Procedimientos mejorados para preparar escualeno.

Un procedimiento para la fabricación de un adyuvante de emulsión de aceite en agua,

que comprende:

(i) preparar escualeno a partir de una composición que comprende escualeno de una fuente animal mediante un procedimiento que comprende las etapas de: (a) una destilación de purificación llevada a cabo a una temperatura T1; y (b) una destilación desnaturalizante llevada a cabo a una temperatura T2; en el que las etapas (a) y (b) pueden realizarse en cualquier orden; T1 y T2 son suficientes para hacer que hierva el escualeno; T2 >T1; y T2 ≥ 200 ºC.

(ii) preparar una emulsión usando el escualeno preparado en la etapa (i).

Procedimientos mejorados para preparar escualeno

CAMPO TÉCNICO

La presente invención está en el campo de la fabricación de adyuvantes de emulsiones de aceite en agua que comprenden escualeno que tiene una pureza adecuada para aplicaciones farmacéuticas.

TÉCNICA ANTERIOR

El aceite de hígado de tiburón contiene un terpenoide insaturado ramificado llamado escualeno, (C30H50; [ (CH3) 2C[=CHCH2CH2C (CH3) ]2=CHCH2-]2; 2, 6, 10, 15, 19, 23-hexametil-2, 6, 10, 14, 18, 22-tetracosahexaeno; CAS RN 7683-64-9) . El escualeno es conocido para su uso en emulsiones de aceite en agua en vacunas humanas, por ejemplo, la emulsión MF59 que se usa para adyuvantar vacunas contra la gripe. El escualeno también se usa en otros productos farmacéuticos (por ejemplo, pomadas, supositorios) y en cosméticos.

Las actuales fuentes para el escualeno son principalmente aceites de pescado, y en particular aceites de hígado de tiburón. Puede haber problemas asociados al uso de escualeno extraído de aceite de hígado de tiburón, particularmente si no se mantienen rigurosos patrones de fabricación (tales como aquellos usados durante la producción de MF59 por Novartis) . Por ejemplo, los tiburones pueden infectarse por patógenos que también son infecciosos para los seres humanos o que producen sustancias que son perjudiciales para los seres humanos, y pueden existir TSE o agentes de tiburón similares a TSE [por ejemplo, referencias 1-3]. Además, los tiburones pueden contener toxinas humanas, tales como carchatoxina. Además, los tiburones pueden contener proteínas a las que los seres humanos pueden ser alérgicos. Una proteína de pescado a la que los seres humanos son alérgicos es parvalbúmina que se encuentra en los tiburones. Así, las fuentes de baja calidad baratas de escualeno no son adecuadas para uso farmacéutico humano. El riesgo de daño a un receptor humano puede ser elevado en situaciones en las que el escualeno sea parte de un adyuvante inmunológico debido a que, por definición, el adyuvante puede inducir una fuerte respuesta inmunitaria no deseada contra la impureza.

Sería útil encontrar procedimientos adicionales y mejorados para preparar escualeno que fuera adecuado para uso farmacéutico, es decir, un producto que cumpliera normas reguladoras y no contuviera contaminantes, patógenos, virus, toxinas humanas o proteínas que pudieran ser perjudiciales para los seres humanos. El procedimiento de la presente invención es particularmente útil para la purificación de escualeno derivado de aceite de hígado de tiburón.

DIVULGACIÓN DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona un procedimiento para la fabricación de un adyuvante de emulsión de aceite en agua que comprende (i) preparar escualeno a partir de una composición que comprende escualeno de una fuente animal, mediante un procedimiento que comprende las etapas de: (a) una destilación de purificación llevada a cabo a una temperatura T1; (b) una destilación desnaturalizante llevada a cabo a una temperatura T2; en el que las etapas

(a) y (b) pueden realizarse en cualquier orden; T1 y T2 son suficientes para hacer que hierva el escualeno; T2 > T1; y T2 º 200 ºC (ii) preparar una emulsión usando el escualeno preparado en la etapa (i) . La fuente animal es normalmente una fuente de pescado, tal como aceite de hígado de tiburón (o un extracto del mismo) , es decir, la invención proporciona un procedimiento para preparar escualeno de aceite de hígado de tiburón o de un extracto de aceite de hígado de tiburón.

