Gen transportador de taurina.

Un procedimiento de producción de un polipéptido, que comprende cultivar una célula que expresa fuertemente untransportador de taurina y tiene un ADN transferido que codifica un polipéptido deseado y,

de este modo, permite que lacélula produzca dicho polipéptido, en el que la célula que expresa fuertemente un transportador de taurina es una célulaen la que se ha transferido un ADN que codifica el transportador de taurina y en el que la célula es una célula de mamífero.

Gen transportador de taurina

Campo técnico

La presente invención se refiere a un procedimiento de producción de un polipéptido usando una célula que expresa 5 fuertemente un transportador de taurina.

Técnica anterior

Cuando se producen proteínas útiles como productos farmacéuticos con la técnica de ADN recombinante, el uso de células animales permite una modificación postraduccional complicada y un plegamiento que las células procariotas no pueden realizar. Por lo tanto, las células animales se usan frecuentemente como células huésped para producir proteínas recombinantes.

Recientemente, se han desarrollado un gran número de productos biofarmacéuticos, tales como anticuerpos y proteínas fisiológicamente activas. Las técnicas que permiten la producción eficaz de proteínas recombinantes por células animales conducen a la reducción de costes de los productos biofarmacéuticos y aseguran un suministro estable a los pacientes.

Bajo estas circunstancias, se desea un procedimiento de producción de proteínas con una mayor eficacia de producción.

La taurina es un tipo de aminoácido presente en altas concentraciones en peces, crustáceos y moluscos y es un nutriente importante para el crecimiento de mamíferos. Aunque la taurina no se usa en síntesis de proteínas, tiene muchas funciones tales como normalización de la hipercolesterolemia, reducción de la presión sanguínea, efecto desintoxicante, mantenimiento de la función inmunitaria, estabilización de membranas biológicas, regulación de la excitabilidad neuronal, antioxidación, etc. Se sabe que la taurina contribuye a la osmorregulación y la estabilización de la membrana celular en células cultivadas (en el documento distinto de patente 1) . Sin embargo, la adición de taurina al medio de cultivo primario de astrocitos donde estaba funcionando el transportador de taurina no hizo aumentar la incorporación en las células (en el documento distinto de patente 2) . Por tanto, la adición de taurina al medio sola fue insuficiente.

Por otro lado, se desconoce totalmente si la incorporación de taurina y otros aminoácidos en células cultivadas por medio del transportador de taurina contribuye o no a la mejora de la producción de una proteína recombinante deseada en las células cultivadas.

Se conocen varios transportadores de taurina (humano: documento distinto de patente 3; de ratón: documento distinto de patente 4; y de rata: documento distinto de patente 5) y su implicación en la incorporación de taurina y otros aminoácidos (p. ej., β-alanina) en células (en el documento distinto de patente 6) . Sin embargo, con respecto al transportador de taurina de hámster, se desconocía incluso su existencia todavía. 30 Documento no patente 1 Ian Henr y Lambert, Neurochemical Research (2004) 29 (1) , 27-63 Documento no patente 2 Journal of Neurochemistr y (2000) , 75 (3) , 919-924 Documento no patente 3 35 Uchida, S. et al., Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A (1992) 89 (17) , 8230-8234 Documento no patente 4 Liu, Q.R. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1992) 89 (24) , 12145-12149 Documento no patente 5 Smith, K.E. et al., Mol. Pharmacol. (1992) 42 (4) , 563-569

Documento no patente 6 Ryo Shioda et al., Investigative Ophthalmology & Visual Science (2002) 43 (9) , 2916 Divulgación de la invención Problema que ha de resolver la invención Es un objetivo de la presente invención proporcionar un procedimiento capaz de producir una proteína natural o 45 recombinante a coste bajo.

Medios para resolver el problema Como consecuencia de una investigación extensiva e intensiva dirigidas a la resolución del problema anterior, los presentes inventores han descubierto que se puede aumentar el rendimiento de un polipéptido deseado usando una célula que expresa fuertemente un transportador de taurina. Por tanto, se ha logrado la presente invención.

La presente invención se puede resumir como sigue.

(1) Un procedimiento de producción de un polipéptido, que comprende cultivar una célula que expresa fuertemente un transportador de taurina y tiene un ADN transferido que codifica un polipéptido deseado y, de este modo, permite que la célula produzca dicho polipéptido, en el que la célula que expresa fuertemente un transportador de taurina es una célula en la que se ha transferido un ADN que codifica el transportador de taurina y en el que la célula es una célula de mamífero.

(2) El procedimiento de (1) anterior, en el que la célula es una célula de ovario de hámster chino.

(3) El procedimiento de uno cualquiera de (1) a (2) anteriores, en el que el polipéptido deseado es un anticuerpo.

