Formulación de proteína liofilizada isotónica estable.

Formulación que comprende una mezcla liofilizada de un lioprotector y un anticuerpo,

en la que la proporciónmolar de lioprotector:anticuerpo es 200-600 moles de lioprotector:1 mol de anticuerpo, en la que el lioprotector estrehalosa o sacarosa y en la que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.

Formulación de proteína liofilizada isotónica estable Antecedentes de la invención Campo de la invención [0001] La presente invención se refiere a una formulación de proteína liofilizada. En particular, se refiere a una formulación de proteína liofilizada estable que se puede reconstituir con un diluyente para generar una formulación reconstituida estable adecuada para la administración subcutánea.

Descripción de documentos relacionados [0002] En los últimos diez años, los avances en biotecnología han posibilitado producir un conjunto de proteínas para aplicaciones farmacéuticas utilizando técnicas de ADN recombinante. Dado que las proteínas son más grandes y más complejas que los fármacos orgánicos e inorgánicos tradicionales (es decir, poseen múltiples grupos funcionales además de estructuras tridimensionales complejas) , la formulación de dichas proteínas plantea problemas especiales. Para que una proteína permanezca biológicamente activa, una formulación debe conservar intacta la integridad conformacional de por lo menos una secuencia central de los aminoácidos de la proteína, a la vez que protege los múltiples grupos funcionales de la proteína de la degradación. Los mecanismos de degradación para las proteínas pueden implicar la inestabilidad química (es decir, cualquier proceso que implica la modificación de la proteína mediante la formación de enlaces o la escisión que dan lugar a una nueva entidad química) o inestabilidad física (es decir, cambios en la estructura de orden superior de la proteína) . La inestabilidad química puede resultar de la desamidación, racemización, hidrólisis; oxidación, beta eliminación o intercambio de enlaces disulfuro. La inestabilidad física puede resultar de la desnaturalización, agregación, precipitación o adsorción, por ejemplo. Los tres mecanismos de degradación de proteínas más comunes son la agregación, desamidación y oxidación de proteínas. Cleland et at. Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 10 (4) : 307-377 (1993) .

La liofilización es una técnica utilizada habitualmente para conservar proteínas que sirve para extraer el agua de la preparación de proteína de interés. El secado por congelación, o liofilización, es un proceso por el cual el material a secar primero se congela y a continuación se extrae el hielo o el disolvente congelado mediante sublimación en un medio de vacío. Se puede incluir un excipiente en formulaciones preliofilizadas para aumentar la estabilidad durante el proceso de liofilizado y/o para mejorar la estabilidad del producto liofilizado tras el almacenamiento. Pikal, M. Biopharm. 3 (9) 26-30 (1990) y Arakawa et al. Pharm. Res. 8 (3) : 285-291 (1991) .

El documento EP-A-661060 está dirigido a formulaciones de inmunoglobulina tolerables IV estables que tienen un contenido de Ig de 13, 5-17, 5% p/v, con una osmolaridad de 250-600 mOs/l, y una viscosidad no superior a 9 cP. Se indica que se puede utilizar como una preparación altamente concentrada sin una viscosidad excesivamente elevada, que es un problema para la administración IV. El problema es por tanto la viscosidad de la formulación resultante y no con la fabricación de la propia formulación. Aunque se menciona la posibilidad de liofilización, no se ejemplifica, y no se reconoce ningún problema que se pueda asociar con la misma.

Un objetivo de la presente invención es proporcionar una formulación de proteína liofilizada que es estable tras el almacenamiento y la liberación. Se describe en el presente documento una formulación de proteína reconstituida estable que sea adecuada para la administración subcutánea. En ciertas realizaciones, un objetivo es proporcionar una formulación con múltiples usos que sea estable durante por lo menos el tiempo durante el cual se administrará a un paciente.

Descripción resumida de la invención [0006] La presente invención se basa en el descubrimiento de que se puede preparar una formulación de proteína liofilizada estable utilizando un lioprotector (preferiblemente un azúcar, tal como sacarosa o trehalosa) , cuya formulación liofilizada se puede reconstituir para generar una formulación reconstituida estable que tiene una concentración de proteína que es significativamente superior (por ejemplo, de aproximadamente 2-40 veces superior, preferiblemente 3-10 veces superior y los más preferiblemente 3-6 veces superior) que la concentración de proteína en la formulación preliofilizada. En particular, aunque la concentración de proteína en la formulación preliofilizada puede ser 5 mg/ml o menos, la concentración de proteína en la formulación reconstituida es generalmente 50 mg/ml o más. Dichas concentraciones elevadas de proteína en la formulación reconstituida se consideran particularmente útiles cuando la formulación está destinada a administración subcutánea. A pesar de la concentración muy elevada de proteína en la formulación reconstituida, se ha observado que la formulación reconstituida es estable (es decir, no muestra niveles significativos o inaceptables de inestabilidad química o física de la proteína) a 2-8ºC durante por lo menos aproximadamente 30 días. En ciertas realizaciones, la formulación reconstituida es isotónica. A pesar del uso de concentraciones más bajas del lioprotector para conseguir dichas formulaciones isotónicas tras la reconstitución, se descubrió en el presente documento que la proteína en la formulación liofilizada mantiene esencialmente su estabilidad física y química y la integridad tras la liofilización y el

almacenamiento.

