entre el grupoamino de la cadena lateral de la lisina Lys(98) y el grupo carboxilo de la cadena lateral del ácido glutámicoGlu(116), y presentando la estructura proteica para el factor de necrosis tumoral (TNF) maduro humano lasiguiente secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:3:

(NH2)Val Arg Ser Ser Ser Arg Thr Pro Ser Asp Lys Pro Val Ala His Val Val Ala Asn Pro Gln Ala Glu Gly GlnLeu Gln Trp Leu Asn Arg Arg Ala Asn Ala Leu Leu Ala Asn Gly Val Glu Leu Arg Asp Asn Gln Leu Val ValPro Ser Glu Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr Ser Gln Val Leu Phe Lys Gly Gln Gly Cys Pro Ser Thr His Val Leu LeuThr His Thr Ile Ser Arg Ile Ala Val Ser Tyr Gln Thr Lys Val Asn Leu Leu Ser Ala Ile Lys Ser Pro Cys Gln ArgGlu Thr Pro Glu Gly Ala Glu Ala Lys Pro Trp Tyr Glu Pro Ile Tyr Leu Gly Gly Val Phe Gln Leu Glu Lys GlyAsp Arg Leu Ser Ala Glu Ile Asn Arg Pro Asp Tyr Leu Asp Phe Ala Glu Ser Gly Gln Val Tyr Phe Gly Ile IleAla Leu(COOH).

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/AT2008/000448.

Solicitante: APEPTICO FORSCHUNG UND ENTWICKLUNG GMBH.

Nacionalidad solicitante: Austria.

Dirección: c/o mingo bueros Mariahilferstrasse 136, Top 1.15 1150 Wien AUSTRIA.

Inventor/es: FISCHER, BERNHARD, LUCAS,RUDOLF.

Fecha de Publicación: 21 de Marzo de 2013.

Clasificación Internacional de Patentes:

A61K38/19 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 38/00 Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00). › Citoquinas; Linfoquinas; Interferones.
C07K14/525 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Factor de necrosis tumoral (TNF).

PDF original: ES-2398758_T3.pdf

Fragmento de la descripción:

Proteína cíclica libre de cisteína La presente invención se refiere a una proteína cíclica libre de cisteína, que puede usarse como medicamento, por ejemplo para la activación de canales iónicos epiteliales, para la mejora de la función pulmonar, así como para el tratamiento de edemas, como los edemas pulmonares.

El transporte de líquidos a través de capas celulares y tejido se basa fundamentalmente en un gradiente osmótico a través de un transporte activo de iones vectorial, por ejemplo, transporte de sodio. Éste se efectúa principalmente a través de canales iónicos regulados estrictamente y de importancia vital, tal como por ejemplo el complejo de canal de sodio epitelial (ENaC) . El agua sigue este gradiente de manera pasiva, entre otros, a través de canales de agua especiales, como el canal de agua acuaporina V. Para el tejido pulmonar se conoce que, de manera basolateral a las células que bombean, las Na+/K+ ATPasas realizan el transporte vectorial de sodio al intersticio y finalmente los iones a los vasos linfáticos y sanguíneos. Este transporte es, por tanto, activo y tiene lugar independientemente de la presión transpulmonar y la concentración alveolar de proteína.

Un edema es una acumulación patológica de líquido en un órgano, como por ejemplo el pulmón, pero también en el cerebro o en la piel. En caso de un edema en el pulmón se habla de un edema pulmonar. El edema pulmonar se base generalmente en el desequilibrio entre la extravasación de líquido y la resorción de líquido. Muy a menudo está también dañada la permeabilidad del tejido pulmonar, de modo que tiene lugar un mayor aporte de líquido y el líquido se acumula en las cavidades pulmonares (alvéolos) .

Un trastorno de la permeabilidad de este tipo, como consecuencia de la ausencia de un transporte de retorno de líquido desde los alvéolos al intersticio, es especialmente significativo en la lesión aguda del pulmón (en inglés Acute Lung Injur y , ALI) o en el síndrome de dificultad respiratoria aguda (en inglés Acute Respirator y Distress Syndrome, ARDS) o en el síndrome respiratorio agudo grave (SARS) , en la neumonía o en el fallo multiorgánico. El trastorno de la permeabilidad desempeña también un papel en otras enfermedades pulmonares, tal como en daños pulmonares inducidos por ventilación asistida, trasplantes de pulmón, daños pulmonares asociados con transfusión, administración terapéutica de IL-2 o asma.

Como resultado de una acumulación de líquido aumentada en el tejido u órgano, por ejemplo, en el pulmón, se dificulta o se restringe completamente el necesario intercambio de gases. No pasa nada de oxígeno desde el aire de respiración a la sangre, de modo que producirse daños orgánicos letales por falta de oxígeno.

