Inducción de tolerancia inmunológica específica de antígeno.

Uso de un tolerógeno, comprendiendo dicho tolerógeno un antígeno polipéptido soluble que comprende oconjugado a una manosa-6-fosfato como una fracción de absorción rápida,

para la fabricación de un medicamentopara el uso en terapia de combinación con un agente inmunosupresor de célula T y un agente antiproliferativo en lainducción de tolerancia inmunológica en un huésped mamífero en el componente antígeno del tolerógeno; en el quedicho huésped mamífero se mantiene primero en una combinación del antígeno polipéptido soluble, el agenteinmunosupresor de célula T y el agente antiproliferativo durante un régimen de tolerización y después se mantieneen el antígeno polipéptido soluble después de la retirada del agente inmunosupresor de célula T y el agenteantiproliferativo.

Inducción de tolerancia inmunológica específica de antígeno

Campo de la invención La siguiente solicitud está dirigida a métodos y composiciones para inducir tolerancia inmunológica en un mamífero. Los métodos comprenden la administración de un tolerógeno de absorción rápida en combinación con agentes inmunosupresores en un régimen de tolerización.

Antecedentes de la invención La tolerancia inmunológica es altamente relevante en un amplio rango de aplicaciones clínicamente importantes. La inducción de tolerancia específica de antígeno es un objetivo principal para el tratamiento o prevención de la enfermedad autoinmune y el rechazo de tejido, que a menudo se controlan mediante terapias inmunosupresoras no específicas que resultan en tasas incrementadas de infecciones, cánceres y patologías relacionadas con fármacos. Otras aplicaciones de inducción de tolerancia inmunológica incluyen alergias y asma, sustitución de la médula ósea y terapias basadas en proteína.

Una de las primeras aplicaciones prácticas de biología molecular ha sido la habilidad de producir grandes cantidades de agentes biológicos escasos, muchos de los cuales tienen actividad terapéutica. Se ha descubierto, sin embargo, que durante la administración de estos agentes, un paciente puede organizar una respuesta inmunológica, llevando a la producción de anticuerpos que unen e interfieren con la actividad terapéutica así como causan reacciones inmunológicas crónicas o agudas. Este problema es más significativo para terapias que son proteínas porque las proteínas son antígenos complejos y en muchos casos, el paciente es inmunológicamente inexperto a los antígenos.

Este tipo de respuesta inmunológica se ha descubierto en al menos algunos pacientes con trastornos por deficiencia tales como la hemofilia A (Aledort (1994) Am. J. Hemat. 47:208-217) , la diabetes mellitus (Gossain et al. (1985) Ann. Allergy 55:116-118) , la deficiencia de deanimasa de adenosina (Chaffee et al. (1993) J. Clin. Inv. 89:1643-1651) , la enfermedad de Gaucher (Richards et al. (1993) Blood 82:1402-1409) , y la enfermedad de Pompe (Amalfitano (2001) Genet Med 3:132-138) . En la hemofilia A, los anticuerpos pueden inhibir la función de factor VIII que requieren tratamiento alternativo con concentrados de complejo de protrombina activados. En la deficiencia de deanimasa de adenosina, los anticuerpos en deanimasa de adenosina modificada de PEG aumentan la liquidación de la encima y reducen su eficacia. En la enfermedad de Gaucher, la inducción de anticuerpos IgG1 ha sido asociada con reacciones anafilactoides debido a la activación de complemento durante las infusiones. En la enfermedad de Pompe, la terapia de remplazo con alfa-glucosidasa recombinante resultó en la inducción de anticuerpos en dos de tres pacientes tratados, que resultó en eficacia en declive de la terapia.

