Método para el cribado de compuestos que inhiben la expresión de UC41 en células de próstata.

Un método para determinar la capacidad de una sustancia candidata para inhibir la expresión de un gen UC41 correspondiente a una secuencia de cADN que comprende la secuencia de polinucleótidos expuesta en cualquiera de las SEQ.

ID. Nº 1, 3 o 4. El método se compone de los pasos de:

(a) proporcionar al menos una célula prostática de expresión de UC41;

(b) poner en contacto dicha célula prostática con la sustancia candidata;

(c) medir el nivel de expresión de UC41 en la mencionada célula prostática; y

(d) comparar el nivel de expresión de UC41 de la célula prostática medido en el paso (c) con el nivel de expresión de UC41 medido en una célula prostática en ausencia de la sustancia candidata.

Método para el cribado de compuestos que inhiben la expresión de UC41 en células de próstata 1.1 Campo de la invención La presente divulgación se refiere en general a nuevas secuencias de ácido nucleico, polipéptidos codificados por las nuevas secuencias de ácido nucleico y los anticuerpos específicos para estos polipéptidos, útiles como sondas o cebadores para el diagnóstico, pronóstico y tratamiento del cáncer de próstata y métodos relacionados. Más concretamente, la presente divulgación se refiere a sondas, cebadores y métodos útiles para el diagnóstico, la identificación y el control de la progresión del cáncer de próstata a través de mediciones de productos genéticos. La presente divulgación se refiere también a un nuevo gen específico de la próstata y a los métodos de tratamiento para el cáncer de próstata, basándose en las secuencias de polipéptidos y ácido nucleico divulgadas.

1.2 Descripción del campo relacionado La detección genética de estados patológicos en el ser humano es un campo que está avanzando rápidamente (Taparowsky el ai, 1982; Slamon et al , 1989; Sidransky et al, 1992; Miki et al., 1994; Dong et al, 1995; Morahan et al., 1996: Lifton, 1996; Barinaga, 1996) . No obstante, este enfoque plantea varios problemas. Una serie de lesiones genéticas conocidas simplemente predispone al desarrollo de estados patológicos específicos. Los individuos que presentan la lesión genética pueden no desarrollar el estado patológico, mientras que otros individuos pueden desarrollarlo sin presentar una lesión genética concreta. En los cánceres humanos, los defectos genéticos pueden presentarse en un gran número de genes supresores tumorales y protooncogenes conocidos.

La detección genética del cáncer tiene una larga historia. Una de las primeras lesiones genéticas que se ha demostrado que predispone al cáncer fueron las mutaciones puntuales de transformación de los oncogenes ras (Taparowsky et al , 1982) . Las mutaciones puntuales de transformación del ras se pueden detectar en las deposiciones de individuos con tumores colorrectales malignos y benignos (Sidransky et al., 1992) . No obstante, solamente el 50 % de estos tumores contenía una mutación del ras (Sidransky et al, 1992) . Resultados similares se han obtenido con la amplificación de HER-2/neu en el cáncer de mama y de ovario (Slamon et al„ 1989) , la deleción y mutación de p53 en el cáncer de vejiga (Sidransky et aL, 1991) , la deleción de DCC en el cáncer colorrectal (Fearon et aL, 1990) y la mutación de BRCA1 en el cáncer de mama y ovario (Miki et al., 1994) .

Ninguna de estas lesiones genéticas es capaz de predecir el cáncer en la mayoría de los individuos y casi siempre es necesario un muestreo directo de un tumor sospechado, lo que dificulta la detección.

Además, ninguno de los marcadores anteriormente descritos es capaz de distinguir entre las formas metastásicas y no metastásicas del cáncer. Para el tratamiento efectivo de los pacientes con cáncer, resulta fundamental identificar a los individuos cuyos tumores ya han experimentado metástasis o es probable que experimenten metástasis. Dado que el cáncer metastásico mata a 560.000 personas en los Estados Unidos cada año (página web de la ACS) , la identificación de marcadores para el cáncer de próstata metastásico supondría un importante avance.

En el caso del cáncer de próstata, su detección y diagnóstico plantea un particular problema. El carcinoma de próstata (PCA) es el cáncer diagnosticado más frecuentemente entre los hombres en los Estados Unidos (Veltri et al., 1996) . El cáncer de próstata fue diagnosticado en unos 189.000 hombres en 1998 y unos 40.000 hombres sucumbieron a la malignidad (Landis et al, 1998) . A pesar de que son relativamente pocos los tumores de próstata que progresan hasta alcanzar una importancia clínica durante la vida del paciente, aquellos de naturaleza progresiva es probable que hayan experimentado metástasis para el momento de su detección. Los índices de supervivencia de los individuos con cáncer de próstata metastásicos son bastante bajos. Entre estos extremos se encuentran los pacientes con tumores de próstata que experimentarán metástasis, pero todavía no lo han hecho, para los que la extirpación quirúrgica de la próstata es curativa. Resulta fundamental determinar a qué grupo pertenece un paciente para seleccionar el tratamiento óptimo y para la supervivencia del paciente.

La aprobación por parte de la FDA de la prueba del antígeno prostático específico (PSA) en suero en 1984 cambió la forma de tratamiento de la enfermedad prostática (Allhoff et al., 1989; Cooner et al 1990; Jacobson et al, 1995; Orozco et al, 1998) . El PSA se utiliza generalmente como biomarcador sérico para detectar y controlar la respuesta terapéutica en pacientes con cáncer de próstata (Badalament et al, 1996; O'Dowd et al, 1997) . Diversas modificaciones en los ensayos del PSA (Partin y Oesterling, 1994; Babian et al, 1996; Zlotta et al, 1997) han permitido un diagnóstico más temprano y la mejora del tratamiento.