No hay ninguna terapia convencional general para el tratamiento del edema de permeabilidad. En general los esfuerzos van dirigidos a proporcionar ventilación artificial a los pacientes con edema pulmonar, para garantizar el aporte de oxígeno a la sangre y, de ese modo, a los órganos.

Por el documento DE 38 41 759 se conocen distintos péptidos derivados del factor de necrosis tumoral (TNF) .

El documento EP 1 452 868 se refiere un procedimiento para la selección, a partir de una biblioteca de compuestos, de un compuesto que es eficaz como medicamento, describiéndose diferentes péptidos.

En el documento WO 90/06945 se describen, entre otros, péptidos que serían adecuados para la lucha contra enfermedades.

En von Carswell et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 72, 3666, 1975 se notificó que el suero de animales tratados con endotoxina, que antes se habían infectado con la cepa de Mycobacterium Calmette-Guerin (BCG) , provocaba una necrosis hemorrágica en diferentes tumores en el ratón. Esta actividad se atribuyó al factor de necrosis tumoral. El TNF muestra también in vitro un efecto citostático y citotóxico frente a una pluralidad de líneas celulares transformadas, mientras que las líneas celulares normales humanas y animales no se ven afectadas por ello (M. R. Ruff et al, Lymphokines, Vol. II, Academic Press Inc., Nueva York, 1981, págs. 235-275) . Se han descrito ya la caracterización bioquímica y el gen para el TNF humano (D Pennica et al, Nature 312, 724, 1984; Aggarwal, B. B. et al, J. Biol. Chem. 260, 2334-2345, 1985; Nedwin, G.E. et al, Nucl. Acids Res. 13, 6361, 1985) .

A partir de estos datos pudo derivarse la siguiente estructura proteica para el factor de necrosis tumoral (TNF) maduro humano:

(NH2) Val Arg Ser Ser Arg Thr Pro Ser Asp Lys Pro Val Ala His Val Val Ala Asn Pro Gln Ala Glu Gly Gln Leu Gln Trp Leu Asn Arg Arg Ala Asn Ala Leu Leu Ala Asn Gly Val Glu Leu Arg Asp Asn Gln Leu Val Val Pro Ser Glu Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr Ser Gln Val Leu Phe Lys Gly Gln Gly Cys Pro Ser Thr His Val Leu Leu Thr His Thr Ile Ser Arg Ile Ala Val Ser Tyr Gln Thr Lys Val Asn Leu Leu Ser Ala Ile Lys Ser Pro Cys Gln Arg Glu Thr Pro Glu Gly Ala Glu Ala Lys Pro Trp Tyr Glu Pro Ile Tyr Leu Gly Gly Val Phe Gln Leu Glu Lys Gly Asp Arg Leu Ser Ala Glu Ile Asn Arg Pro Asp Tyr Leu Asp Phe Ala Glu Ser Gly Gln Val Tyr Phe Gly Ile Ile Ala Leu (COOH)

Además se ha descrito el gen TNF de la vaca, el conejo y el ratón (Goeddel D. V. et al., Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 51, 597, 1986) .

Además de sus propiedades citotóxicas, el TNF está implicado conjuntamente de manera principal en reacciones inflamatorias (J.W. Larrick et al, Pharmac. Res. Vol. 5, n.º 3, 129-139, 1988) . En el modelo animal pudo mostrarse la participación del TNF en el choque septicémico (Torti F. M. et al, Science 229, 867-869, 1985) y la enfermedad del injerto contra huésped (Piguet, P F et al, J. Exp. Med. 166, 1280, 1987) .

En Lucas R et al, Science (1994) Vol. 263. n.º 5148, págs. 814 -817 se describe un péptido, que se derivó de la región Ser (99) a Glu (116) del TNF, y que se propone para el tratamiento de edemas. Este péptido es también el objeto del documento WO 00/09149. Sin embargo, para hacer que este péptido del documento WO 00/09149 fuera útil, tuvo que sustituirse artificialmente la posición Pro (100) por el aminoácido cisteína y la posición Cys (101) por el aminoácido glicina. Como el péptido lineal Ser (99) a Glu (116) no tenía ningún efecto según la invención (Hribar M. et al., Eur. J. Immunol. (1999) , Vol. 29, 3105-3111; Braun C., J. Immunol. (2005) , 175: 3402-3408; Fukuda N. et al. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol (2001) 280: L1258-L1265) , tuvo que sustituirse adicionalmente la posición Glu (116) por el aminoácido cisteína.