Se han descubierto respuestas inmunológicas similares en el reparto de terapias de proteína mediante terapia de genes. Por ejemplo, las proteínas virales asociadas con vectores son objetivos de una respuesta inmunológica que puede causar inflamación, expresión reducida y evitar la administración repetida de vector (Wilson y Kay (1995) Nature Med. 1:887-889) . Las respuestas de anticuerpos a la proteína terapéutica también han sido observadas en experimentos de terapia de genes y son parte de una respuesta inmunológica general que evita expresiones a largo plazo (Shull et al. (1996) Blood 88:377-379) . Inmunosupresión generalizada, bloqueo y desviación inmunológica desde respuestas humorales a celulares han sido utilizadas para abordar este problema, pero no es probable asegurar tolerancia de larga duración al antígeno.

La tolerancia puede ser definida como la ausencia de una respuesta inmunológica a un antígeno específico en la configuración de un sistema inmunológico de otro modo normal. Este estado de tolerancia inmunológica específica a autocomponentes incluye tanto mecanismos centrales como periféricos. La tolerancia central (selección negativa) es una consecuencia de células T inmaduras que reciben señales intracelulares fuertes mientras todavía residen en el timo, resultando en la reducción clonal de células autoreactivas. La tolerancia periférica ocurre cuando el sistema inmunológico se vuelve no reactivo a un antígeno presentado en la periferia, donde, en contraste con el timo, se asume que las células T son funcionalmente maduras. Se ha propuesto que la tolerancia periférica sea el resultado de varios mecanismos, incluido el desarrollo de células supresoras específicas de antígenos u otros medios de tolerancia activa, reducción clonal, y anergía. Las células autoreactivas pueden ser físicamente borradas por la inducción de apoptosis después del reconocimiento de antígeno tolerizante, puede volverse anérgico sin reducción,

o puede ser inhibido funcionalmente por citosinas o células reguladoras. Aunque se ha descubierto mucho en años recientes, todavía es difícil predecir los resultados de exposición antigénica in vivo, y se necesita elucidación adicional de los mecanismos de tolerancia a nivel básico.

Han sido desarrolladas numerosas estrategias para inducir tolerancia específica de antígeno en modelos de animal, por ejemplo con respecto a los desórdenes autoinmunes, tales como esclerosis múltiple (o encefalitis alérgica experimental, EAE) o diabetes, así como para evitar el rechazo de trasplantes de tejido alogénico. Los principales métodos desarrollados en modelos de ratón y rata incluyen la administración de altas dosis de antígeno soluble, ingestión oral de antígenos o inyección intratímica. La eficacia de estos modelos depende de grados variados de reducción clonal, anergía clonal, supresión activa mediante células T específicas de antígeno y desviación inmunológica desde respuestas inmunológicas celulares a humorales.

Aunque la administración de grandes cantidades de antígenos solubles se conoce desde hace tiempo para inducir no sensibilidad al estímulo inmunológico subsiguiente, los estudios de EAE también han resaltado las dificultades en este enfoque. Las altas dosis requeridas y la inconsistencia de la tolerancia contra la desviación inmunológica hacen la administración de antígeno soluble sola impracticable para la mayoría de las situaciones de terapia de genes.

La administración de muy altas dosis de antígeno oralmente a ratones también se ha demostrado que induce tolerancia a antígenos de proteína. Sin embargo, se requieren dosis extraordinarias, y los resultados son complejos. Se encuentra que ciertas dosis resultan en anergía, mientras que otras dosis inducen una forma de supresión presencial específica de antígeno, caracterizada por respuestas de tipo TH2 específico de antígeno. Adicionalmente, el antígeno oral puede sensibilizar el sistema inmunológico y llevar a una enfermedad más grave.

