La fosfolipasa A2 (sPLA2) secretora como marcador pronóstico y diagnóstico para enfermedades cardiovasculares.

Un método para determinar un aumento del riesgo de mortalidad o de infarto de miocardio en un paciente endonde se ha diagnosticado la parición de los síntomas isquémicos,

que comprende:

- determinar la actividad de la fosfolipasa A2 (sPLA2) secretora en una muestra biológica de dicho paciente,

- comparar dicha actividad con un valor predeterminado, en donde dicho valor predeterminado secorresponde con una actividad de sPLA2 comprendida en el intervalo de actividad de la sPLA2 de las dosterceras partes de los individuos que tienen la más alta actividad sPLA2 en relación con todos los individuosque constituyen una población dada de individuos que no presentan ningún síntoma de aflicción poraterosclerosis o enfermedades cardiacas y/o vasculares relacionadas, una mayor actividad de sPLA2 dedicho paciente en comparación con dicho valor predeterminado es indicativo de un aumento del riesgo demortalidad o de infarto de miocardio.

La fosfolipasa A2 (sPLA2) secretora como marcador pronóstico y diagnóstico para enfermedades cardiovasculares La presente invención se refiere a un nuevo marcador que se pueda usar para el pronóstico y el diagnóstico de trastornos cardiovasculares.

Las enfermedades cardiovasculares son las principales causas de morbilidad y mortalidad en los países desarrollados, lo que hace la prevención de esas aflicciones una preocupación importante de la salud pública. Una de los pasos hacia la prevención de estos trastornos es la detección de individuos con riesgo. Así, varios marcadores de riesgo bioquímicos, tales como los niveles de colesterol HDL, están actualmente en uso para la detección de pacientes con riesgo para las enfermedades cardiovasculares. Sin embargo, hasta hoy, numerosos trastornos cardiovasculares pueden ocurrir en individuos que no se consideran con riesgo en relación a los marcadores. Por lo tanto, existe una necesidad de nuevos marcadores bioquímicos para obtener una predicción más exacta de los eventos cardiovasculares. El nivel plasmático de sPLA2 es uno de los marcadores de riesgo potencial que se investigan actualmente.

Las enzimas fosfolipasas A2 (PLA2) hidrolizan los fosfolípidos en la posición sn-2 para generar lisofosfolípidos y ácidos grasos (Dennis J Biol Chem. (1994) 269:13057-13060) .. Una de las PLA2 más ampliamente estudiadas es una PLA2 (sPLA2) secretora del grupo IIa de bajo peso molecular (14 kDa) , que se ha demostrado que se expresa en las arterias normales y las placas ateroscleróticas (Elinder y otros, Arterioscler Thromb Vasc Biol. (1997) 17:2257-63) . Diversos datos sugieren un papel potencialmente importante para las sPLA2 tanto en el desarrollo y las complicaciones de la aterosclerosis. La liberación de ácido araquidónico por las sPLA2 es un evento de velocidad limitante en la generación de derivados de la oxidación, que incluyen prostaglandinas, tromboxanos y leucotrienos. La sPLA2 está implicada en la modificación oxidativa de la lipoproteína de baja densidad (LDL) por la lipoxigenasa (Mangin y otros, Circ Res. (1993) 72:161-6) y en la liberación de fosfolípidos oxidados biológicamente activos a partir de partículas tanto de LDL y HDL (Leitinger y otros, Arterioscler Thromb Vasc Biol. (1999) 19:1291-8) , lo que sugiere un papel directo en la aterogénesis.

Así, varios estudios clínicos han tenido como objetivo determinar el valor predictivo del nivel plasmático de la sPLA2 en relación a varios trastornos cardiovasculares. Por consiguiente, se considera que el nivel plasmático de sPLA2 es elevado en pacientes con enfermedad arterio coronaria y predice los eventos coronarios en pacientes estables (Kugiyama y otros, Circulation. (1999) 100:1280-4) . Además, el aumento del nivel plasmático de sPLA2 en pacientes estables sometidos a angioplastia coronaria percutánea además proporciona información de pronóstico independiente sobre otras variables biológicas y clínicas clásicas (Liu y otros, Eur Heart J. (2003) 24:1824-32) . Además, los estudios de evaluación del valor pronóstico de sPLA2 en pacientes con ACS (síndrome coronario agudo) , limitado a un pequeño estudio de pacientes con angina inestable, mostraron que el aumento de los niveles plasmáticos de sPLA2 predice la recurrencia de los eventos coronarios, principalmente los procedimientos de revascularización, independientemente de otros factores de riesgo (Kugiyama y otros, Am J Cardiol. (2000) 86:718-22) .

