Procedimientos y composiciones para el tratamiento y el diagnóstico de la fibrosis.

Un inhibidor de la proteína 2 de tipo lisil-oxidasa (LOXL2) para uso en un procedimiento para tratar lafibrosis;

en el que el inhibidor de la LOXL2 es un anticuerpo dirigido contra LOXL2 o su fragmento de unión a antígeno, unARNip, un shARN o un polinucleótido de sentido contrario.

Procedimientos y composiciones para el tratamiento y el diagnóstico de la fibrosis

Antecedentes 1. Cáncer

El cáncer es un grave problema de salud pública en los Estados Unidos y otros países desarrollados.

Actualmente, una de cada cuatro muertes en los Estados Unidos son debidas al cáncer. El tratamiento contra el cáncer implica tratar pacientes con fármacos quimioterapéuticos para eliminar las células tumorales. Sin embargo, subconjuntos de células tumorales son frecuentemente resistentes al tratamiento con fármacos y sobreviven para repoblar los sitios de origen y sitios metastásicos distantes, conduciendo a una recurrencia y morbilidad detectables de la enfermedad. Se cree que muchas células tumorales de carcinoma que tienen las propiedades de capacidad

invasiva y metastásica aumentadas, y una resistencia a los fármacos alterada, han experimentado una transformación morfológica que abarca o es similar a la EMT (transición epitelial-mesenquimal) . Las células que experimentan la EMT pierden las propiedades de adherencia normales de las células epiteliales y experimentan un espectro de cambios que incluyen la pérdida de expresión de la caderina-E y la expresión de los marcadores mesenquimales, aumento de la motilidad, aumento de la invasividad y aumento de la resistencia a la muerte celular.

Las terapias principales para el cáncer son actualmente la cirugía, la radiación y la quimioterapia. Las soluciones quimioterapéuticas tales como los antibióticos antitumorales, los agentes alquilantes, los compuestos de nitrosourea, los alcaloides de la vinca, las hormonas esteroideas, y los antimetabolitos forman el grueso de las terapias de las que disponen los oncólogos. A pesar de los avances en el campo del tratamiento del cáncer, el

cáncer sigue siendo un problema de salud principal.

2. Angiogénesis [0003] La angiogénesis, la formación de nuevos vasos sanguíneos además de los capilares preexistentes, es una secuencia de acontecimientos que es de importancia clave en una amplia variedad de procesos fisiológicos y patológicos. El crecimiento normal del tejido, tal como en el desarrollo embriónico, la cicatrización de las heridas, y el ciclo menstrual, está caracterizado por le dependencia en la formación de nuevos vasos para el suministro de oxígeno y nutrientes, así como la eliminación de productos residuales. Un gran número de enfermedades diferentes y no relacionadas están asociadas también con la formación de nueva vasculatura. En determinadas patologías están las dolencias en las que la angiogénesis es baja, y se debería potenciar para mejorar el estado patológico. Con más frecuencia, sin embargo, la angiogénesis excesiva es una característica importante de diversas patologías, incluyendo las patologías caracterizadas o asociadas con una proliferación anormal o descontrolada de células. Las patologías que implican una angiogénesis excesiva incluyen, por ejemplo, cáncer (tumores sólidos y hematológicos) , enfermedades cardiovasculares (tales como ateroesclerosis y restenosis) , inflamación crónica (artritis reumatoide,

enfermedad de Crohn) , diabetes (retinopatía diabética) , psoriasis, endometriosis, glaucoma neovascular y adiposidad. Estas dolencias pueden beneficiarse de la inhibición quimioterapéutica de la angiogénesis.