Un péptido de este tipo, descrito en el documento WO00/09149, no es adecuado para la producción de medicamentos, ya que contiene dos cisteínas en las posiciones (100) y (116) , que, como es sabido, en disolución se reducen, rompiéndose el puente disulfuro entre las cisteínas y se abre la estructura cíclica del péptido, con lo que el péptido se hace inactivo.

Se descubrió ahora sorprendentemente un péptido cíclico libre de cisteína, que se deriva del factor de necrosis tumoral (TNF) maduro y que presenta interesantes propiedades biológicas.

El factor de necrosis tumoral (TNF) maduro, tal como se usa en el presente documento, es preferiblemente el factor de necrosis tumoral maduro humano.

En un aspecto, la presente invención pone a disposición una proteína que se selecciona de la secuencia de aminoácidos de la región valina Val (91) a glicina Gly (121) , o una parte de la misma, del factor de necrosis tumoral maduro humano, con la condición de que la proteína comprenda por lo menos la secuencia de aminoácidos de la región lisina Lys (98) a ácido glutámico Glu (116) , sustituyéndose la cisteína Cys (101) por una glicina y estando formado un enlace amida entre el grupo amino de la cadena lateral de la lisina Lys (98) y el grupo carboxilo de la cadena lateral del ácido glutámico Glu (116) , y presentando la estructura proteica para el factor de necrosis tumoral (TNF) maduro humano la siguiente secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:3:

(NH2) Val Arg Ser Ser Ser Arg Thr Pro Ser Asp Lys Pro Val Ala His Val Val Ala Asn Pro Gln Ala Glu Gly Gln Leu Gln Trp Leu Asn Arg Arg Ala Asn Ala Leu Leu Ala Asn Gly Val Glu Leu Arg Asp Asn Gln Leu Val Val Pro Ser Glu Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr Ser Gln Val Leu Phe Lys Gly Gln Gly Cys Pro Ser Thr His Val Leu Leu Thr His Thr Ile Ser Arg Ile Ala Val Ser Tyr Gln Thr Lys Val Asn Leu Leu Ser Ala Ile Lys Ser Pro Cys Gln Arg Glu Thr Pro Glu Gly Ala Glu Ala Lys Pro Trp Tyr Glu Pro Ile Tyr Leu Gly Gly Val Phe Gln Leu Glu Lys Gly Asp Arg Leu Ser Ala Glu Ile Asn Arg Pro Asp Tyr Leu Asp Phe Ala Glu Ser Gly Gln Val Tyr Phe Gly Ile Ile Ala Leu (COOH) .

Una proteína que se pone a disposición según la presente invención... [Seguir leyendo]

Reivindicaciones:

1. Proteína, seleccionada de la secuencia de aminoácidos de la región valina Val (91) a glicina Gly (121) del factor de necrosis tumoral maduro humano, o de una parte de la misma, con la condición de que la proteína comprende al menos la secuencia de aminoácidos de la región lisina Lys (98) a ácido glutámico Glu (116) ,

estando sustituida la cisteína Cys (101) por una glicina y estando formado un enlace amida entre el grupo amino de la cadena lateral de la lisina Lys (98) y el grupo carboxilo de la cadena lateral del ácido glutámico Glu (116) , y presentando la estructura proteica para el factor de necrosis tumoral (TNF) maduro humano la siguiente secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:3:

2. Proteína según la reivindicación 1, con la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:1 (NH2) Val-Asn-Leu-Leu-Ser-Ala-Ile-Lys-Ser-Pro-Gly-Gln-Arg-Glu-Thr-Pro-Glu-Gly-Ala-Glu-Ala-Lys-Pro-Trp-Tyr-Glu-Pro-Ile-Tyr-Leu-Gly (COOH) , en la que está formado un enlace amida entre el grupo amino de la cadena lateral de la lisina Lys (8) y el grupo carboxilo de la cadena lateral del ácido glutámico Glu (26) .

3. Proteína según la reivindicación 1, la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:2 (NH2) Lys-Ser-Pro-Gly-Gln-Arg-Glu-Thr-Pro-Glu-Gly-Ala-Glu-Ala-Lys-Pro-Trp-Tyr-Glu (COOH) , en la que está formado un enlace amida entre el grupo amino de la cadena lateral de la lisina Lys (1) y el grupo carboxilo de la cadena lateral del ácido glutámico Glu (19) .

4. Proteína según una de las reivindicaciones 1 a 3, para su uso como medicamento.

5. Proteína según una de las reivindicaciones 1 a 3, para su uso en el tratamiento de edemas pulmonares.

6. Preparación farmacéutica, que comprende una proteína según una de las reivindicaciones 1 a 3.

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