La inyección intratímica de antígenos o células ha sido ampliamente explorada como una técnica para inducir tolerancia inmunológica central. Los antígenos inyectados y presentados dentro del timo pueden causar apoptosis o anergía de las células T CD4+, CD8+ en un proceso que puede llevar diez días. Como la tolerancia de antígeno soluble u oral, el efecto de tolerización depende de la dosis: bajas dosis de antígeno son sensibilizadoras o proporcionan solo protección parcial, mientras que las dosis más altas de antígeno son tolerizantes. El contexto de presentación de antígeno dentro del timo es también importante. La tolerancia es inducida más eficientemente cuando los antígenos se presentan mediante células que presenten antígenos de huésped (APC) . Una vez tolerizado, la presencia continuada de antígeno dentro del animal se necesita para el mantenimiento de tolerancia, y también puede requerirse la reducción de células T maduras.

Una estrategia para la inducción de tolerancia se basa en el descubrimiento de que la activación de la célula T óptima requiere tanto señales específicas de antígeno como señales específicas de no antígeno. Durante la presentación de antígeno, una variedad de interacciones parecidas bidireccionales importantes tienen lugar, con señales tanto en la célula T como la célula que presenta antígeno. La mejor señal coestimuladora entendida es proporcionada por la molécula CD28 de superficie de célula T. La CD28 tiene dos ligandos, las moléculas homólogas CD80 (B7-1) y CD86 (B7-2) ; ambas se expresan en APC activado y otros tipos de célula. Otro camino que ha recibido atención significativa y es importante en coestimulación de célula T es el mediado por CD40 y su ligando CD154. CD154 se expresa en células T activadas, principalmente células T CD4+.

Durante los últimos años,... [Seguir leyendo]

1. Uso de un tolerógeno, comprendiendo dicho tolerógeno un antígeno polipéptido soluble que comprende o conjugado a una manosa-6-fosfato como una fracción de absorción rápida, para la fabricación de un medicamento para el uso en terapia de combinación con un agente inmunosupresor de célula T y un agente antiproliferativo en la inducción de tolerancia inmunológica en un huésped mamífero en el componente antígeno del tolerógeno; en el que dicho huésped mamífero se mantiene primero en una combinación del antígeno polipéptido soluble, el agente inmunosupresor de célula T y el agente antiproliferativo durante un régimen de tolerización y después se mantiene en el antígeno polipéptido soluble después de la retirada del agente inmunosupresor de célula T y el agente antiproliferativo.

2. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho régimen de tolerización es precedido por un periodo de condicionamiento, dicho periodo de condicionamiento comprendiendo agente inmunosupresor de célula T de administración en la ausencia de dichos polipéptidos solubles durante un periodo de tiempo suficiente para suprimir respuestas de célula T de huésped.

3. El uso de la reivindicación 1, en el que durante dicho régimen de tolerización, dicho huésped se mantiene en una combinación de agente inmunosupresor de célula T y un agente antiproliferativo durante un periodo de al menos seis semanas.

4. El uso de la reivindicación 1, en el que durante dicho régimen de tolerización, dicho huésped se mantiene en una combinación de agente inmunosupresor de célula T y un agente antiproliferativo durante un periodo de al menos tres semanas.

5. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho agente inmunosupresor de célula es ciclosporina A.

6. El uso de la reivindicación 5, en el que un nivel valle de ciclosporina A durante dicho régimen de tolerización es de 200 ng/ml a 500 ng/ml, y dicho nivel valle es suficiente para suprimir respuestas de célula T de huésped.

7. El uso de la reivindicación 6, en el que una dosis de dicha ciclosporina A se administra de manera que el nivel valle de ciclosporina A es al menos 200 ng/mL.

8. El uso de la reivindicación 6, en el que una dosis de dicha ciclosporina A se administra de manera que el nivel valle de ciclosporina A es al menos 300 ng/mL.

9. El uso de la reivindicación 6, en el que una dosis de dicha ciclosporina A se administra de manera que el nivel valle de ciclosporina A es al menos 500 ng/mL o mayor.

10. El uso de la reivindicación 5, en el que dicha ciclosporina A está presente en una cantidad de entre 0, 5 mg y 10 mg.

11. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho agente antiproliferativo es un nucleótido análogo.

