Moduladores de receptores de olores.

Un procedimiento para identificar un ligando del receptor de olor,

que comprende:

a) proporcionar

i) una línea celular, en la que dicha línea celular expresa RTP1, RTP1-A1, RTP1-D3 o RTP2, en la que

- RTP1 es el polipéptido de la SEC ID Nº 33 o 37,

- RTP1-A1 es el polipéptido de la SEC ID Nº 46 o 47,

- RTP1-D3 es el polipéptido de la SEC ID Nº 50, y

- RTP2 es el polipéptido de la SEC ID Nº 34 o 38, y dicha línea celular comprende un receptor de olor y un agente informador, y

ii) un compuesto de ensayo;

b) exponer dicho compuesto de ensayo a dicha línea celular; y medir la actividad de dicho agente informador.

Moduladores de receptores de olores La presente solicitud reivindica prioridad sobre la solicitud provisional de EE.UU. con numero de serie 60/581.087; presentada el 18 de junio de 2004 y la solicitud provisional de EE.UU. con numero de serie 60/582.011 presentada el 22 de junio de 2004.

La presente invencion se realizo con soporte del gobierno con la subvencion n° DC05782, otorgada por el National Institutes of Health.

Campo de la invención La presente invencion se define en las reivindicaciones y refiere a polipeptidos capaces de estmular la localizacion en la superficie celular del receptor de olores y la expresion funcional del receptor de olores. La presente invencion proporciona ademas ensayos para la deteccion de ligandos especificos de varios receptores de olores. Adicionalmente, la presente invencion se refiere a procedimientos de deteccion selectiva de polimorfismos de proteinas auxiliares del receptor de olores y a mutaciones asociadas con estados de enfermedad, asi como a procedimientos de deteccion selectiva de agentes terapeuticos, ligandos y moduladores de dichas proteinas.

Antecedentes de la invención La disfuncion olfatoria surge por diversas causas e influye profundamente sobre la calidad de vida de los pacientes. Aproximadamente 2 millones de estadounidenses experimentan algun tipo de disfuncion olfatoria. En los estudios se muestran que la disfuncion olfatoria afecta a al menos 1 % de la poblacion de menores de 65 aros de edad y muy por encima del 50 % de la poblacion de mayores de 65 aros de edad. El sentido del olfato determina el sabor de los alimentos y las bebidas y sirve como sistema de advertencia temprano para la deteccion de riesgos ambientales, tales como alimentos podridos, fugas de gas natural, humo o contaminantes aereos. Las perdidas o distorsiones del sentido del olfato pueden afectar de forma adversa a la preferencia por alimentos, la ingesta de alimentos y el apetito.

Los trastornos del olfato se clasifican del siguiente modo: 1) anosmia: Incapacidad para detectar sensaciones olfatorias cualitativas (p. ej., ausencia de la funcion olfatoria) , 2) anosmia parcial: capacidad para percibir algunos, pero no todos, los olores, 3) hiposmia o microsmia: disminucion de la sensibilidad a los olores, 4) hiperosmia: funcion olfatoria anormalmente aguda, 5) disosmia (cacosmia o parosmia) : percepcion olfatoria o estimulacion olorosa distorsionada o alterada o distorsionada, 6) fantosmia: sensacion disosmica percibida en ausencia de un estimulo del olor (antes conocida como alucinacion olfatoria) y 7) agnosia olfatoria: incapacidad para reconocer una sensacion olorosa.

La disfuncion olfatoria se clasifica ademas como 1) alteraciones en la conduccion o transporte por obstruccion de las fosas nasales (p. ej., inflamacion nasal cronica, poliposis etc.) , 2) alteraciones neurosensoriales por daros en el neuroepitelio (p. ej., infeccion viral, toxinas aereas etc.) , 3) alteracion neural olfatoria central por daros en el sistema nervioso central (p. ej., tumores, masas impactadas en el pedunculo olfativo, trastornos neurodegenerativos etc.) . Estas categorias no son mutuamente excluyentes. Por ejemplo, los virus pueden producir daros en el neuroepitelio olfatorio y tambien se pueden transportar al sistema nervioso central a traves del nervio olfativo causando daros en los elementos centrales del sistema olfatorio.