Hablando en general, el proceso angiogénico conlleva la proliferación y la migración de un endotelio normalmente quiescente, la proteolisis controlada de la matriz pericelular, y la síntesis de nuevos componentes de la 45 matriz extracelular mediante el desarrollo de capilares. El establecimiento de nuevos contactos intra e intercelulares y la diferenciación morfológica de células endoteliales en redes tubulares de tipo capilar proporciona el respaldo para su posterior maduración, ramificación, remodelación y regresión selectiva dirigida a formar una red microvascular funcional muy organizada. Las interacciones autocrinas, paracrinas y anficrinas del endotelio vascular con los componentes circundantes de su estroma, así como con las citocinas proangiogénicas y angiostáticas y factores de 50 crecimiento que orquestan la angiogénesis fisiológica, están normalmente estrechamente regulados, tanto espacial como temporalmente.

La angiogénesis es crucial para el crecimiento de tejidos neoplásicos. Durante más de 100 años, se ha observado que los tumores están más vascularizados que los tejidos normales. Algunos estudios experimentales 55 han sugerido que el crecimiento del tumor primario y la metástasis requieren neovascularización. En contraste a los procesos bien orquestados descritos anteriormente para el crecimiento del tejido normal, la angiogénesis patológica necesaria para el crecimiento del tumor activo es generalmente sostenida y persistente, siendo la adquisición inicial del fenotipo angiogénico un mecanismo común para el desarrollo de una variedad de tipos de tumores sólidos y hematopoyéticos. Los tumores que son incapaces de adquirir y sostener una red vascular permanecen normalmente inactivos como lesiones asintomáticas in situ. La metástasis es también dependiente de la angiogénesis. Para que una célula tumoral se convierta satisfactoriamente en metastásica, debe generalmente poder acceder a la vasculatura en el tumor primario, sobrevivir en la circulación, capturarse en la microvasculatura del órgano diana, salir de esta vasculatura, crecer en el órgano diana, e inducir la angiogénesis en el sitio diana. De esta manera, la angiogénesis parece ser necesaria al comienzo así como en la finalización de la cascada metastásica.

La criticidad de la angiogénesis para el crecimiento y la metástasis de las neoplasias proporciona de esta manera una óptima diana potencial de los esfuerzos quimioterapéuticos. Los agentes antiangiogénicos adecuados pueden actuar directa o indirectamente para afectar la angiogénesis asociada al tumor tanto retrasando 10 su inicio (es decir, bloqueando un “interruptor angiogénico”) , como bloqueando la neovascularización sostenida y focal que es característica de muchos tipos de tumores. Las terapias antiangiogénicas dirigidas contra el endotelio asociado al tumor y los múltiples procesos moleculares y celulares y las dianas implicadas en la angiogénesis patológica sostenida se están evaluando activamente para determinar su seguridad y eficacia en múltiples ensayos clínico. Sin embargo, se ha conseguido hasta la fecha un éxito limitado en el descubrimiento y/o la identificación de agentes antiangiogénicos seguros y/o eficaces.

3. Fibrosis [0007] La fibrosis es la acumulación anormal de tejido fibroso que se puede producir como parte del proceso de cicatrización de heridas en un tejido dañado. Dicho tejido dañado puede ser el resultado de una lesión física, inflamación, infección, exposición a toxinas, y otras causas. Los ejemplos de fibrosis incluyen formación de la cicatriz cutánea, queloides, fibrosis hepática, fibrosis pulmonar (por ejemplo, silicosis, asbestosis) , fibrosis renal (que incluye nefropatía diabética) , escleroderma, y glomeruloesclerosis.

La fibrosis del hígado (hepática) , por ejemplo, se produce como parte de la respuesta de cicatrización de la herida a una lesión crónica del hígado: la fibrosis se produce como una complicación de la hemocromatosis, la enfermedad de Wilson, alcoholismo, esquistosomiasis, hepatitis vírica, obstrucción de los conductos biliares, exposición a toxinas, y trastornos metabólicos. Se cree que esta formación del tejido de cicatrización representa un intento del cuerpo para encapsular el tejido lesionado. La fibrosis hepática se caracteriza por la acumulación de una matriz extracelular que se puede distinguir cualitativamente de la del hígado normal. Si no se controla, la fibrosis hepática progresa a cirrosis (definida por la presencia de nódulos encapsulados) , insuficiencia hepática, y muerte.

