Método para la detección de actividad IL-16 y modulación de actividad IL-16 en base a niveles RANTES proxy.

Un procedimiento de detección de la actividad biológica de la IL - 16 en una muestra que comprende las siguientes etapas:

a) proporcionar una primera población de células eucariotas que rodean el medio y receptivas a la actividad biológica de la IL - 16 con una primera muestra de ensayo;

b) proporcionar una segunda población de células eucariotas que rodean el medio y receptivas a la actividad biológica de la IL - 16 con una muestra de control negativo;

c) medir la cantidad de un proxy de RANTES producido por las primeras y segundas poblaciones de células eucariotas; y

d) comparar la cantidad del proxy de RANTES producido por las primeras y segundas poblaciones de células eucariotas, en las que una cantidad más pequeña de proxy de RANTES producido por una primera población de células eucariotas en relación al nivel de proxy de RANTES producido por una segunda población de células eucariotas indica la detección de la actividad biológica de la IL - 16 en una muestra de ensayo,

en el que el proxy de RANTES es una cadena peptídica con al menos un 75 % de identidad en los residuos de los aminoácidos 1 a 68 de la SEC ID Nº 4 o un ácido nucleico que codifica una cadena peptídica con al menos un 75 % de identidad en los residuos de los aminoácidos 1 a 68 de la SEC ID Nº 4.

Método para la detección de actividad IL-16 y modulación de actividad IL-16 en base a niveles RANTES proxy

Campo de la Invención La presente invención se refiere a un procedimiento para la detección de la actividad biológica de la IL-16 y la detección de la modulación de la actividad biológica de la IL-16. Además, la presente invención se dirige a un procedimiento de diagnóstico de la presencia de y / o la susceptibilidad a un trastorno relacionado a la IL-16.

Antecedente de la Invención La interleucina – 16 (IL – 16; SEC ID Nº 3) , es una citocina proinflamatoria que induce la quimiotaxis positiva de los linfocitos T, monocitos, eosinófilos y las células dendríticas (67 J. Leukocyte Biol. 757 (2000) ) . Los monómeros de cadena peptídica de la IL – 16 están formados por la caspasa – 3 mediada por el procesamiento proteolítico de una molécula precursora de 14 kDa más grande (273 J. Biol. Chem. 1144 (1998) ) . Los monómeros de la IL – 16 forman complejos de cadena peptídica tetramérica. Se cree que estos complejos tetraméricos de la IL – 16 son la forma bioactiva de la IL – 16 (67 J. Leukocyte Biol. 757 (2000) ) . Las células eucariotas que producen la IL – 16 incluyen células que expresan CD4 o CD8, como las células T, mastocitos, eosinófilos, células dendríticas, células epiteliales, fibroblastos y células del cerebelo (67 J. Leukocyte Biol. 757 (2000) ) . Las células eucariotas receptivas a la expresión de la IL – 16 expresan las cadenas de peptídicas de CD4 y CD9 pero la respuesta a la IL – 16 puede ser independiente de estas cadenas peptídicas (véase, por ejemplo, 164 J. Inmunol. 4429 (2000) ) .

Se ha informado que la IL – 16 desempeña un importante papel en enfermedades como el asma, la dermatitis atópica y la artritis reumatoide, entre otras (véase, por ejemplo, 162 Am. J. Respir. Crit. Care Med. 105 (2000) ; 109 J. Allergy Clin. Inmunol. 681 (2002) ; 31 J. Rheumatol. 35 (2004) . Por ejemplo, se ha demostrado que la IL – 16 en pacientes humanos es responsable de atraer a las células que inducen asma en los pulmones y desempeña un importante papel en el desencadenamiento de las respuestas asmáticas en los pacientes. (162 Am. J. Respir. Crit. Care Med. 105 (2000) ) . Claramente, la capacidad para detectar e identificar moléculas que activan o inhiben la IL – 16 es crítica para el desarrollo de tratamientos eficaces para la enfermedades mediatas de la IL – 16.

El nivel de la IL – 16 se redujo en las células transfectadas con HIV – 1 si se compara con las células transfectadas sin virus que contienen una solución (113 Virus Research 26 (20005) ) . La patente US6936426 describe un procedimiento de diagnóstico de las enfermedades inflamatorias autoinmunes como las patologías de tejido conectivo asociado a la enfermedad de Graves.