Las neuronas del epitelio olfativo, las neuronas sensoriales olfativas (en lo sucesivo en el presente documento quot;neuronas olfativasquot; determinan inicialmente las capacidades para oler. En las neuronas olfativas, las proteinas del receptor del olor (en lo sucesivo en el presente documento quot;ORquot;) , miembros de la superfamilia de receptores acoplados a proteina G (en lo sucesivo en el presente documento quot;GPCRquot;) , se sintetizan en el reticulo endoplasmico, se transportan y, en ultima instancia, se concentran en la membrana de la superficie celular de los cilios en la punta de la dendrita. Considerando que los OR desemperan papeles en el reconocimiento de objetivos de los axones olfativos en desarrollo, las proteinas OR tambien estan presentes en los terminales axonicos (vease, por ejemplo, Mombaerts, P., (1996) Cell 87, 675-686; Wang, F., y col. (1998) Cell 93, 47-60. En roedores, los olores se transmiten mediante tantos como 1.000 OR diferentes codificados por una familia multigenica (vease, por ejemplo, Axel, R. (1995) Sci Am 1273, 154-159; Buck, L., y Axel, R. (1991) Cell 65, 175-187; Firestein, S. (2001) Nature 413, 211-218; Mombaerts, P. (1999) Annu Rev Neurosci 22, 487-509; Young, J. M., y col., (2002) Hum Mol Genet 11, 535-546 ; Zhang, X., y Firestein, S. (2002) Nat Neurosci 5, 124-133. Cada neurona olfativa expresa solo un tipo de OR, sentando la base celular de discriminacion de olores por las neuronas olfativas (vease, por ejemplo, Lewcock, J. W., y Reed, R. R. (2004) Proc Natl Acad Sci U S A; Malnic, B., y col., (1999) Cell 96, 713-723; Serizawa, S., y col., (2003) Science 302, 2088-2094.

Lo que se necesita es una mejor comprension del sentido del olfato. Lo que se necesita tambien es una mejor comprension de la funcion de los receptores del olfato.

La invencion se expone en las reivindicaciones adjuntas. Las realizaciones de la descripcion que no entran dentro del alcance de dichas reivindicaciones se proporcionan solamente con fines ilustrativas y no forman parte de la presente invencion.

Sumario de la invención La presente invencion se define en las reivindicaciones y refiere a polipeptidos capaces de estimular la localizacion en la superficie celular del receptor de olores y la expresion funcional del receptor de olores. La presente invencion proporciona ademas ensayos para la deteccion de ligandos especificos de varios receptores de olores. Adicionalmente, la presente invencion se refiere a procedimientos de deteccion selectiva de polimorfismos de proteinas auxiliares del receptor de olores y a mutaciones asociadas con estados de enfermedad, asi como a procedimientos de deteccion selectiva de agentes terapeuticos, ligandos y moduladores de dichas proteinas.

En realizaciones preferidas, la presente invencion proporciona un procedimiento para identificar un ligando del receptor de olores, que comprende las etapas de a) proporcionar i) una linea celular que comprende un receptor de olores y un agente informador, y ii) un compuesto de ensayo; b) exponer el compuesto de ensayo a la linea celular; y c) medir la actividad del agente informador en el que la linea celular expresa RTP1, RTP1-A1, RTP1-D3, o RTP2 como se define en la reivindicacion 1. En algunas realizaciones, la linea celular es una linea celular heterologa o una linea celular natural. En algunas realizaciones, la linea celular es una linea celular 293T. En realizaciones preferidas, el receptor de olores es un receptor de olores humanos. En otras realizaciones preferidas, el compuesto de ensayo es una molecula odoriferas. En otras realizaciones mas, el agente informador esta regulado por un elemento respondedor al AMPc. En realizaciones preferidas, la linea celular comprende ademas Gaolf. En otras realizaciones, el receptor de olor es un receptor de olor murino. En otras realizaciones, el receptor de olor es un receptor de olor sintetico. En realizaciones preferidas, el receptor de olor comprende S6/79, S 18, S46, S50, MOR23-1, MOR31-4, MOR31-6, MOR32-5 y/o MOR32-11. En otras realizaciones, el agente informador es un agente de iluminacion. En otras realizaciones mas, el agente de iluminacion es la luciferaza. En realizaciones alternativas, el procedimiento comprende ademas la etapa de detectar la presencia o ausencia de un ligando del receptor de olor basandose en la actividad del agente informador.