Tal como han resumido Li y Friedman (Gastroenterol. Hepatol. 14: 618-633, 1999) , las estrategias terapéuticas actuales y propuestas para la fibrosis hepática incluyen la eliminación de la causa subyacente (por 35 ejemplo, la toxina o el agente infeccioso) , la supresión de la inflamación (utilizando, por ejemplo, corticoesteroides, antagonistas del receptor de la IL-1, u otros agentes) , la regulación de la activación por defecto de los astrocitos (por ejemplo, interferón gamma o antioxidantes) , la promoción de la degradación de la matriz, o la promoción de la apoptosis de los astrocitos. A pesar de los progresos recientes, muchas de estas estrategias siguen todavía en la etapa experimental, y los tratamientos existentes están dirigidos a suprimir la inflamación en lugar de abordar los procesos bioquímicos subyacentes.... [Seguir leyendo]

1. Un inhibidor de la proteína 2 de tipo lisil-oxidasa (LOXL2) para uso en un procedimiento para tratar la fibrosis;

en el que el inhibidor de la LOXL2 es un anticuerpo dirigido contra LOXL2 o su fragmento de unión a antígeno, un ARNip, un shARN o un polinucleótido de sentido contrario.

2. El inhibidor para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la fibrosis se selecciona entre fibrosis cardiaca, formación de la cicatriz dérmica, queloides, fibrosis hepática, silicosis, asbestosis, fibrosis renal, nefropatía diabética, escleroderma, glomeruloesclerosis y enfermedad de Alzheimer.

3. El inhibidor para uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el que la fibrosis cardiaca está asociada con hipertensión, enfermedad cardiaca hipertensiva, infarto de miocardio, ateroesclerosis o restenosis. 15

4. El inhibidor para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en el que la fibrosis se produce como una complicación de hemocromatosis, enfermedad de Wilson, alcoholismo, esquistosomiasis, hepatitis vírica, obstrucción del conducto biliar, exposición a toxinas o un trastorno metabólico.

5. El inhibidor para uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el que la fibrosis es fibrosis pulmonar.

6. El inhibidor para uso de acuerdo con la reivindicación 5, en el que la fibrosis pulmonar se selecciona entre fibrosis pulmonar idiopática, neumonía intersticial idiopática, síndrome de dificultad respiratoria aguda, alveolitis fibrosante criptogénica, neumonía intersticial fibrosante crónica, enfermedad pulmonar intersticial, y enfermedad

pulmonar parenquimal difusa.

7. El inhibidor para uso de acuerdo con la reivindicación 6, en el que la fibrosis pulmonar es fibrosis pulmonar idiopática.

8. El inhibidor para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que el inhibidor es un anticuerpo dirigido contra LOXL2 o su fragmento de unión a antígeno.

9. El inhibidor para uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el que el anticuerpo es un anticuerpo humanizado o un anticuerpo humano. 35

10. El inhibidor para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en el que el inhibidor es un anticuerpo dirigido contra LOXL2 o un fragmento de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a una región de la LOXL2 que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada entre una cualquiera de las SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 11 y 16.

11. El inhibidor para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-10 en el que el inhibidor es un inhibidor no competitivo de LOXL2.

12. El inhibidor para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en el que la LOXL2 es 45 una forma madura de LOXL2 resultante del procesamiento proteolítico.

13. El inhibidor para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en el que el inhibidor se utiliza en combinación con un agente antineoplásico biológico.

14. El inhibidor para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en el que el inhibidor se utiliza en combinación con un agente quimioterapéutico.

15. El inhibidor para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en el que el inhibidor se utiliza en combinación con un agente antiangiogénico. 55

16. El inhibidor para uso de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en el que el inhibidor se utiliza en combinación con un agente antifibrótico.