Extracto de polisacáridos de Dendrobium para el tratamiento de enfermedades alérgicas.

Polisacáridos extraídos de Dendrobii Herba para uso en el tratamiento de una enfermedad alérgica.

Extracto de polisacáridos de Dendrobium para el tratamiento de enfermedades alérgicas

Campo técnico

La presente invención se refiere al tratamiento de enfermedades alérgicas con polisacáridos aislados de Dendrobium.

Antecedentes Dendrobium es un género de orquídeas tropicales ampliamente distribuida en Asia, Europa y Australia. Algunas de sus especies tienen una larga historia de uso en la medicina tradicional china para mejorar la calidad de la piel y de la visión. También se ha informado de que Dendrobium exhibe actividad antioxidante, antiinflamatoria, y de inmunorregulación. Véase Satoh et al., Biochem. Pharmacol. 51: 339 - 343, 1996; Yamaguchi et al., Cordyceps sinensis.. Phytoher. Res. 14: 647 - 649, 2000; Zhao et al., J. Biochem. Molecular Bio. 40 (5) : 670 - 677 2007, y US 20060251739.

Resumen de la invención La presente invención se basa en los descubrimientos inesperados de que los polisacáridos preparados a partir de Dendrobii Herba (es decir, tallo de Dendrobium) son efectivos en el tratamiento de enfermedades alérgicas tales como el asma, alergia al polen, y dermatitis atópica.

En consecuencia, la presente invención proporciona polisacáridos preparados a partir de Dendrobii Herba para uso en el tratamiento de enfermedades alérgicas (por ejemplo, asma, alergia al polen, conjuntivitis alérgica, o dermatitis atópica) mediante la administración (por ejemplo, por vía oral) a un individuo de una cantidad efectiva del mismo.

El término "tratamiento" como se usa aquí se refiere a la aplicación o administración de una composición que incluye uno o más agentes activos a un individuo, que tiene una enfermedad alérgica, un síntoma de la enfermedad alérgica, o una predisposición hacia la enfermedad alérgica, con el propósito de curar, sanar, aliviar, mitigar, alterar, remediar, aliviar, mejorar, o afectar la enfermedad, los síntomas de la enfermedad, o la predisposición hacia la enfermedad. "Una cantidad efectiva" como se usa aquí se refiere a la cantidad de cada agente activo requerida para conferir un efecto terapéutico al individuo, ya sea sola o en combinación con uno o más agentes activos. Las cantidades eficaces varían, como lo reconocen aquellos capacitados en la técnica, dependiendo de la vía de administración, del uso de excipientes, y del uso al mismo tiempo con otros agentes activos.

En un ejemplo, los polisacáridos utilizados para la práctica del método de esta invención se preparan mediante un procedimiento que incluye al menos las siguientes cinco etapas: (i) remojar una primera preparación de Dendrobii Herba en un primer alcohol (por ejemplo, metanol, etanol, o una mezcla de los mismos) , (ii) remover el primer alcohol para producir una segunda preparación de Dendrobii Herba; (iii) extraer la segunda preparación de Dendrobii Herba con agua (es decir, agua pura o en un disolvente adecuado que contiene agua) para obtener una solución acuosa; (iv) mezclar la disolución acuosa con un segundo alcohol (por ejemplo, etanol al 50% en volumen) para permitir la precipitación de los polisacáridos, y (v) recoger los polisacáridos precipitados.

La presente invención proporciona además los polisacáridos descritos anteriormente para uso en la reducción de la remodelación de las vías respiratorias como resultado de la inflamación mediante la administración a un individuo que requiera del mismo de una cantidad efectiva del mismo.

Los detalles de una o más realizaciones de la invención se exponen en la siguiente descripción. Otras características, objetivos y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la descripción y de las reivindicaciones.

Breve descripción de los dibujos En los dibujos:

La FIG. 1 es un diagrama que muestra el efecto de Dendrobii Herba sobre la prueba de AHR de los ratones para el Ejemplo 2, en términos del nivel relativo de pench ( Penh) como el registrado y analizado por el sistema Buxco XA. El grupo negativo (n = 6, ) era de ratones sanos. El grupo de control (n = 10, ) se sensibilizó con OVA pero sin tratamiento con Dendrobii Herba. Los grupos de tratamiento sensibilizados con OVA fueron alimentados con una dosis de 10 mg/kg/día (n = 8, ) , 30 mg/kg/día (n = 8, ) , y 90 mg/kg/día (n = 8, ) , El Penh se registró y analizó mediante el sistema Buxco XA. * indica p <0, 05.