Cuando se reconstituye con un diluyente que comprende un conservante (tal como agua bacteriostática para inyección, BWFI) , la formulación reconstituida se puede utilizar como una formulación de múltiples usos. Dicha formulación es útil, por ejemplo, cuando el paciente requiere administraciones subcutáneas frecuentes de la proteína para tratar una afección médica crónica. La ventaja de una formulación de múltiples usos es que facilita el uso para el paciente, reduce pérdidas al permitir el uso completo del contenido de viales, y da lugar a un ahorro de costes significativo para el fabricante ya que varias dosis están empaquetadas en un único vial (menos costes de relleno y transporte) .

Se describe en el presente documento una formulación reconstituida isotónica que comprende una proteína en una cantidad de por lo menos aproximadamente 50 mg/ml y un diluyente, cuya formulación reconstituida se ha preparado a partir de una mezcla liofilizada de una proteína y un lioprotector, en la que la concentración de proteína en la formulación reconstituida es aproximadamente 2-40 veces superior a la concentración de proteína en la mezcla antes de la liofilización.

Se describe en el presente documento una formulación reconstituida estable que comprende un anticuerpo en una cantidad de por lo menos aproximadamente 50 mg/ml y un diluyente, cuya formulación reconstituida se ha preparado a partir de una mezcla liofilizada de un anticuerpo y un lioprotector, en la que la concentración de anticuerpo en la formulación reconstituida es aproximadamente 2-40 veces superior a la concentración de anticuerpo en la mezcla antes de la liofilización.

La proporción de lioprotector:proteína en la formulación liofilizada de los párrafos anteriores depende, por ejemplo, de la proteína y el lioprotector de elección, así como de la concentración de proteína y la isotonicidad de la formulación reconstituida deseadas. En el caso de un anticuerpo de longitud completa (como la proteína) y trehalosa o sacarosa (como el lioprotector) para generar una formulación reconstituida isotónica de concentración de proteína elevada, la proporción puede ser, por ejemplo, 200-600 moles de trehalosa o sacarosa: 1 mol de anticuerpo.

En general, la formulación preliofilizada de la proteína y el lioprotector incluirá además un tampón que proporciona a la formulación un pH adecuado, dependiendo de la proteína en la formulación. Para este objetivo, se ha encontrado que es deseable utilizar un tampón de histidina ya que, tal como se demuestra a continuación, éste parece tener propiedades lioprotectoras.

La formulación puede incluir además un tensoactivo (por ejemplo, un polisorbato) ya que se ha observado en el presente documento que éste puede reducir la agregación de la proteína reconstituida y/o reducir la formación de partículas en la formulación reconstituida. El tensoactivo se puede añadir, según se desee, a la formulación preliofilizada, la formulación liofilizada y/o la formulación reconstituida (pero preferiblemente la formulación preliofilizada) .

Se describe en el presente documento un método de preparación de una formulación... [Seguir leyendo]

1. Formulación que comprende una mezcla liofilizada de un lioprotector y un anticuerpo, en la que la proporción molar de lioprotector:anticuerpo e.

20. 600 moles de lioprotector:1 mol de anticuerpo, en la que el lioprotector es 5 trehalosa o sacarosa y en la que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.

2. Formulación, según la reivindicación 1, en la que el anticuerpo es un anticuerpo anti-HER2 o un anticuerpo anti-IgE.

3. Formulación, según la reivindicación 2, en la que el anticuerpo está humanizado.

4. Formulación, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la formulación comprende un tensoactivo.

5. Formulación, según la reivindicación 4, en la que el tensoactivo es polisorbato 20.

6. Formulación, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la formulación comprende un tampón.

7. Formulación, según la reivindicación 6, en la que el tampón es un tampón de histidina o un tampón de succinato. 20

8. Método de preparación de una formulación, comprendiendo el método las etapas de:

(a) liofilizar una mezcla de un lioprotector y un anticuerpo, en la que la proporción molar de lioprotector:anticuerpo es 200-600 moles de lioprotector:1 mol de anticuerpo, en la que el lioprotector es trehalosa o sacarosa y en la que el 25 anticuerpo es un anticuerpo monoclonal; y

(b) reconstituir la mezcla liofilizada de la etapa (a) en un diluyente, de manera que la formulación reconstituida es isotónica y estable y tiene una concentración de anticuerpo de por lo menos 50 mg/ml, en la que la concentración de anticuerpo en la formulación reconstituida es aproximadamente 2-40 veces mayor que la concentración de anticuerpo en la mezcla antes de la liofilización.

9. Método, según la reivindicación 8, en el que el anticuerpo es un anticuerpo anti-HER2 o un anticuerpo anti-IgE.

10. Método, según la reivindicación 8 ó 9, en el que la formulación comprende un tampón. 35 11. Método, según la reivindicación 10, en el que el tampón es un tampón de histidina o succinato.