LTBP2 como biomarcador, diana terapéutica y diagnóstica.

Un procedimiento de uso de LTBP2 como biomarcador para insuficiencia cardíaca congestiva que comprende:

i) medir el nivel de ARNm de LTBP2 en una muestra biológica tomada de un mamífero,

ii) comparar el nivel de ARNm de LTBP2 en la muestra biológica con el nivel de LTBP2 en una muestra decontrol, y

iii) diagnosticar insuficiencia cardíaca congestiva en base al elevado nivel de ARNm de LTBP2 de la muestrabiológica en comparación con la muestra de control,

en el que la muestra es una muestra de tejido de corazón.

LTBP2 como biomarcador, diana terapéutica y diagnóstica Campo técnico de la invención La presente invención pertenece al campo de la biología molecular, más particularmente la presente invención se refiere al uso de ARNm de LTBP2 como biomarcador de diagnóstico de insuficiencia cardíaca congestiva.

Antecedentes de la invención Tecnología TaqMan / perfilado de expresión TaqMan es una técnica recientemente desarrollada, en la que la liberación de un colorante indicador fluorescente de una sonda de hibridación en tiempo real durante una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es proporcional a la acumulación de producto de PCR. La cuantificación se basa en la parte lineal temprana de la reacción, y determinando el ciclo umbral (CU) , al que la fluorescencia se detecta primero por encima de la referencia.

Las tecnologías de expresión génica pueden ser útiles en varias áreas del descubrimiento y desarrollo de fármacos, tales como identificación de dianas, optimización de cabezas de serie e identificación de mecanismos de acción. La tecnología TaqMan puede usarse para comparar diferencias entre perfiles de expresión de tejido normal y tejido enfermo. El perfilado de expresión se ha usado en la identificación de genes, que son regulados por incremento o por disminución en una variedad de enfermedades. Una aplicación interesante del perfilado de expresión es la monitorización temporal de cambios en la expresión génica durante la progresión de la enfermedad y tratamiento con fármacos o en pacientes frente a individuos sanos. La suposición en este enfoque es que los cambios en el patrón de expresión génica en respuesta a estímulos fisiológicos o medioambientales (por ejemplo, fármacos) pueden servir de pistas indirectas sobre genes causantes de enfermedad o dianas de fármaco. Además, los efectos de fármacos con eficacia establecida sobre patrones de expresión génica globales pueden proporcionar una indicación, o una forma genética, contra la que puede compararse un nuevo candidato a fármaco.

LTBP2

La secuencia de nucleótidos de LTBP2 está accesible en las bases de datos por el número de acceso Z37976 (humana) y Y12760 (rata) . Las secuencias se administran en SEC ID Nº: (humana) y SEC ID Nº: 2 (rata) . La secuencia de aminoácidos de LTBP2 representada en SEC ID Nº: 3 (humana) y SEC ID Nº: 4 (rata) .

Las citocinas del factor de crecimiento transformante beta (TGFº) son una familia multifuncional que ejerce una amplia variedad de efectos sobre tanto células de mamífero normales como transformadas. La secreción y activación de TGFº está regulada por su asociación con proteínas asociadas a latencia y proteínas de unión a TGFº latente (LTBP) . El factor de crecimiento transformante º (TGFº) existe como tres isoformas de mamífero (TGFº1, TGFº2 y TGFº3) . Cada uno de éstas es normalmente secretada en grandes complejos latentes (LLC) que no tienen actividad biológica y comprenden tres componentes: un homodímero unido por disulfuro de TGFº maduro asociado no covalentemente con proteínas asociadas a latencia (LAP; homodímeros del fragmento del extremo N de TGFº precursor) y una molécula covalentemente unida de proteína de unión a TGFº latente (LTBP) . Se han identificado cuatro genes LTBP: LTBP1 a LTBP4. Las LAP son suficientes para convertir el homodímero maduro en inactivo, y eliminación de tanto las LAP como las LTBP o la modulación de su interacción es esencial para que funcione cualquiera de las isoformas de TGFº. Las citocinas de TGFº modulan el crecimiento y funciones de una amplia variedad de tipos de células de mamífero. Es evidente en los últimos años que las LTBP pueden participar en el ensamblaje, secreción y elección como diana de TGFº para sitios en los que se almacena y/o activa. Así, estas proteínas pueden desempeñar funciones críticas en controlar y dirigir la actividad de TGFº. Las LTBP pueden también ejercer efectos independientemente de aquellos asociados a TGFº, por ejemplo, como proteínas de matriz estructural [Oklu y col., (2000) ]

Se sabe relativamente poco sobre la función funcional de LTBP2. A diferencia de las otras LTBP, LTBP2 es incapaz de asociarse al TGFº latente pequeño [Saharinen y col. (2000) ]. LTBP2 humana se expresa principalmente en el pulmón y a menor grado en el hígado, músculo esquelético, placenta y corazón [Vehvilainen y col. (2003) ]. La proteína de unión a TGFº latente LTBP2 disminuye la adhesión de fibroblastos a fibronectina [Hyytiainen y col. (2003) ]. La elucidación de la función funcional de LTBP2 está adicionalmente limitada por el hecho de que la deleción de LTBP2 en ratones conduce a letalidad embrionaria [Shipley y col. (2000) ].

Con respecto a una función funcional de LTBP2 en el sistema cardiovascular, se demostró que la síntesis de LTBP2 aumentó en respuesta a lesión arterial en un modelo porcino de angioplastia coronaria [Sinha y col. (2000) ]. Así, junto con la muy conocida función de TGFº en el desarrollo de insuficiencia cardíaca [Watkins y col. (2006) ], el hallazgo de los presentes inventores de que la función de TGFº que modifica LTBP2 está regulada en el nivel de ARN en corazones de DAVI, además de en diversos modelos animales de insuficiencia cardíaca hace que LTBP2 sea un atractivo biomarcador candidato para CHF.