La FIG. 2 es un diagrama que muestra el número total de células contadas en BALF a partir de los ratones en el Ejemplo 2. El grupo negativo (n = 6, ) era de ratones sanos. El grupo de control (n = 10, ) , se sensibilizó con 5 OVA pero sin tratamiento con Dendrobii Herba. Los grupos de tratamiento sensibilizados con OVA fueron

alimentados con una dosis de 10 mg/kg/día (n = 8, ) , 30 mg/kg/día (n = 8, ) , y 90 mg / kg / día (n = 8, ) , * indica p < 0, 05.

La FIG. 3 es un diagrama que muestra el porcentaje de leucocitos en BALF de los ratones en el Ejemplo 2. La parte A a C representa el resultado del porcentaje de los monocitos, linfocitos y eosinófilos, respectivamente, en BALF. El 10 grupo negativo (n = 6, ) era de ratones sanos. El grupo de control (n = 10, ) , se sensibilizó con OVA pero sin tratamiento con Dendrobii Herba . Los grupos de tratamiento sensibilizados con OVA fueron alimentados con una

dosis de 10 mg/kg/día (n = 8, ) , 30 mg/kg/día (n = 8, ) , y 90 mg/kg/día (n = 8, ) , * indica p <0, 05.

La FIG. 4 es un diagrama que muestra la coloración con hematoxilina y eosina (H & E) de las secciones de pulmón de los ratones en el Ejemplo 2. Se removió el tejido de pulmón de los ratones, luego se los fijó con formalina al 10%.

Tres días más tarde, se embebió posteriormente el pulmón en parafina y se lo cortó en secciones de 5 µm de espesor. La parte A hasta E representaba los cinco grupos en el Ejemplo 2: el grupo normal (ratones sanos como control negativo) , el grupo de control (ratones que fueron sensibilizados con OVA pero sin tratamiento con Dendrobii Herba) , los grupos de tratamiento sensibilizados con OVA fueron alimentados con una dosis de 10 mg/kg/día (n = 8) , 30 mg/kg/día (n = 8) y 90 mg/kg/día (n = 8) , respectivamente. La ampliación es de 100x.

La FIG. 5 es un diagrama que muestra el porcentaje de células reguladoras T en los linfocitos de la lámina propia intestinal de los ratones en el Ejemplo 2. Las proporciones de células CD4+CD25+ fueron analizadas por citometría de flujo. El grupo negativo (n = 6, ) era de ratones sanos. El grupo de control (n = 10, ) se sensibilizó con OVA pero sin tratamiento con Dendrobii Herba . Los grupos de tratamiento sensibilizados con OVA fueron alimentados con

una dosis de 10 mg/kg/día (n = 8, ) , 30 mg/kg/día (n = 8, ) , y 90 mg/kg/día (n = 8, ) , * indica p < 0, 05.

La FIG. 6 es un diagrama que muestra los efectos de Dendrobii Herba sobre los niveles de IgE específicos de OVA de los ratones en el Ejemplo 2. La parte A representa el resultado del nivel en suero, y la parte B representa el resultado del nivel en BALF. El grupo negativo (n = 6, ) fue de ratones sanos. El grupo de control (n = 10, ) se sensibilizó con OVA pero sin tratamiento con Dendrobii Herba . Los grupos de tratamiento sensibilizados con OVA

fueron alimentados con una dosis de 10 mg/kg/día (n = 8, ) , 30 mg/kg/día (n = 8, ) y 90 mg/kg/día (n = 8,

) , 30 ** indica p < 0, 01.

La FIG. 7 es un diagrama que muestra los resultados de RT-PCR de tejido pulmonar completo de los ratones en el Ejemplo 2. La parte A hasta E representa los resultados del nivel de expresión génico de IL-13, eotaxina-1, 3dioxigenasa (IDO) , IL-17, y linfopoyetina estromal tímica (TSLP) , respectivamente. Todo el nivel de expresión de

ARNm se normaliza a ARNm de º-actina. El grupo negativo (n = 6, ) fue de ratones sanos. El grupo de control (n 35 = 10,

) , se sensibilizó con OVA pero sin tratamiento con Dendrobii Herba . Los grupos de tratamiento

sensibilizados con OVA fueron alimentados con una dosis de 10 mg/kg/día (n = 8, ) , 30 mg/kg/día (n = 8, ) y

mg/kg/día (n = 8, ) * indica p < 0, 05.