Por lo tanto, existe una necesidad de nuevos procedimientos para la detección de la actividad biológica de la IL – 16, activadores de la actividad biológica de la IL – 16 e inhibidores de la actividad biológica de la IL – 16.

Breve Descripción de la Figuras La Figura 1 es una gráfica que muestra que la actividad biológica de la IL – 16 disminuye la secreción de la citocina RANTES por células mononucleares de sangre periférica (CMSP) en relación a los controles.

La Figura 2 es una gráfica que muestra que la actividad biológica de la IL – 16 disminuye la secreción de la citocina RANTES por las células Hut – 78 en relación a los controles.

La Figura 3 es una gráfica que muestra que los inhibidores de la actividad biológica de la IL – 16 incrementa la secreción de la citocina RANTES por CMSP en relación a los controles.

Resumen de la Invención Un aspecto de la presente invención es un procedimiento de detección de la actividad biológica de la IL – 16 en una muestra que comprende las etapas para proporcionar una primera población de células eucariotas que rodean los medios y receptivas a la actividad biológica de la IL – 16 con una primera muestra de ensayo; proporcionar una segunda población de células eucariotas rodean los medios y receptivas a la actividad biológica de la IL – 16 con una muestra de control negativa; medir la cantidad de un proxy de RANTES producido por las primeras y segundas poblaciones de células eucariotas por la que una cantidad más pequeña de un proxy de RANTES producido por la primera población de las células eucariotas relativa al nivel de proxy de RANTES producido por una segunda población de células eucariotas indica la detección de la actividad biológica de la IL – 16 en una muestra de ensayo. en la que el proxy de RANTES es una cadena peptídica con al menos el 75% de identidad con los residuos de aminoácidos 1 a 68 de la SEC ID Nº 4 o un ácido nucleico que codifica una cadena peptídica con al menos el 75% de identidad con los residuos de aminoácidos 1 a 68 de la SEC ID Nº 4.

Otro aspecto de la presente invención es un procedimiento para detectar una molécula que incrementa la actividad biológica de la IL – 16 en una muestra que comprende las etapas para proporcionar una primera población de células eucariotas que rodean los medios y receptivas a la actividad biológica de la IL – 16 con una primera muestra de ensayo; proporcionar una segunda población de células eucariotas que rodean los medios y receptivas a la actividad biológica de la IL – 16 con una muestra de control positiva que mantiene biológicamente activa a la IL – 16; medir la cantidad de un proxy de RANTES producido por las primeras y segundas poblaciones de las células eucariotas y comparar la cantidad de un proxy de RANTES producido por las primeras y segundas poblaciones de las células eucariotas mediante las cuales una cantidad menor de un proxy deRANTES producido por una primera población de células eucariotas en relación al nivel de proxy de RANTES producido por la segunda población de células eucariotas indica la presencia de una molécula que incrementa la actividad biológica de la IL – 16 en una muestra de ensayo, en la que el proxy de RANTES es una cadena peptídica con al menos el 75 % de identidad con los residuos de aminoácidos 1 a 68 de la SEC ID Nº 4 o un ácido nucleico que codifica una cadena peptídica con al menos el 75 % de identidad con los residuos de aminoácidos 1 a 68 de la SEC ID Nº 4.

Un procedimiento para detectar una molécula que disminuya la actividad biológica de la IL – 16 en una muestra que comprende las etapas para proporcionar una primera población de células eucariotas que rodean los medios y receptivas a la actividad biológica de la IL – 16 con una primera muestra de ensayo; proporcionar una segunda población de células eucariotas que rodean los medios y receptivas a la actividad biológica de la IL – 16 con una muestra de control positiva que mantiene biológicamente activa a la IL – 16; medir la cantidad de un proxy de RANTES producido por las primeras y segundas poblaciones de las células eucariotas y comparar la cantidad de un proxy de RANTES producido por las primeras y segundas poblaciones de las células eucariotas mediante las cuales una cantidad mayor de un proxy de RANTES producido por una primera población de células eucariotas en relación al nivel de proxy de RANTES producido por la segunda población de células eucariotas indica la presencia de una molécula que disminuye la actividad biológica de la IL – 16 en una muestra de ensayo, en la que el proxy de RANTES es una cadena peptídica con al menos el 75 % de identidad con los residuos de aminoácidos 1 a 68 de la SEC ID Nº 4 o un ácido nucleico que codifica una cadena peptídica con al menos el 75 % de identidad con los residuos de aminoácidos 1 a 68 de la SEC ID Nº 4.