Otro estudio mide la actividad de la PLA2 y la lisolecitina de suero en pacientes después de un infarto de miocardio en comparación con los pacientes que sufren de angina inestable (Langton y Jarnicki (1992) Clin. Chim. Acta 205: 223231) . Finalmente, Schaefer y otros, (J. Clin. Chem. Clin. Biochem (1990) 28: 253-254) investiga si la elevada actividad de sPLA en pacientes de cuidados intensivos, independientemente del diagnóstico o la gravedad de la enfermedad, se puede usar para predecir la letalidad

Sin embargo, estos estudios son muy debatidos, ya que se han llevado a cabo en un número demasiado pequeño de pacientes para que se considere estadísticamente significativo. Claramente, estudios recientes realizados en un mayor número de pacientes indican que no existe una correlación significativa entre los niveles plasmáticos de sPLA2 y la predicción de la mortalidad o los eventos cardiovasculares.

Por consiguiente, uno de los objetivos de la presente invención es proporcionar un nuevo método de pronóstico y/o diagnóstico de enfermedades cardiovasculares, más fiable que los de la materia anterior.

Otro objetivo de la invención es proporcionar un nuevo método de pronóstico y/o diagnóstico de enfermedades cardiovasculares que pueda ser relevante para las personas aparentemente sanas.

Así, la presente invención se refiere a un método para determinar un aumento del riesgo de mortalidad o de infarto de miocardio en un paciente de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende:

• determinar la actividad de la sPLA2 de dicho paciente,

• comparar dicha actividad con un valor predeterminado,

una mayor actividad de la sPLA2 de dicho paciente, en comparación con dicho valor predeterminado es indicativo de un aumento del riesgo de mortalidad o de infarto de miocardio.

Por "aumento del riesgo" se entiende que un paciente para quien la actividad de la sPLA2 es mayor que el valor predeterminado es más probable que fallezca o que esté afectado con un evento cardiaco y/o evento vascular que un individuo para el cual la actividad de la sPLA2 está por debajo de dicho valor predeterminado.

De acuerdo con la solicitud, los siguientes eventos se consideran particularmente como que son eventos cardiacos y/o vasculares: infarto de miocardio (MI) , accidente cerebro vascular, hospitalización debido a enfermedades cardiacas y/o vasculares, y procedimientos de revascularización.

La medida de la actividad de la sPLA2 se puede realizar por un ensayo fluorimétrico de acuerdo con Radvanyi y otros, (1989) Anal Biochem. 177:103-9 modificado por Pernas y otros, (Pernas y otros, Biochem. Biophys. Res. Commun. (1991) 178:1298-1305) . En particular, se usa el siguiente ensayo. La sal sódica 1-hexadecanoilo-2- (1-pirenodecanoilo) sn-glicero-3-fosfometanol (Interchim, Montluçon, Francia) se usa como un sustrato para la sPLA2. La hidrólisis de este sustrato por la sPLA2 produce el ácido 1-pirenodecanoico, que emite fluorescencia a 397 nm. Un volumen (E) de 0.03 ml de los plasmas alicuotados se mezcla con 5 nmoles del sustrato en presencia de 10 mM tris-HCl pH 8.7, 0.1 % de albúmina, 10 mM de CaCl2 en un volumen total de 2.5 ml, y la fluorescencia (F) se mide a 397 nm después de un minuto. El 100% de la hidrólisis del sustrato se obtiene con 0.1 U de la PLA2 del veneno de abeja (Sigma Chemical Co., Francia) durante un minuto, el valor de la fluorescencia al final del minuto de reacción (Fmáx) así corresponde a una actividad, de 2 nmoles/min (Vmáx) . La actividad (A) de la muestra (expresada en nmoles/ml/min) está dada por la siguiente fórmula:

Las muestras se diluyen cuando la hidrólisis del sustrato está por encima de 50%. La hidrólisis del sustrato en ausencia de plasma se usa como control negativo y se deduce a partir de la actividad de la PLA2. Todas las muestras se prueban por duplicado. La mínima actividad detectable y el límite de detección es 0.10 nmoles/min/ml y el coeficiente de variación intra e inter ensayo es menor que 10%.

Todos los valores numéricos dados en la presente descripción para la actividad de la sPLA2 en el plasma se miden de acuerdo con el ensayo definido anteriormente.

La expresión "valor predeterminado" designa un valor umbral por encima del cual la actividad de la sPLA2 en el plasma se considera que es importante para una aflicción actual o futura de un paciente con un evento cardiaco y/o vascular o patología relacionada.

La expresión "mayor actividad de la sPLA2" significa que para ser indicativo de un aumento del riesgo, el valor de la actividad de la sPLA2 del paciente debe ser mayor que el valor predeterminado.