La presente invención proporciona además un procedimiento para la fabricación de un adyuvante de emulsión de aceite en agua que comprende (i) preparar escualeno a partir de una composición que contiene escualeno mediante un procedimiento que comprende las etapas de (a) una destilación de purificación llevada a cabo a una temperatura T1; (b) una destilación desnaturalizante llevada a cabo a una temperatura T2; en el que las etapas (a) y (b) pueden realizarse en cualquier orden; T1 y T2 son suficientes para hacer que hierva el escualeno; T1 < 140 ºC y T2 º 200 ºC

(ii) preparar una emulsión usando el escualeno preparado en la etapa (i) . La composición que contiene escualeno puede ser útilmente aceite de hígado de tiburón o un extracto del mismo.

La presente invención proporciona además un procedimiento para la re-destilación de una composición que comprende al menos el 99 % de escualeno, siendo dicha re-destilación una destilación desnaturalizante llevada a cabo a una temperatura T2, en el que T2 º 200 ºC. Esta re-destilación puede reducir el contenido de humedad de la composición, por ejemplo, a º0, 01 %.

El procedimiento de la presente invención puede usarse para producir un producto que es adecuado para aplicaciones farmacéuticas. En particular, el procedimiento de la presente invención puede usarse para producir escualeno purificado que no contiene contaminantes, patógenos, virus, toxinas o proteínas humanas, en particular la proteína parvalbúmina, que podría ser perjudicial para seres humanos.

La presente invención proporciona además un procedimiento para preparar una composición de vacuna, que comprende preparar una emulsión como se ha descrito anteriormente y combinar la emulsión con un antígeno.

La presente invención proporciona además un procedimiento para preparar un kit de vacuna que comprende preparar una emulsión como se ha descrito anteriormente y envasar la emulsión en un kit como un componente de kit junto con un componente de antígeno.

También se describe escualeno preparado según los procedimientos de la presente invención.

La presente invención proporciona además una emulsión de aceite en agua que comprende escualeno preparado según los procedimientos de la presente invención.

También se describe una vacuna que comprende escualeno preparado según los procedimientos de la presente invención.

También se describe el uso de escualeno preparado según los procedimientos de la presente invención en una vacuna.

Destilación de purificación La composición que comprende escualeno puede derivarse de cualquier fuente adecuada, por ejemplo, espumas de jabón de licor negro; jabón de resinas de lejías celulósicas; resina de lejías celulósicas en bruto; brea de resinas de lejías celulósicas; aceite de caña de azúcar; residuos de extracción, desengomado y refinado de aceites y grasas; residuos de destilación de ácidos grasos y ésteres; destilados de desodorización de aceites vegetales; aceite de oliva; aceite de soja; aceite de salvado de arroz; aceite de hígado de tiburón; sebo de res; aceite de café; aceite de pescado; aceite de hígado de bacalao; aceite de germen de trigo; aceite de germen de maíz; aceites de palma; aceites de andiroba; y aceite de residuos de tomate. En particular, la composición que comprende escualeno puede derivarse de aceite de hígado de tiburón.

La destilación de purificación elimina impurezas de una composición que comprende escualeno para producir una composición purificada. La composición que comprende escualeno es generalmente un líquido. Antes de la destilación de purificación, la composición que comprende escualeno puede contener impurezas tales como escualamina; alquilgliceroles; ácidos grasos (por ejemplo, ácidos grasos omega-3) ; vitaminas A y D; pristina; triglicéridos; éteres de glicerol y alcoholes grasos.

La destilación de purificación se lleva a cabo a una temperatura T1 en la que T1 puede ser suficiente para hacer que hierva el escualeno, es decir, T1 puede ser superior a o igual al punto de ebullición del escualeno. El punto de ebullición del escualeno es 429 - 430 ºC a 760 mm de Hg (es decir, 1 atmósfera) .

El punto de ebullición de un líquido es la temperatura a la que la presión de vapor de la fase líquida de un compuesto es igual a la presión externa que actúa sobre la superficie del líquido. Por tanto, el punto de ebullición del escualeno, y de ahí el límite inferior de T1, dependerá de la presión externa que actúe sobre la superficie de la composición que comprende escualeno. Este fenómeno es muy conocido en la técnica y el experto podría calcular el punto de ebullición del escualeno a una presión de destilación dada usada. Alternativamente, el experto podría calcular la presión de destilación requerida basándose en un punto de ebullición observado deseado del escualeno. Tales cálculos pueden llevarse a cabo usando un nomógrafo.