Otro aspecto de la presente invención es un procedimiento para diagnosticar la presencia de o la susceptibilidad a un trastorno relacionado con la IL – 16 en un sujeto que comprende las etapas para proporcionar una muestra a partir del sujeto de las células eucariotas; medir la cantidad de un proxy de RANTES producido por las muestras de las células eucariotas y comparar la cantidad de un proxy de RANTES producido por la muestra contra una referencia estándar; es decir; las células a partir de un sujeto que no tiene o es susceptible a un trastorno relacionado con la IL – 16 mediante las cuales una cantidad mayor de un proxy de RANTES producido por la muestra de sujeto en relación al nivel de proxy de RANTES producido en el estándar indica la presencia de o susceptibilidad de un trastorno relacionado con la IL – 16, en la que el proxy de RANTES es una cadena peptídica... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de detección de la actividad biológica de la IL – 16 en una muestra que comprende las siguientes etapas: a) proporcionar una primera población de células eucariotas que rodean el medio y receptivas a la actividad biológica de la IL – 16 con una primera muestra de ensayo; b) proporcionar una segunda población de células eucariotas que rodean el medio y receptivas a la actividad biológica de la IL – 16 con una muestra de control negativo; c) medir la cantidad de un proxy de RANTES producido por las primeras y segundas poblaciones de células eucariotas; y

d) comparar la cantidad del proxy de RANTES producido por las primeras y segundas poblaciones de células eucariotas, en las que una cantidad más pequeña de proxy de RANTES producido por una primera población de células eucariotas en relación al nivel de proxy de RANTES producido por una segunda población de células eucariotas indica la detección de la actividad biológica de la IL – 16 en una muestra de ensayo, en el que el proxy de RANTES es una cadena peptídica con al menos un 75 % de identidad en los residuos de los aminoácidos 1 a 68 de la SEC ID Nº 4 o un ácido nucleico que codifica una cadena peptídica con al menos un 75 % de identidad en los residuos de los aminoácidos 1 a 68 de la SEC ID Nº

4.

2. El procedimiento de la reivindicación 1 en el que las células eucariotas se seleccionan del grupo formado por las células mononucleares de sangre periférica, las células HuT – 78 y células THP – 1.

3. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2 en el que se proporciona una primera muestra de ensayo que produce una concentración de IL – 16 final en el medio rodeado por una primera población de células eucariotas que oscila entre 100 ng/ ml y 1.000 ng/ ml.

4. El procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 o 3 en el que el proxy de RANTES se secreta al medio.

5. Un procedimiento de detección de una molécula que incrementa la actividad biológica de la IL – 16 en una muestra que comprende las siguientes etapas:

a) proporcionar una primera población de células eucariotas que rodean el medio y receptivas a la actividad biológica de la IL – 16 con una primera muestra de ensayo;

b) proporcionar una segunda población de células eucariotas que rodean el medio y receptivas a la actividad biológica de la IL – 16 con una muestra de control positivo que contiene IL – 16 activa biológicamente; c) medir la cantidad de un proxy de RANTES producido por las primeras y segundas poblaciones de células

eucariotas; y

d) comparar la cantidad del proxy de RANTES producido por las primeras y segundas poblaciones de células eucariotas, en las que una cantidad más pequeña de proxy de RANTES producido por una primera población de células eucariotas en relación al nivel de proxy de RANTES producido por una segunda población de células eucariotas indica la presencia de una molécula que incrementa la actividad biológica de la IL – 16 en una muestra de ensayo, en el que el proxy de RANTES es una cadena peptídica con al menos un 75 % de identidad en los residuos de los aminoácidos 1 a 68 de la SEC ID Nº 4 o un ácido nucleico que codifica una cadena peptídica con al menos un 75 % de identidad en los residuos de los aminoácidos 1 a 68 de la SEC ID Nº 4.