(4) El procedimiento de uno cualquiera de (2) a (3) anteriores, en el que el ADN que codifica el transportador de taurina es uno cualquiera de los siguientes (a) a (e) :

(a) un ADN que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos como se muestra en las SEQ ID NO: 15 2, 4, 6 u 8;

(b) un ADN que codifica un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos derivada de la secuencia de aminoácidos como se muestra en las SEQ ID NO: 2, 4, 6 u 8 por sustitución, deleción, adición y/o inserción de uno o más residuos de aminoácido y que aun así tiene actividad transportadora de taurina;

(c) un ADN que codifica un polipéptido que tiene un 70 % o más de homología de secuencia de aminoácidos con la

secuencia de aminoácidos como se muestra en las SEQ ID NO: 2, 4, 6 u 8 y que aun así tiene actividad transportadora de taurina;

(d) un ADN que tiene la secuencia de nucleótidos como se muestra en las SEQ ID NO: 1, 3, 5 o 7;

(e) un ADN que hibrida con un ADN complementario a un ADN que tiene la secuencia de nucleótidos como se

muestra en la SEQ ID NO: 1, 3, 5 o 7 bajo condiciones rigurosas y aun así codifica un polipéptido que tiene actividad 25 transportadora de taurina.

(5) El procedimiento de uno cualquiera de (1) a (4) anteriores, que comprende cultivas las células en un medio con una concentración de taurina de 0 a 100 g/l.

(6) Un procedimiento de preparación de un producto farmacéutico que contiene un polipéptido deseado, que comprende las etapas de:

preparar un polipéptido mediante el procedimiento de uno cualquiera de (1) a (5) y

mezclar dicho polipéptido con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

(7) Una célula de mamífero en la que se ha transferido un ADN que codifica un transportador de taurina y aun así tiene un ADN transferido que codifica un polipéptido deseado.

También se divulga un ADN que codifica un transportador de taurina, que es uno cualquiera de los siguientes (a) a (e) , con la condición de que se excluyan el ADN que tiene la secuencia de nucleótidos como se muestra en la SEQ ID NO: 3, el ADN que tiene la secuencia de nucleótidos como se muestra en la SEQ ID NO: 5 y el ADN que tiene la secuencia de nucleótidos como se muestra en la SEQ ID NO: 7:

(a) un ADN que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos como se muestra en la SEQ ID NO: 2;

(b) un ADN que codifica un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos derivada de la secuencia de aminoácidos como se muestra en la SEQ ID NO: 2 por sustitución, deleción, adición y/o inserción de uno o más residuos de aminoácido y que aun así tiene actividad transportadora de taurina,

(c) un ADN que codifica un polipéptido que tiene un 97% o más de homología de secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos como se muestra en la SEQ ID NO: 2 y que aun así tiene actividad transportadora de 45 taurina;

(d) un ADN que tiene la secuencia de nucleótidos como se muestra en la SEQ ID NO: 1;

(e) un ADN que hibrida con un ADN complementario a un ADN que tiene la secuencia de nucleótidos como se muestra en la SEQ ID NO: 1 bajo condiciones rigurosas y aun así codifica un polipéptido que tiene actividad

transportadora de taurina.

También se divulga un polipéptido que es uno cualquiera de los siguientes (A) a (E) , con la condición de que se excluyan un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos como se muestra en la SEQ ID NO: 4, un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos como se muestra en la SEQ ID NO: 6 y un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos como se muestra en la SEQ ID NO: 8.

(A) un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos como se muestra en la SEQ ID NO: 2;

(B) un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos derivada de la secuencia de aminoácidos como se muestra en la SEQ ID NO: 2 por sustitución, deleción, adición y/o inserción de uno o más residuos de aminoácido y que aun así tiene... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de producción de un polipéptido, que comprende cultivar una célula que expresa fuertemente un transportador de taurina y tiene un ADN transferido que codifica un polipéptido deseado y, de este modo, permite que la célula produzca dicho polipéptido, en el que la célula que expresa fuertemente un transportador de taurina es una célula en la que se ha transferido un ADN que codifica el transportador de taurina y en el que la célula es una célula de mamífero.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la célula es una célula de ovario de hámster chino.

3. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2, en el que el polipéptido deseado es un anticuerpo.

4. El procedimiento de la reivindicación 2 o 3, en el que el ADN que codifica el transportador de taurina es uno cualquiera de los siguientes (a) a (e) :

(a) un ADN que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en las SEQ ID NO: 2, 4, 6 u 8;

(b) un ADN que codifica un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos derivada de la secuencia de aminoácidos mostrada en las SEQ ID NO: 2, 4, 6 u 8 por sustitución, deleción, adición y/o inserción de uno o más residuos de aminoácido y que aun así tiene actividad transportadora de taurina;

(c) un ADN que codifica un polipéptido que tiene un 70% o más de homología de secuencia de aminoácidos con la

secuencia de aminoácidos mostrada en las SEQ ID NO: 2, 4, 6 u 8 y que aun así tiene actividad transportadora de taurina;

(d) un ADN que tiene la secuencia de nucleótidos mostrada en las SEQ ID NO: 1, 3, 5 o 7.

(e) un ADN que hibrida con un ADN complementario a un ADN que tiene la secuencia de nucleótidos mostrada en las

SEQ ID NO: 1, 3, 5 o 7 bajo condiciones rigurosas y aun así codifica un polipéptido que tiene actividad transportadora 20 de taurina.

5. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende cultivar las células en un medio con una concentración de taurina de 0 a 100 g/l.

6. Un procedimiento de preparación de un producto farmacéutico que contiene un polipéptido deseado, que comprende las etapas de:

preparar un polipéptido mediante el procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y mezclar dicho polipéptido con un transportador farmacéuticamente aceptable.

7. Una célula de mamífero en la que se ha transferido un ADN que codifica un transportador de taurina y aun así tiene un ADN transferido que codifica un polipéptido deseado.