Molécula de adhesión a las células T y anticuerpo contra la molécula.

Un anticuerpo contra una proteína de membrana o secretora seleccionada de las siguientes (ix),

(x), (xi) y (xii)o un fragmento funcional de la misma:

(ix) una proteína de membrana o secretora que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2,SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12;

(x) una proteína de membrana o secretora que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2,SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12 en la cual uno o más aminoácidosestán insertados, sustituidos o delecionados, o uno o más aminoácidos se añaden a uno o los dos extremos, y quees funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12;

(xi) una proteína de membrana o secretora que es codificada por un polinucleótido que se hibrida encondiciones severas a un polinucleótido que codifica la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4,SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12, y que es funcionalmente equivalente a unaproteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12; y

(xii) una proteína de membrana o secretora que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene 70% omás de identidad con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8,SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12, y que es funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuenciade aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12;para uso en el tratamiento de una enfermedad autoinmune.

Molécula de adhesión a las células T y anticuerpo contra la molécula.

Campo Técnico Una molécula de adhesión a las células T se expresa en células dendríticas derivadas de médula ósea por un gen de la misma, y un ligando para la molécula de adhesión (receptor) se expresa en células T por un gen de la misma. La presente invención se refiere a un anticuerpo contra la molécula de adhesión o el ligando y un uso del mismo. Ademáes, la presente invención se refiere también a un método de cribado que utiliza la molécula de adhesión.

Técnica Anterior

En los últimos años, se ha publicado que una molécula clonada como activador de las células dendríticas que se expresa en las células T es una citoquina importante para regulación de la diferenciación de los osteoclastos (Yasuda, H., et al. (1998) Proc Natl Acad Sci USA 95:3597-3602) . De este modo, se ha esclarecido que un sistema inmune está asociado estrechamente con el metabolismo óseo.

Los estudios en la regulación del metabolismo óseo por moléculas reguladoras del sistema inmune han progresado rápidamente, y se ha esclarecido también la transducción de señales asociada con la regulación de la diferenciación de los osteoclastos.

Por ejemplo, como una molécula implicada en la diferenciación de los osteoclastos, se ha dado a conocer Oscar (receptor asociado a los osteoclastos) . Se ha publicado también hasta la fecha que Oscar es un receptor semejante a inmunoglobulina, que está asociado con la cadena FcRγ y transmite una señal a la fosfolipasa Cγ por la vía de un motivo ITAM de la cadena FcRγ (Kim, N., et al. (2002) J Exp Med 195:201-209) .

Adicionalmente, diversas interacciones tales como CD80-CD28, CD40-CD40L o ICAM1-LFA1 han sido consignadas para moléculas que se expresan en células dendríticas y se adhieren a una célula T de tal modo que se implican en una interacción concerniente a una respuesta inmune entre células T y células dendríticas.

Sumario de la Invención Los autores de la presente invención han identificado un gen que se expresa específicamente en células dendríticas derivadas de la médula ósea por un método de sustracción. Asimismo, los inventores han encontrado que una proteína codificada por el gen arriba mencionado se fija a la cadena FcRγ constituyendo el receptor IgE, que la expresión de la proteína arriba mencionada se intensifica por estímulo con LPS, que las células dendríticas se activan por estímulo de reticulación de anticuerpos a la proteína arriba mencionada, que la proteína arriba mencionada tiene una función de adherencia a una célula T, y que un anticuerpo contra la proteína arriba mencionada tiene un efecto terapéutico en un modelo de artritis inducida por colágeno que es un modelo de la enfermedad artritis reumatoide. Los inventores han identificado además un gen de un ligando para la proteína arriba mencionada, que se expresa en las células T. La presente invención está basada en estos descubrimientos.

Una proteína de membrana o secretora comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4,

SEQ ID NO: 6 o SEQ ID NO: 8, o una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6 o SEQ ID NO: 8 que contiene una o más sustituciones conservadoras (a la que se hace referencia en lo sucesivo como una primera proteína) .

Una proteína de membrana o secretora adicional se selecciona de las (i) , (ii) , (iii) y (iv) siguientes (a la que se hace referencia en lo sucesivo como una segunda proteína) :

(i) una proteína de membrana o secretora que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10;

(ii) una proteína de membrana o secretora que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10 en la cual uno o más aminoácidos están insertados, sustituidos o delecionados, o uno o más aminoácidos se añaden a uno o ambos extremos, y que es funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10;

(iii) una proteína de membrana o secretora que es codificada por un polinucleótido que se hibrida en condiciones severas a un polinucleótido que codifica la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10, y que es funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10; y

(iv) una proteína de membrana o secretora que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene 90% o más de identidad con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10, y que es funcionalmente equivalente a una proteína 50 constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10.