La FIG. 8A es una fotografía que muestra los ojos inflamados de los ratones normales sin sensibilización 24 horas después del desafío.

La FIG. 8B es una fotografía que muestra los ojos inflamados de los ratones de control, que están inmunizados en forma activa pero sin tratamiento de polisacáridos 24 horas después del desafío.

La FIG. 8C es una fotografía que muestra los ojos inflamados de los ratones inmunizados en forma activa a los que se les administró en forma oral 30 mg/kg/día de polisacáridos extraídos de Dendrobii Herba.

La FIG. 8D es una fotografía que muestra los ojos inflamados de los ratones inmunizados... [Seguir leyendo]

1. Polisacáridos extraídos de Dendrobii Herba para uso en el tratamiento de una enfermedad alérgica.

2. El polisacárido de la reivindicación 1 para el uso de la reivindicación 1, en donde la enfermedad alérgica está asociada con un mayor nivel de eosinófilos, IgE, una quimioquina, y/o una citoquina Th2.

3. Los polisacáridos de la reivindicación 1 para el uso de la reivindicación 1, en donde la enfermedad alérgica es al menos una seleccionada del grupo que consiste de asma, alergia por polen, conjuntivitis alérgica, dermatitis atópica, y cualquier combinación de las mismas.

4. Los polisacáridos de la reivindicación 1 para el uso de la reivindicación 1, en donde los polisacáridos se administran en forma oral.

5. Los polisacáridos de la reivindicación 1 para el uso de la reivindicación 1, en donde los polisacáridos se preparan por medio de un proceso que comprende las etapas de:

(a) remojar una primera preparación de Dendrobii Herba en un primer alcohol;

(b) remover el primer alcohol para producir una segunda preparación de Dendrobii Herba;

(c) extraer la segunda preparación de Dendrobii Herba con agua o con un disolvente que contiene agua para obtener una disolución acuosa que contiene polisacáridos extraídos;

(d) mezclar la disolución acuosa que contiene los polisacáridos extraídos con un segundo alcohol para precipitar los polisacáridos; y

(e) recoger los polisacáridos precipitados.

6. El polisacárido de la reivindicación 5 para el uso de la reivindicación 1, en donde el primer alcohol es al menos uno seleccionado del grupo que consiste de metanol, etanol, y cualquier combinación de los mismos.

7. Los polisacáridos de la reivindicación 5 para el uso de la reivindicación 1, en donde la segunda preparación de Dendrobii Herba se extrae con agua.

8. Los polisacáridos de la reivindicación 5 para el uso de la reivindicación 1, en donde el segundo alcohol es etanol.

9. Los polisacáridos de la reivindicación 8 para el uso de la reivindicación 1, en donde el etanol tiene una concentración en el rango de 30 porciento (p/v) a 70 porciento (p/v) , preferiblemente al menos de 50 porciento (p/v) .

10. Los polisacáridos extraídos de Dendrobii Herba para uso en la reducción de la remodelación de las vías respiratorias causada por inflamación.

11. El polisacárido de la reivindicación 10 para el uso de la reivindicación 10, en donde los polisacáridos se administran en forma oral.

12. Los polisacáridos de la reivindicación 10 para el uso de la reivindicación 10, en donde los polisacáridos se preparan por medio de un proceso que contiene las etapas de:

(a) remojar una primera preparación de Dendrobii Herba en un primer alcohol;

(b) remover el primer alcohol para producir una segunda preparación de Dendrobii Herba;

(c) extraer la segunda preparación de Dendrobii Herba con agua o con un disolvente que contiene agua para obtener una disolución acuosa que contiene polisacáridos extraídos;

(d) mezclar la disolución acuosa con un segundo alcohol para precipitar los polisacáridos; y

(e) recoger los polisacáridos precipitados.

13. Los polisacáridos de la reivindicación 12 para el uso de la reivindicación 10, en donde el primer alcohol es al menos uno seleccionado del grupo que consiste de metanol, etanol, y cualquier combinación de los mismos.

14. Los polisacáridos de la reivindicación 12 para el uso de la reivindicación 10, en donde la segunda preparación de Dendrobii Herba se extrae con agua.

15. Los polisacáridos de la reivindicación 12 para el uso de la reivindicación 10, en donde el segundo alcohol es etanol.

16. Los polisacáridos de la reivindicación 12 para el uso de la reivindicación 10, en donde el etanol tiene una concentración en el rango de 30 porciento (p/v) a 70 porciento (p/v) , preferiblemente al menos de 50 porciento (p/v) .