Fármaco para fomentar la regeneración de tejidos.

Fármaco para uso local para fomentar la regeneración de tejidos,

caracterizado en que

- contiene micropartículas que derivan de trombocitos y son obtenibles mediante un tratamiento activadorde los trombocitos con trombina, colágeno, el ionóforo de Ca2+ A23187 y/o la proteína C5b-9 en soluciónacuosa y se han purificado mediante centrifugación diferencial, filtración o cromatografía de afinidad,

- se han sometido a un procedimiento de inactivación de virus y/o disminución de virus,

- y que se alcanzó la esterilidad mediante filtración estéril, y que

- está en un estado liofilizado o ultracongelado.

Fármaco para fomentar la regeneración de tejidos La presente invención se refiere a un fármaco para uso local para fomentar la regeneración de tejidos, especialmente tejido óseo.

Las células eucariotas mediante la estimulación adecuada pueden liberar partes de su membrana plasmática en el espacio extracelular. Estos fragmentos celulares contienen fracciones citoplásmicas y se denominan micropartículas. La formación de tales micropartículas se puede verificar en monocitos, linfocitos, células endoteliales, granulocitos y trombocitos. Por ejemplo, en trombocitos mediante estimulación con colágeno, trombina, el ionóforo de calcio A23187 y la proteína del sistema del complemento C5b-9 se produce la separación de tales elementos celulares (Tans G., Blood 1991; Sims PJ., J Biol Chem 1988) . Además de las sustancias mencionadas, que producen un cambio en la concentración de calcio intracelular, se describen también la fosforilación de proteínas, la translocación de fosfolípidos, cambios en el citoesqueleto y fuerzas de cizalla en la formación de micropartículas trombocíticas.

Las micropartículas de trombocitos tienen características que pueden producir no solo una aceleración sino también una desaceleración de la coagulación sanguínea. Mediante la unión de alta afinidad de los factores que inducen la coagulación VIII, un cofactor de los complejos enzimáticos de tenasa, y Va, que junto con el factor Xa constituye el complejo protrombinasa, las micropartículas se dotan de una función de fomento de la coagulación. La unión de los factores a la superficie de las micropartículas se realiza mediante fosfatidilserina, un fosfolípido de la membrana celular. Por el contrario, la acumulación de “proteína S” produce una inactivación de los factores de coagulación Va y VIII, así como una unión de la proteína C y de la “proteína C activada”, por lo cual se puede deducir una propiedad anticoagulante de las micropartículas (Tans G., Blood 1991) . En comparación con los trombocitos activados las micropartículas muestran un mayor número de sitios de unión para los factores de coagulación IXa (Hoffman, M., Thrombin Haemost 1992) y Va (Sims PJ., JBC 1988) . Además, las glicoproteínas GP IIb/IIIa, Ib, IaIIa y P-selectina en la superficie celular permiten la unión de las micropartículas el endotelio vascular (George JN JCI 1986; Gawaz M, Aterioscler Thromb Vasc Biol 1996) . Además de la activación de células endoteliales también se pudo demostrar la activación de monocitos y trombocitos por las micropartículas (Barr y OP; Thromb Haemat 1999) .

Se observaron concentraciones aumentadas de micropartículas en el torrente sanguíneo en esas enfermedades asociadas con una activación de trombocitos.

Una de las funciones más importantes del sistema inmunitario es dirigir leucocitos a la proximidad de la infección y del tejido dañado. Para ello los leucocitos circulan a lo largo de la pared endotelial y se produce su inmigración en el área de infección de la herida mediante integrinas y selectinas. Las micropartículas fomentan la acumulación de los leucocitos “rodantes” mediante P-selectina y pueden contribuir de esta manera a una hemostasia y reacción a la infección reforzadas (Forlow B, Blood 2000) . También se pudo demostrar la unión reforzada de monocitos al endotelio mediante micropartículas (Barr y OP, JCI 1997) . Un trabajo adicional pudo mostrar que las micropartículas de trombocitos producen una proliferación aumentada de células de músculo liso de vasos (Weber AA, Thromb Res 2000) .

Los trombocitos son los componentes sanguíneos más pequeños en el organismo humano y pueden reaccionar a estímulos químicos y físicos. En el caso de una lesión vascular se provoca que los trombocitos agreguen en las superficies endoteliales descubiertas y que secreten una gran cantidad de sustancias biológicamente activas. Entre ellos se cuentan el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) , el factor de crecimiento transformante-β (TGF-β) , factor de crecimiento epidérmico (EGF) , pero también metabolitos del ácido araquidónico, como prostaglandina D2/E2 y tromboxano A2, y también micropartículas.

Se supone que mediante la liberación de las micropartículas se fomenta la formación del coágulo de fibrina y la inmigración de células inflamatorias en el área de la herida. Los granulocitos neutrófilos y los macrófagos secretan por su parte factores de crecimiento que, a su vez, dirigen leucocitos, fibroblastos y células endoteliales al coágulo de fibrina. Los macrófagos descomponen el tejido destruido y fomentan la proliferación y la síntesis de colágeno de tipo I, mediante lo cual se inicia la formación del denominado tejido de granulación. Con esto se refiere a un tejido conjuntivo fibroso que sustituye al tejido original. En paralelo surgen vasos y se produce la epitelización del área de la herida. La formación de un tejido cicatricial duradero, rico en colágeno y pobre en células constituye el fin de la cicatrización, un proceso que puede durar semanas, pero también meses.