En realizaciones preferidas, la presente invencion proporciona una linea celular que expresa un receptor de olor, en la que la expresion se localiza en la superficie celular. En realizaciones preferidas, la linea celular comprende un gen heterologo, como se define en la reivindicacion10. En otras realizaciones preferidas, la linea celular es una la linea celular 293T. En otras realizaciones, el receptor de olor es un receptor de olor humano. En realizaciones preferidas, el receptor de olores esta marcado con un agente informador. En algunas realizaciones, el agente informador es un agente informador de iluminacion. En algunas realizaciones, el agente informador de iluminacion comprende glutation-S-transferasa (GST) , c-myc, 6-histidina (6X-His) , proteina fluorescente verde (GFP) , proteina de union a la maltosa (MBP) , hemaglutinina del virus de la gripe A (HA) , º-galactosidasa o GAL4. En realizaciones preferidas, la linea celular comprende ademas expresion de Gaolf. En realizaciones preferidas, el receptor de olor es un receptor de olor murino. En algunas realizaciones, el receptor de olor es un receptor... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para identificar un ligando del receptor de olor, que comprende: a) proporcionar

i) una linea celular, en la que dicha linea celular expresa RTP1, RTP1-A1, RTP1-D3 o RTP2, en la que

- RTP1 es el polipeptido de la SEC ID N° 33 o 37,

- RTP1-A1 es el polipeptido de la SEC ID N° 46 o 47,

- RTP1-D3 es el polipeptido de la SEC ID N° 50, y

-RTP2 es el polipeptido de la SEC ID N° 34 o 38, y dicha linea celular comprende un receptor de olor y un agente informador, y

ii) un compuesto de ensayo;

b) exponer dicho compuesto de ensayo a dicha linea celular; y medir la actividad de dicho agente informador.

2. El procedimiento de la reivindicacion 1, en el que dicha linea celular es una linea celular HEK 293T.

3. El procedimiento de la reivindicacion 1, en el que dicho receptor de olor se selecciona del grupo que consiste en:

- un receptor de olor humano,

- un receptor de olor murino, y

- un receptor de olor sintetico.

4. El procedimiento de la reivindicacion 1, en el que dicho compuesto de ensayo es una molecula odorifera.

5. El procedimiento de la reivindicacion 1, en el que dicho agente informador esta regulado por un elemento respondedor al AMPc.

6. El procedimiento de la reivindicacion 1, en el que dicha linea celular comprende ademas Gaolf.

7. El procedimiento de la reivindicacion 1, en el que dicho receptor de olor comprende S6/79, S18, S46, S50, MOR23-1, MOR31-4, MOR31-6, MOR32-5 y/o MOR32-11.

8. El procedimiento de la reivindicacion 1, en el que dicho agente informador es un agente de iluminacion y en el que dicho agente de iluminacion es, preferentemente, luciferasa.

9. El procedimiento de la reivindicacion 1, que comprende ademas la etapa de d) detectar la presencia o la ausencia de un ligando del receptor de olor basandose en la actividad de dicho agente informador.

10. Una linea celular que comprende expresar un receptor de olor, en la que

- dicha expresion se localiza en la superficie celular y

- dicha linea celular comprende un gen heterologo, en la que dicho gen heterologo comprende uno o mas de RTP1, RTP1-A1, RTP1-D3 y RTP2, y en la que

- RTP1 es el polipeptido de la SEC ID N° 33 o 37,

- RTP1-A1 es el polipeptido de la SEC ID N° 46 o 47,

- RTP1-D3 es el polipeptido de la SEC ID N° 50, y

- RTP2 es el polipeptido de la SEC ID N° 34 o 38.

11. La linea celular de la reivindicacion 10, en donde dicha linea celular es una linea celular HEK 293T.

12. La linea celular de la reivindicacion 10, en la que dicho receptor de olor se selecciona del grupo que consiste

en:

- un receptor de olor humano,

- un receptor de olor murino, y

- un receptor de olor sintetico.

13. La linea celular de la reivindicacion 11, en la que dicho receptor de olor esta marcado con un agente informador, en donde dicho agente informador es, preferentemente, un agente informador de iluminacion y en el donde agente informador de iluminacion comprende ademas, prefererentemente, glutation-S-transferasa (GST) , c-myc, 6-histidina (6X-His) , proteina fluorescente verde (GFP) , proteina de union a la maltosa (MBP) , hemaglutinina del virus de la gripe A (HA) , º-galactosidasa o GAL4.

14. La linea celular de la reivindicacion 10, en donde dicha linea celular comprende ademas expresion de Gaolf.

15. La linea celular de la reivindicacion 10, en la que dicho receptor de olor comprende S6/79, S18, S46, S50, MOR23-1, MOR31-4, MOR31-6, MOR32-5 y MOR32-11.

4. Cromanona