De acuerdo con una modalidad particular del método definido anteriormente, el paciente se ha diagnosticado como sustancialmente sano, particularmente con respecto a enfermedades relacionadas con la aterosclerosis, cardiacas y/o vasculares.

Por "sustancialmente sano" se entiende que el paciente no presenta síntomas de aflicción por una enfermedad, particularmente por una enfermedad relacionada con la aterosclerosis, cardiaca y/o vascular. Tales enfermedades comprenden particularmente: las enfermedades arterio coronarias (CAD) , aterosclerosis de la carótida, aterosclerosis aórtica, aterosclerosis ilíaca o femoral, aneurisma vascular,... [Seguir leyendo]

1. Un método para determinar un aumento del riesgo de mortalidad o de infarto de miocardio en un paciente en donde se ha diagnosticado la parición de los síntomas isquémicos, que comprende:

- determinar la actividad de la fosfolipasa A2 (sPLA2) secretora en una muestra biológica de dicho paciente,

- comparar dicha actividad con un valor predeterminado, en donde dicho valor predeterminado se corresponde con una actividad de sPLA2 comprendida en el intervalo de actividad de la sPLA2 de las dos terceras partes de los individuos que tienen la más alta actividad sPLA2 en relación con todos los individuos que constituyen una población dada de individuos que no presentan ningún síntoma de aflicción por aterosclerosis o enfermedades cardiacas y/o vasculares relacionadas, una mayor actividad de sPLA2 de dicho paciente en comparación con dicho valor predeterminado es indicativo de un aumento del riesgo de mortalidad o de infarto de miocardio.

2. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde se ha diagnosticado que el paciente presenta uno de los siguientes trastornos coronarios:

- trastornos isquémicos crónicos sin necrosis miocárdica, tal como la angina de pecho estable o de esfuerzo,

- trastornos isquémicos agudos sin necrosis miocárdica, tal como la angina de pecho inestable,

- trastornos isquémicos con necrosis miocárdica, tal como el infarto de miocardio con elevación del segmento ST o el infarto de miocardio sin elevación del segmento ST.

3. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en donde la actividad de la sPLA2 del paciente es mayor que aproximadamente 1.8 nmoles/ml/min, particularmente mayor que aproximadamente 2 nmoles/ml/min, más particularmente mayor que aproximadamente 2.5 nmoles/ml/min, preferentemente mayor que aproximadamente 2.9 nmoles/ml/min, y con mayor preferencia mayor que 3.3.

4. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la actividad sPLA2 se mide en una muestra biológica, particularmente una muestra de suero o una de plasma, y más particularmente una muestra de plasma heparinizado.

5. Un método in vitro o ex vivo para el diagnóstico de infarto de miocardio en un paciente, que comprende:

- determinar la actividad de la sPLA2 de dicho paciente,

- comparar dicha actividad con un valor predeterminado, en donde dicho valor predeterminado se corresponde con una actividad de la sPLA2 comprendida en el intervalo de actividad de la sPLA2 de las dos terceras partes de los individuos que tienen la más alta actividad sPLA2 en relación con todos los individuos que constituyen una población dada de individuos que no presentan ningún síntoma de aflicción por aterosclerosis o enfermedades cardiacas y/o vasculares relacionadas,

una mayor actividad de la sPLA2 de dicho paciente, en comparación con dicho valor predeterminado es indicativo de infarto de miocardio, en donde se ha diagnosticado la parición de los síntomas isquémicos en dicho paciente.

6. Un método in vitro o ex vivo de acuerdo con la reivindicación 5, en donde una mayor actividad de la sPLA2 de un paciente en comparación con un valor predeterminado es indicativo de la aflicción de dicho paciente con infarto de miocardio en el momento en que se hace la determinación de la actividad de la sPLA2 de dicho paciente, o es indicativo de una futura aflicción de dicho paciente con un infarto de miocardio, particularmente más de 72 después de la hora en que se realiza la determinación de la actividad de sPLA2 de dicho paciente.

7. Un método in vitro o ex vivo de acuerdo con la reivindicación 5 o 6, en donde la actividad de la sPLA2 del paciente es mayor que aproximadamente 1.8 nmoles/ml/min, particularmente mayor que aproximadamente 2 nmoles/ml/min, más particularmente mayor que aproximadamente 2.5 nmoles/ml/min, preferentemente mayor que aproximadamente 2.9 nmoles/ml/min, y con mayor preferencia mayor que 3.3 nmoles/ml/min.

8. Un método in vitro o ex vivo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en donde la actividad sPLA2 se mide en una muestra biológica, particularmente una muestra de suero o una de plasma , y más particularmente una muestra de plasma heparinizado.