Puesto que un tejido cicatricial no muestra las características originales, en la curación de tejidos blandos se habla de reparación pero no de regeneración (Bennet NT et al. Am. J. Surg. 1993, 165: 728-737; Bennet NT et al. AM. J. Surg. 1993, 166: 74-81) .

Sin embargo, hay deficiencias de la cicatrización que se pueden producir por numerosas causas. La hiperglucemia impide la cicatrización probablemente debido a una inhibición de la proliferación de células endoteliales y fibroblastos (Goodson WH, J Surg Res 1977 22: 221-227) . Los niveles de azúcar aumentados reducen además la función de los leucocitos lo que produce que la herida permanezca en la fase de infección. Además, el grado de

gravedad del traumatismo precedente también puede ser causa de un resultado desfavorable de la cicatrización (Holzheimer RG, 1966, Zentralbl Chir 121:231) .

Al contrario que para la formación de un tejido cicatricial en las heridas en tejidos blandos (reparación) , después de la rotura de huesos o después de trasplante de huesos la estructura del tejido original se restablece totalmente (regeneración) . En principio los procesos regenerativos de los huesos se parecen al esquema de curación de la cicatrización de tejidos blandos: inmediatamente después de la lesión se produce, entre otros, la liberación de PDGF y TGF-β por los trombocitos que se desgranulan, seguido por la inmigración de macrófagos y otras células inflamatorias, que también secretan PDGF, TGF-β, y además también factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) , interleuquina-1 (IL-1) e IL-6. En general se asume que esta compleja cooperación de factores de crecimiento junto con el entramado de fibrina que se está formando representa el proceso inicial de la curación de los huesos en donde los tejido próximos, como la médula ósea, periostio y tejidos blandos, tienen una participación determinante en la regeneración.

Además de la reorganización de las células de la médula ósea en zonas de densidades diferentes, se estimula la división celular y la diferenciación de los osteoblastos que revisten los huesos y los preosteoblastos del cambium. El hueso entretejido de nueva formación mediante estos procesos se denomina callo duro. Además de la osificación directa se produce la inmigración de células mesenquimatosas indiferenciadas del periostio y de fibroblastos del tejido blando circundante en el hematoma. Después de una extensa fase de división se produce un tejido cartilaginoso, el callo blando, cuyas células se hipertrofian, mineralizan y se sustituyen por huesos entretejidos tras el surgimiento de vasos. El último paso para la reconstitución completa de la estructura original del hueso es la transformación del hueso entretejido en hueso lamelar mediante osteoblastos/actividad de osteoblastos. Este proceso se denomina osificación indirecta ya que el cartílago formado primero se debe sustituir por hueso (Barnes et al., JBMR 1999, 11:1805-1815) .

La curación de las fracturas de hueso no transcurre siempre sin problemas: infecciones, enfermedades sistémicas (por ejemplo, osteoporosis) , enfermedades metabólicas (por ejemplo, diabetes mellitus) , defectos genéticos (por ejemplo, osteogénesis imperfecta) y tratamientos farmacéuticos (terapia de glucocorticoides) pueden ser la causa de una regeneración retrasada.

Además de la curación de fracturas, el trasplante de hueso autólogo y de materiales sustitutos de hueso para procesos aumentativos o para el relleno de defectos del hueso tiene una importancia creciente. También en este caso sería deseable una aceleración de la regeneración y una mejora... [Seguir leyendo]

1. Fármaco para uso local para fomentar la regeneración de tejidos, caracterizado en que - contiene micropartículas que derivan de trombocitos y son obtenibles mediante un tratamiento activador de los trombocitos con trombina, colágeno, el ionóforo de Ca2+ A23187 y/o la proteína C5b-9 en solución acuosa y se han purificado mediante centrifugación diferencial, filtración o cromatografía de afinidad,

-se han sometido a un procedimiento de inactivación de virus y/o disminución de virus, -y que se alcanzó la esterilidad mediante filtración estéril, y que

-está en un estado liofilizado o ultracongelado.

2. Fármaco según la reivindicación 1, caracterizado en que contiene sustancias solubles o insolubles que fomentan la cicatrización.

3. Fármaco según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, caracterizado en que contiene citoquinas y/o factores de crecimiento.

4. Fármaco según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 caracterizado en que contiene una sustancia que representa o puede formar una matriz extracelular provisional. 20

5. Fármaco según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 caracterizado en que contiene colágeno.

6. Fármaco según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 caracterizado en que para la construcción de un

andamiaje de fibrina contiene fibrinógeno y trombina. 25

7. Fármaco según la reivindicación 4 caracterizado en que como matriz extracelular provisional se prevé un polímero orgánico, especialmente una polilactona.

8. Fármaco según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 caracterizado en que contiene compuestos 30 inorgánicos.

9. Producto farmacéutico caracterizado en que contiene:

-un fármaco según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 .

35. un material biocompatible que se usa junto con el fármaco.