6. El procedimiento de la reivindicación 5 en el que las células eucariotas se seleccionan del grupo formado por las células mononucleares de sangre periférica, las células HuT – 78 y células THP – 1.

7. El procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 5 o 6 en el que una primera muestra de ensayo comprende una molécula de anticuerpos.

8. El procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 5, 6 o 7 en el que el proxy de RANTES se secreta al medio.

9. Un procedimiento para detectar una moléculas que disminuye la actividad biológica de la IL – 16 en una muestra que comprende las siguientes etapas:

a) proporcionar una primera población de células eucariotas que rodean el medio y receptivas a la actividad biológica de la IL – 16 con una primera muestra de ensayo;

b) proporcionar una segunda población de células eucariotas que rodean el medio y receptivas a la actividad biológica de la IL – 16 con una muestra de control positivo que contiene IL – 16 activa biológicamente; c) medir la cantidad de un proxy de RANTES producido por las primeras y segundas poblaciones de células

eucariotas; y

d) comparar la cantidad del proxy de RANTES producido por las primeras y segundas poblaciones de células eucariotas, en las que una cantidad más grande de proxy de RANTES producido por una primera población de células eucariotas en relación al nivel de proxy de RANTES producido por una segunda población de células eucariotas indica la presencia de una molécula que disminuye la actividad biológica de la IL – 16 en una muestra de ensayo, en el que el proxy de RANTES es una cadena peptídica con al menos un 75 % de identidad en los residuos de los aminoácidos 1 a 68 de la SEC ID Nº 4 o un ácido nucleico que codifica una cadena peptídica con al menos un 75 % de identidad en los residuos de los aminoácidos 1 a 68 de la SEC ID Nº 4.

10. El procedimiento de la reivindicación 9 en el que las células eucariotas se seleccionan del grupo formado por las células mononucleares de sangre periférica, las células HuT – 78 y células THP – 1.

11. El procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 9 o 10 en el que una primera muestra de ensayo comprende una molécula de anticuerpos.

12. El procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 9, 10 u 11 en el que el proxy de RANTES se secreta al medio.

13. Un procedimiento in vitro para diagnosticar la presencia o la susceptibilidad de un trastorno relacionado a la IL – 16 en un sujeto, que comprende las siguientes etapas:

a) proporcionar una muestra de células eucariotas rodeadas del sujeto;

b) medir la cantidad de un proxy de RANTES producido por la muestra de células eucariotas; y

c) comparar la cantidad del proxy de RANTES producido por una muestra contra una referencia estándar, en la que una cantidad menor de proxy de RANTES producido por una muestra de sujeto en relación al nivel de proxy de RANTES producido en la referencia estándar indica la presencia o susceptibilidad de un trastorno relacionado a la IL – 16, en el que el proxy de RANTES es una cadena peptídica con al menos un 75 % de identidad en los residuos de los aminoácidos 1 a 68 de la SEC ID Nº 4 o un ácido nucleico que codifica una cadena peptídica con al menos un 75 % de identidad en los residuos de los aminoácidos 1 a 68 de la SEC ID Nº 4.

14. El procedimiento de la reivindicación 13 en el que las células eucariotas son células mononucleares de sangre periférica.

15. El procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 13 o 14 en el que la referencia estándar comprende células de un sujeto no susceptible a un trastorno relacionado a la IL – 16, células de un sujeto que no padece trastorno relacionado a la IL – 16 o células que no se caracterizan por el incremento de la IL – 16 o la actividad relacionada a la IL – 16.

16. El procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1-8 y 13-15 en el que una cantidad menor del proxy de RANTES producido por una primera población en relación a la segunda población es de al menos una disminución de 1, 5 veces.

17. El procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 9-12 en el que una cantidad mayor del proxy de RANTES producido por una primera población en relación a la segunda población es de al menos un incremento de 1, 5 veces.

18. El procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que las células eucariotas expresan una cadena peptídica CD4 o una cadena peptídica CD9.