12. El uso de la reivindicación 11, en el que dicho nucleótido análogo es un fármaco de 6-mercaptopurina.

13. El uso de la reivindicación 12, en el que dicho fármaco de 6-mercaptopurina es azatioprina.

14. El uso de la reivindicación 13, en el que dicha azatioprina se mantiene a una dosis de 1 a 5 mg/kg/día durante al menos dos semanas.

15. El uso de la reivindicación 13, en el que dicha azatioprina se mantiene a una dosis de 3 a 5 mg/kg/día.

16. El uso de la reivindicación 13, en el que la azatioprina se administra a una dosis de 1 a 3.

17. El uso de la reivindicación 13, en el que la azatioprina se administra a una dosis de 5 mg/kg cada dos días.

18. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho agente proliferativo es un fármaco antimetabolito.

19. El uso de la reivindicación 18, en el que dicho fármaco antimetabolito es un inhibidor de dihidrofolato reductasa u otras enzimas incluidas en el metabolismo nucleótido.

20. El uso de la reivindicación 18, en el que dicho fármaco antimetabolito es metrotexato, o un análogo de éste.

21. El uso de la reivindicación 13, en el que dicha azatioprina está formulada en una composición que comprende de 0, 5 mg a 10 mg.

22. El uso de la reivindicación 1, que comprende administrar una dosis efectiva de dicho tolerógeno al menos dos veces, opcionalmente al menos cuatro veces, durante el periodo de tolerización, en el que dicho tolerógeno se administra de manera preferente semanalmente.

23. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho tolerógeno es un conjugado de manosa-6-fosfato de un antígeno de interés.

24. El uso de la reivindicación 3, en el que dicho tolerógeno es un polipéptido terapéutico. 25. El uso de la reivindicación 24, en el que dicho polipéptido terapéutico comprende una fracción de absorción rápida y es aceptado por el receptor de manosa-6-fosfato (MSP) .

26. El uso de la reivindicación 25, en el que dicho polipéptido terapéutico es alfaglucosidasa o iduronidasa.

27. El uso de la reivindicación 24, en el que dicho polipéptido terapéutico es seleccionado entre un grupo que consiste en anticuerpos, factores de coagulación, enzimas y factores de crecimiento. 28. El uso de la reivindicación 24, en el que dicho polipéptido terapéutico es Factor VIII. 29. El uso de la reivindicación 28, en el que dicho Factor VIII es conjugado en una fracción de absorción rápida de

manosa-6-fosfato.

30. El uso de la reivindicación 29, en el que dicha fracción de absorción rápida es iduronidasa que comprende un marcador de absorción de rápida afinidad de manosa-6-fosfato en sus carbohidratos N-ligados. 31. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho tolerógeno comprende un antígeno de célula 1. 32. El uso de la reivindicación 31, en el que dicho antígeno de célula 1 es seleccionado desde el grupo que consiste

en ácido glutámico decarboxilasa (GAD) , IA2 e insulina. 33. El uso de la reivindicación 32, en el que el antígeno de célula 1 es GAD. 34. El uso de la reivindicación 33, en el que dicho GAD es conjugado a una fracción de absorción rápida de

manosa-6-fosfato. 35. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho tolerógeno es un autoantígeno. 36. El uso de la reivindicación 35, en el que dicho tolerógeno comprende una pluralidad de autoantígenos. 37. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho tolerógeno comprende un antígeno de trasplante. 38. El uso de la reivindicación 37, en el que dicho tolerógeno comprende una pluralidad de antígenos de trasplante. 39. Un kit que comprende un tolerógeno de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38, y un agente inmunosupresor

de célula T y un agente antiproliferativo, en el que el agente inmunosupresor de célula T es ciclosporina A, rapamicina o FK506, preferentemente ciclosporina A, y en el que el agente antiproliferativo es un fármaco antimetabolito o un nucleótido análogo, preferentemente azatioprina.