En una realización, la destilación de purificación puede llevarse a cabo a una temperatura de al menos 70 ºC, por ejemplo, al menos 75 ºC, o al menos 80 ºC. En otra realización, la destilación de purificación... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para la fabricación de un adyuvante de emulsión de aceite en agua, que comprende:

(i) preparar escualeno a partir de una composición que comprende escualeno de una fuente animal mediante un procedimiento que comprende las etapas de: (a) una destilación de purificación llevada a cabo a una temperatura T1; y (b) una destilación desnaturalizante llevada a cabo a una temperatura T2; en el que las etapas (a) y (b) pueden realizarse en cualquier orden; T1 y T2 son suficientes para hacer que hierva el escualeno; T2 > T1; y T2 200 ºC.

(ii) preparar una emulsión usando el escualeno preparado en la etapa (i) .

2. Un procedimiento para la fabricación de un adyuvante de emulsión de aceite en agua, que comprende:

(i) preparar escualeno a partir de composición que contiene escualeno mediante un procedimiento que comprende las etapas de: (a) una destilación de purificación llevada a cabo a una temperatura T1; y (b) una destilación desnaturalizante llevada a cabo a una temperatura T2; en el que las etapas (a) y (b) pueden realizarse en cualquier orden; T1 y T2 son suficientes para hacer que hierva el escualeno; T1 < 140 ºC y T2 º 200 ºC.

(ii) preparar una emulsión usando el escualeno preparado en la etapa (i) .

3. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que T1 < 140 ºC.

4. El procedimiento de cualquier reivindicación precedente, en el que el escualeno preparado en la etapa (i) se mantiene estéril tras el tratamiento de destilación y antes de la preparación de la emulsión en la etapa (ii) .

5. El procedimiento de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que la composición usada en la etapa (i) comprende una o más proteínas.

6. El procedimiento de la reivindicación 5, en el que la composición comprende parvalbúmina.

7. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la destilación desnaturalizante se lleva a cabo a una presión de 0, 5 mm de Hg (66, 7 Pa) a 5, 0 mm de Hg (666, 6 Pa) .

8. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la destilación de purificación se lleva a cabo a una temperatura de 70 a 100 ºC.

9. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la destilación de purificación se lleva a cabo a una presión de 0, 5 μm de Hg (66, 7 mPa) a 5 μm de Hg (666, 6 mPa) .

10. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la destilación de purificación se lleva a cabo antes de la destilación desnaturalizante.

11. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la composición usada en la etapa (i) se somete a saponificación.

12. El procedimiento de la reivindicación 11, en el que la saponificación comprende la adición de NaOH o KOH a la composición que comprende escualeno.

13. Un procedimiento para preparar una composición de vacuna, que comprende preparar una emulsión según cualquier reivindicación precedente y combinar la emulsión con un antígeno.

14. Un procedimiento para preparar un kit de vacuna, que comprende preparar una emulsión según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 y envasar la emulsión en un kit como un componente de kit junto con un componente de antígeno.

15. El procedimiento de la reivindicación 14, en el que los componentes del kit están en viales separados.

16. El procedimiento de la reivindicación 15, en el que los viales están hechos de vidrio de borosilicato.

17. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 16, en el que el antígeno es un antígeno del virus de la gripe.

18. El procedimiento de la reivindicación 17, en el que la combinación de la emulsión y el antígeno forma una composición de vacuna y en el que la composición de vacuna incluye 15 μg, 10 μg, 7, 5 μg, 5 μg, 3, 8 μg, 3, 75 μg, 1, 9 μg o 1, 5 μg de hemaglutinina por cepa del virus de la gripe.

19. El procedimiento de la reivindicación 17 o la reivindicación 18, en el que la combinación de la emulsión y el antígeno forma una composición de vacuna y en el que la composición de vacuna incluye un conservante de

tiomersal o 2-fenoxietanol.

20. Una emulsión de aceite en agua obtenida mediante el procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1

19.