LTBP2 se publica (pero no se limita a) en las patentes WO2004075835 y WO02068579.

Se conocía la expresión diferencial génica en insuficiencia cardíaca (por ejemplo, Tan y col., 2002, PNAS, vol. 99 (nº 17) : 11387 - 11392.

Sumario de la invención La invención definida en las reivindicaciones adjuntas se refiere al uso de ARNm de LTBP2 como biomarcador en el diagnóstico de insuficiencia cardíaca congestiva.

Breve descripción de los dibujos La Fig. 1 muestra la secuencia de nucleótidos de un polinucleótido de LTBP2 humano (SEC ID Nº: 1) .

La Fig. 2 muestra la secuencia de nucleótidos de un polinucleótido de LTBP2 de rata (SEC ID Nº: 2) .

La Fig. 3 muestra la secuencia de aminoácidos de un polipéptido de LTBP2 humano (SEC ID Nº: 3) .

La Fig. 4 muestra la secuencia de aminoácidos de un polipéptido de LTBP2 de rata (SEC ID Nº: 4) .

La Fig. 5 muestra la secuencia de nucleótidos de un cebador útil para la invención (SEC ID Nº: 5) .

La Fig. 6 muestra la secuencia de nucleótidos de un cebador útil para la invención (SEC ID Nº: 6) .

La Fig. 7 muestra una secuencia de nucleótidos útil como sonda para detectar proteínas de la invención (SEC ID Nº: 7) .

La Fig. 8 muestra la secuencia de nucleótidos de un cebador útil para la invención (SEC ID Nº: 8) .

La Fig. 9 muestra la secuencia de nucleótidos de un cebador útil para la invención (SEC ID Nº: 9) .

La Fig. 10 muestra una secuencia de nucleótidos útil como sonda para detectar proteínas de la invención (SEC ID Nº: 10) .

La Fig. 11 muestra los resultados de análisis de expresión en tiempo real de LTBP2 en corazones de rata (DOCA) . Eje X: tratamiento; eje Y: expresión relativa; A: control; B: control/placebo; C1: compuesto P / concentración 1; C2: compuesto P / concentración 2; C3: compuesto P / concentración. La expresión de LTBP2 está regulada dependiente del estado de enfermedad, tratamiento y dosis en el modelo animal.

La Fig. 12 muestra los resultados de análisis de expresión en tiempo real de LTBP2 en corazones de rata (oclusión) . Eje X: tratamiento; eje Y: expresión relativa; A: control; B: control/placebo; C1: compuesto P / concentración 1; C2: compuesto P / concentración 2; C3: compuesto P / concentración. La expresión de LTBP2 está regulada dependiente del estado de enfermedad, tratamiento y dosis en el modelo animal.

La Fig. 13 muestra los resultados de análisis de expresión en tiempo real de LTBP2 en corazones de rata (monocrotalina) . Eje X: tratamiento; eje Y: expresión relativa; A: control; B: control/placebo; C1: compuesto P / concentración 1; C2: compuesto P / concentración 2. La expresión de LTBP2 está regulada dependiente del estado de enfermedad, tratamiento y dosis en el modelo animal.

La Fig. 14 muestra los resultados de análisis de expresión de micromatrices de LTBP2 en corazones de rata (DOCA) . Eje X: tratamiento; eje Y: expresión relativa; A: control; B: control/placebo; C: compuesto P / concentración 1; D: compuesto P / concentración 2. La expresión de LTBP2 está regulada dependiente del estado de enfermedad, tratamiento y dosis en el modelo animal.

La Fig. 15 muestra los resultados de análisis de expresión de micromatrices de LTBP2 en corazones de rata (oclusión) . Eje X: tratamiento; eje Y: expresión relativa; A: control; B: control/placebo; C: compuesto P /... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de uso de LTBP2 como biomarcador para insuficiencia cardíaca congestiva que comprende: i) medir el nivel de ARNm de LTBP2 en una muestra biológica tomada de un mamífero, ii) comparar el nivel de ARNm de LTBP2 en la muestra biológica con el nivel de LTBP2 en una muestra de control, y iii) diagnosticar insuficiencia cardíaca congestiva en base al elevado nivel de ARNm de LTBP2 de la muestra biológica en comparación con la muestra de control, en el que la muestra es una muestra de tejido de corazón.

2. Un procedimiento de la reivindicación 1, en el que el mamífero es un ser humano.

3. Un procedimiento de la reivindicación 1, en el que el uso de LTBP2 se combina con el uso de uno o más biomarcadores.

4. Un procedimiento de la reivindicación 1, en el que el uso de LTBP2 se combina con el uso de uno o más biomarcadores que están comprendidos en un grupo de biomarcadores que consiste en CRTAC, PRSS23, FN1, TGFB2, NPR3 y CTGF.

5. Un procedimiento de la reivindicación 1, en el que el uso de LTBP2 se combina con el uso de uno o más biomarcadores que están comprendidos en un grupo de biomarcadores que consiste en BNP, ANP, troponina, CRP, mioglobina, CK-MB o metabolitos.

6. Un procedimiento de la reivindicación 1, en el que el uso de LTBP2 se combina con el uso de uno o más biomarcadores clínicos que están comprendidos en un grupo de biomarcadores que consiste en tensión arterial, 20 frecuencia cardíaca, tensión arterial pulmonar o resistencia vascular sistémica.