Un polinucleótido codifica las nuevas proteínas de las realizaciones primera y segunda de acuerdo con la presente invención. 2

El polinucleótido se selecciona de los (v) , (vi) , (vii) y (viii) siguientes:

(v) un polinucleótido que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 9;

(vi) un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 9 en la cual uno o más nucleótidos están insertados, sustituidos o delecionados, o uno o más nucleótidos se añaden a uno o ambos

extremos, y que codifica una proteína de membrana o secretora funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10;

(vii) un polinucleótido que se hibrida en condiciones severas con un polinucleótido que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 9, y que codifica una proteína de membrana o secretora funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10; y

(viii) un polinucleótido que tiene 90% o más de identidad con un polinucleótido que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 9, y que codifica una proteína de membrana o secretora funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10.

La presente invención proporciona un anticuerpo contra una proteína de membrana o secretora seleccionada de las siguientes (ix) , (x) , (xi) y (xii) (a la que se hace referencia ocasionalmente en lo sucesivo como una proteína TARM

(Receptor de Activación interactivo con las células T en células Mieloides) ) , y un fragmento funcional de la misma (al que se hace referencia en lo sucesivo como un anticuerpo de una primera realización de acuerdo con la presente invención) :

(ix) una proteína de membrana o secretora que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12;

(x) una proteína de membrana o secretora que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12 en la cual uno o más aminoácidos están insertados, sustituidos o delecionados, o uno o más aminoácidos se añaden a uno o los dos extremos, y que es funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12;

(xi) una proteína de membrana o secretora que es codificada por un polinucleótido que se hibrida en condiciones severas a un polinucleótido que codifica la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12, y que es funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12; y

(xii) una proteína de membrana o secretora que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene 70% o más de identidad con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12, y que es funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12;

para uso en el tratamiento de una enfermedad autoinmune.

Una proteína ligando que es un ligando para la proteína de acuerdo con la presente invención, se selecciona de las siguientes (xiii) , (xiv) , (xv) y (xvi) (a la que se hace referencia ocasionalmente en lo sucesivo como una proteína ligando o una proteína TARM-L (ligando TARM) ) ;

(xiii) una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 o SEQ ID NO: 16;

(xiv) una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 o SEQ ID NO: 16 en la cual

uno o más aminoácidos están insertados, sustituidos o delecionados, o uno o más aminoácidos se añaden a uno o a los... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo contra una proteína de membrana o secretora seleccionada de las siguientes (ix) , (x) , (xi) y (xii)

o un fragmento funcional de la misma:

(ix) una proteína de membrana o secretora que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, 5 SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12;

(x) una proteína de membrana o secretora que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12 en la cual uno o más aminoácidos están insertados, sustituidos o delecionados, o uno o más aminoácidos se añaden a uno o los dos extremos, y que es funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ

ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12;

(xi) una proteína de membrana o secretora que es codificada por un polinucleótido que se hibrida en condiciones severas a un polinucleótido que codifica la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12, y que es funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO:

8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12; y

(xii) una proteína de membrana o secretora que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene 70% o más de identidad con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12, y que es funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12;

para uso en el tratamiento de una enfermedad autoinmune.

2. El anticuerpo o un fragmento funcional del mismo para uso de acuerdo con la reivindicación 1, que es un anticuerpo contra una proteína de membrana o proteína secretora seleccionada de las siguientes (i) , (ii) , (iii) y (iv) , o un fragmento funcional del mismo:

(i) una proteína de membrana o secretora que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10;

(ii) una proteína de membrana o secretora que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10 en la cual uno o más aminoácidos están insertados, sustituidos o delecionados, o uno o más aminoácidos se añaden a uno o ambos extremos, y que es funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10;

(iii) una proteína de membrana o secretora que es codificada por un polinucleótido que se hibrida en condiciones severas a un polinucleótido que codifica la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10, y que es funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10; y

(iv) una proteína de membrana o secretora que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene 90% o más de identidad con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10, y que es funcionalmente equivalente a una 35 proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10.

3. El anticuerpo o un fragmento funcional del mismo para uso de acuerdo con la reivindicación 2, que es un anticuerpo contra una proteína de membrana o secretora que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10, o una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10 que contiene una o más sustituciones conservadoras, o un fragmento funcional de la misma.

4. El anticuerpo o un fragmento funcional del mismo para uso de acuerdo con la reivindicación 1, que es un anticuerpo contra una proteína de membrana o secretora seleccionada de las siguientes (ix') , (x') , (xi') y (xii') , o un fragmento funcional de la misma:

(ix') una proteína de membrana o secretora que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12;

(x') una de proteína de membrana o secretora que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:

12 en la cual uno o más aminoácidos están insertados, sustituidos o delecionados, o uno o más aminoácidos están añadidos a uno o ambos extremos, y que es funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12;

(xi') una de proteína de membrana o secretora que está codificada por un polinucleótido que se hibrida en condiciones severas a un polinucleótido que codifica la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12, y que es 50 funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12; y

(xii') una de proteína de membrana o secretora que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene 70%

o más de identidad con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12, y que es funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12.