A pesar de que el PSA se ha empleado ampliamente como marcador clínico del cáncer de próstata desde 1988 (Partin y Oesterling, 1994) , los programas de detección que utilizan PSA solamente o en combinación con el examen rectal digital (DRE) no han conseguido mejorar el índice de supervivencia de los hombres con cáncer de próstata (Partin y Oesterling, 1994) . A pesar de que el PSA es específico del tejido prostático, es producido por el epitelio prostático normal y benigno así como por el maligno, lo que resulta en un elevado índice de falsos positivos en la detección del cáncer de próstata (Partin y Oesterling, 1994) .

A pesar de resultar un indicador efectivo del cáncer de próstata cuando los niveles en suero son relativamente elevados, los niveles en suero de PSA son unos indicadores más ambiguos cuando solamente son ligeramente elevados, por ejemplo cuando se encuentran entre 2 y 10 ng/ml. Cuando los niveles son ligeramente levados, el PSA en suero puede haberse originado por estados patológicos no cancerosos, como la BPH (hiperplasia prostática benigna) , prostatitis o un traumatismo físico (McCormack et al, 1995) . A pesar de que la aplicación de la concentración de corte mínima de 2, 0 ng/ml de PSA en suero para la detección del cáncer ha incrementado el índice de diagnóstico del cáncer de próstata, en especial en los hombres más jóvenes con tumores en fase temprana no palpable (estadio TIC) (Soh et al, 1997; Carter y Coffey, 1997; Harris et al, 1997; Orozco et al, 1998) , la especificidad del ensayo de PSA para la detección del cáncer de próstata con bajos niveles de PSA en suero continúa representando un problema.

Varios investigadores han intentado mejorar la especificidad de la detección serológica del cáncer de próstata, examinando varios otros biomarcadores además de la concentración de PSA en suero (Ralph y Veltri, 1997) . Uno de estos biomarcadores más investigados es el ratio de PSA libre frente a PSA total (f/t PSA) en la sangre de un paciente. La mayoría del PSA en suero se encuentra en forma molecular que se une a otras proteínas como la α1antiquimiotripsina (ACT) o laα2-macroglobulina (Christensson et aL, 1993; Stenman et aL, 1991; Lilja et aL, 1991) . El PSA libre no se une a otras proteínas. En general, el índice de PSA libre frente al total (f/tPSA) es significativamente superior en pacientes con BPH en comparación con los que padecen un cáncer de próstata confinado al órgano (Marley et al., 1996; Oesterling et aL, 1995;Pettersson et aL, 1995) . Cuando se determina una concentración de corte apropiada para el ensayo de f/tPSA, el ensayo de f/tPSA puede ayudar a distinguir a los pacientes con BPH de los que padecen cáncer de próstata, en los que los niveles de PSA en suero son sólo ligeramente elevados (Marley et al., 1996; Partin y Oesterling, 1996) . Lamentablemente, a pesar de que el f/tPSA puede mejorar la detección del cáncer de próstata, la información sobre el ratio f/tPSA es insuficiente para mejorar la sensibilidad y especificidad de la detección serológica del cáncer de próstata hasta unos niveles deseables.

Otros marcadores que se han empleado para la detección del cáncer de próstata incluyen la fosfatasa ácida prostática (PAP) y la proteína secretada por la próstata (PSP) . La PAP es secretada por las células prostáticas bajo control hormonal (Brawn et al, 1996) . Presenta una menor especificidad y sensibilidad que la PSA. Como resultado, ahora se utiliza mucho menos, aunque la PAP puede tener, no obstante, algunas aplicaciones para controlar a los pacientes con metástasis en los que han fracasado los tratamientos primarios. Por lo general, la PSP es... [Seguir leyendo]

1. Un método para determinar la capacidad de una sustancia candidata para inhibir la expresión de un gen UC41 correspondiente a una secuencia de cADN que comprende la secuencia de polinucleótidos expuesta en cualquiera de las SEQ. ID. Nº 1, 3 o 4. El método se compone de los pasos de:

(a) proporcionar al menos una célula prostática de expresión de UC41;

(b) poner en contacto dicha célula prostática con la sustancia candidata;

(c) medir el nivel de expresión de UC41 en la mencionada célula prostática; y

(d) comparar el nivel de expresión de UC41 de la célula prostática medido en el paso (c) con el nivel de expresión de UC41 medido en una célula prostática en ausencia de la sustancia candidata.

2. El método de la reivindicación 1, en donde la expresión de UC41 se mide mediante la detección de la expresión de un polinucleótido que se hibrida con la secuencia de polinucleótidos expuesta en las SEQ. ID. Nº 1, 3 o 4.

3. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 en donde se proporciona al menos una célula prostática que expresa UC41 como célula adherente en una placa de cultivo, como parte de una biomatriz de alginato, o en un cultivo en suspensión.

4. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 o 3, en donde el nivel de expresión de UC41 se mide mediante análisis Northern blot o spot blot de los productos de RNA del gen UC41.

5. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3, en las que el nivel de expresión de UC41 se mide mediante análisis Western blot de los productos proteicos del gen UC41.

6. El uso de una célula prostática que expresa un gen UC41 correspondiente a una secuencia de cADN que

comprende la secuencia de polinucleótidos expuesta en cualquiera de las SEQ. ID. Nº 1, 3 o 4 para detectar la presencia de moduladores de la expresión de UC41.

7. El uso de la reivindicación 7, en donde la célula prostática que expresa UC41 se proporciona como una célula adherente en una placa de cultivo, como parte de una biomatriz de alginato, o en un cultivo en suspensión.

FIG. 2

FIG. 3

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FIG. 5

FIG. 6

FIG. 7