5. El anticuerpo o un fragmento funcional del mi0smo para uso de acuerdo con la reivindicación 4, que es un anticuerpo contra una proteína de membrana o secretora que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12, o una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 que contiene una o más sustituciones conservadoras, o un fragmento funcional de la misma.

6. El anticuerpo o un fragmento funcional del mismo para uso de acuerdo con la reivindicación 5, que es producido por un hibridoma depositado bajo el No. de acceso FERM BP-10376.

7. El anticuerpo o un fragmento funcional del mismo para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el fragmento es para uso en el tratamiento de la artritis reumatoide.

8. Un hibridoma depositado bajo el No. de acceso FERM BP-10376.

9. Un anticuerpo contra una proteína seleccionada de las siguientes (xiii) , (xiv) , (xv) y (xvi) , o un fragmento funcional del mismo:

(xiii) una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 o SEQ ID NO: 16;

(xiv) una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 o SEQ ID NO: 16, en la cual uno o más aminoácidos están insertados, sustituidos o delecionados, o uno o más aminoácidos se añaden a uno o ambos extremos, y que es funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 o SEQ ID NO: 16;

(xv) una proteína que está codificada por un polinucleótido que se hibrida en condiciones severas a un polinucleótido que codifica la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14, o SEQ ID NO: 16, y que es funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 o SEQ ID

NO: 16; y

(xvi) una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene 70% o más de identidad con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 o SEQ ID NO: 16, y que es funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 o SEQ ID NO: 16.

10. El anticuerpo o fragmento funcional del mismo de acuerdo con la reivindicación 9, para uso en el tratamiento 25 de enfermedades autoinmunes.

11. El anticuerpo o fragmento funcional del mismo para uso de acuerdo con la reivindicación 10, para utilización en el tratamiento de la artritis reumatoide.

12. Un método para cribado de una sustancia que inhibe la activación de una célula dendrítica o una sal de la misma, o un solvato de la misma, que comprende los pasos de:

(d) poner en contacto un anticuerpo o un fragmento funcional del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 con una célula dendrítica en presencia o ausencia de una sustancia de test; y

(e) medir el nivel de activación de dicha célula dendrítica.

13. Un método de cribado de acuerdo con la reivindicación 12, en donde, en el paso (e) , el nivel de activación de dicha célula dendrítica se mide utilizando como índice la cantidad de IL-6 y/o MCP-1 producida por la célula 35 dendrítica.

14. El método de cribado de acuerdo con la reivindicación 13, que comprende adicionalmente el paso de (f-1) comparar la cantidad de IL-6 y/o MCP-1 producida en presencia de una sustancia de test con la cantidad de IL-6 y/o MCP-1 producida en ausencia de una sustancia de test, después del paso (e) .

15. El método de cribado de acuerdo con la reivindicación 12, en donde, en el paso (e) , el nivel de activación de 40 una célula dendrítica se mide utilizando como índice el nivel de expresión de la cadena FcRγ en la célula dendrítica.

16. El método de cribado de acuerdo con la reivindicación 15, que comprende adicionalmente el paso de (f-2) comparar el nivel de expresión de la cadena FcRγ en presencia de una sustancia de test con el nivel de expresión de la cadena FcRγ en ausencia de una sustancia de test, después del paso (e) .

17. Un método de cribado de una sustancia que inhibe una formación de complejo entre una proteína TARM y la 45 cadena FcRγ o una sal de la misma, o un solvato de la misma, que comprende los pasos de:

(g) poner en contacto un anticuerpo o un fragmento funcional del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 con una célula dendrítica en presencia o ausencia de una sustancia de test; y

(h) medir el nivel de expresión de la cadena FcRγ en dicha célula dendrítica,

en donde dicha proteína TARM es una proteína de membrana o secretora seleccionada de las siguientes (ix) , (x) , (xi) y (xii) :

(ix) una proteína de membrana o secretora que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12;

(x) una proteína de membrana o secretora que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12; en la cual uno o más aminoácidos están insertados, sustituidos o delecionados, o uno o más aminoácidos están añadidos uno o ambos extremos, y que es funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12;

(xi) una proteína de membrana o secretora que es codificada por un polinucleótidos que se hibrida en condiciones severas a un polinucleótido que codifica la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12, y que es funcionalmente equivalente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12; y

(xii) una proteína de membrana o secretora que una secuencia de aminoácidos que tiene 70% o más de identidad con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12; y que es funcionalmente equivalente a una proteína consistente en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 12.

18. El método de cribado de acuerdo con la reivindicación 17, que comprende adicionalmente el paso de (i)

comparar el nivel de expresión de la cadena FcRγ en presencia de una sustancia de test con el nivel de expresión de la cadena FcRγ en ausencia de una sustancia de test, después del paso (h) .