Ensayo de distinción.

El método para determinar si un anticuerpo presente en una muestra es un anticuerpo antifármaco específico o unanticuerpo antifármaco no específico con un inmunoensayo,

en el que dicho método incluye los siguientes pasos:

a) proporcionar

a-i) un anticuerpo farmacológico de captura, que es dicho anticuerpo farmacológico conjugado conuna fase sólida,

a-ii) un anticuerpo farmacológico trazador, que es dicho anticuerpo farmacológico conjugado con unmarcador detectable,

b) poner en contacto dicho anticuerpo farmacológico de captura, de manera separada, conb-i) dicha muestra,

b-ii) dicha muestra, a la que se ha añadido tal anticuerpo farmacológico en forma monomérica,

b-iii) dicha muestra, a la que se ha añadido tal anticuerpo farmacológico en forma oligomérica,

b-iv) dicha muestra, a la que se ha añadido inmunoglobulina G humana en forma monomérica,

b-v) dicha muestra, a la que se ha añadido inmunoglobulina G humana en forma oligomérica,

c) determinar que un anticuerpo presente en dicha muestra es un anticuerpo antifármaco específico medianteun inmunoensayo positivo en b-i), b-iv) y b-v), y un inmunoensayo negativo en b-ii) y b-iii), o

determinar que un anticuerpo presente en dicha muestra es un anticuerpo antifármaco no específicomediante un inmunoensayo positivo en b-i), b-ii) y b-iv), y un inmunoensayo negativo en b-iii) y b-v).

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2008/010575.

Solicitante: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG.

Nacionalidad solicitante: Suiza.

Dirección: GRENZACHERSTRASSE, 124 4070 BASEL SUIZA.

Inventor/es: STUBENRAUCH,KAY-GUNNAR, ZADAK,MARKUS.

Fecha de Publicación: 13 de Junio de 2013.

Clasificación Internacional de Patentes:

G01N33/576 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › para la hepatitis.
G01N33/68 G01N 33/00 […] › en los que intervienen proteínas, péptidos o aminoácidos.
G01N33/94 G01N 33/00 […] › en los que intervienen narcóticos.

PDF original: ES-2407603_T3.pdf

Fragmento de la descripción:

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Ensayo de distinción

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La invención incluye un método para distinguir la presencia de anticuerpos antifármaco específicos y no específicos en una muestra, así como equipos para la utilización de tal método.

Antecedentes de la invención Los inmunoensayos de fase sólida estándar con anticuerpos monoclonales incluyen la formación de un complejo entre el anticuerpo adsorbido en una fase sólida (anticuerpo de captura) , el antígeno, y un anticuerpo contra otro epítopo del antígeno conjugado con un marcador detectable, por ejemplo una enzima (anticuerpo trazador) . De ese modo se forma un sándwich: fase sólida-anticuerpo de captura-antígeno-anticuerpo trazador. En la reacción catalizada por el sándwich, la actividad de la enzima conjugada con el anticuerpo es proporcional a la concentración de antígeno en el medio de incubación. El método en sándwich estándar también se denomina inmunoensayo en puente de doble antígeno debido a que los anticuerpos de captura y trazador se unen a diferentes epítopos del mismo antígeno. Hoesel, W., et al., J. Immunol. Methods 294 (2004) 101-110, describen un ensayo en puente de doble antígeno anti-EPO en el que se utiliza una mezcla de rhEPO inmovilizada acoplada a grupos amino y a grupos carbohidrato. Los inmunoensayos tales como los ELISA en puente de doble antígeno son tipos de ensayo de utilización común en la investigación de una respuesta inmunogénica de un paciente hacia un fármaco de tipo anticuerpo. Mire-Sluis, A.R., et al., J. Immunol. Methods 289 (2004) 1-16, resumen las recomendaciones para el diseño y optimización de los inmunoensayos utilizando la detección de anticuerpos huésped frente a productos biotecnológicos. De acuerdo con Mire-Sluis et al., los formatos de ensayos con anticuerpos antifármaco conocidos muestran desventajas considerables. Los ensayos con anticuerpos antifármaco se citan, por ejemplo, en la patente WO 2005/045058 y la patente WO 90/006515. Los ensayos con anticuerpos antiidiotipo se citan, por ejemplo, en la patente US 5.219.730, las patentes WO 87/002778, PE 0 139 389, y PE 0 170 302. Wadhwa, M., et al., J. Immunol. Methods 278 (2003) 1-17, describen estrategias para la detección, medición y caracterización de anticuerpos no deseados inducidos por agentes biológicos terapéuticos. Los principios de los diferentes inmunoensayos se describen, por ejemplo, en Hage, D.S., Anal. Chem. 71 (1999) 294R-304R. Lu, B., et al., Analyst. 121 (1996) 29R32R, que describe la inmovilización orientada de anticuerpos para la utilización en inmunoensayos. Los inmunoensayos mediados por biotina-avidina se describen, por ejemplo, en Wilchek, M., y Bayer, E.A., Methods Enzymol. 184 (1990) 467-469. Se realizó una comparación del ELISA y la resonancia de plasmón superficial en Lofgren, J.A., et al., J. Immunol. 178 (2007) 7467-7472.

Lofgren, J.A., et al. describieron la comparación del ELISA y la resonancia de plasmón superficial para la evaluación de la inmunogenicidad clínica del panitumumab (J. Immunol. 178 (2007) 7467-7472) . En la patente WO 2007/101661 se describe un ensayo con anticuerpos antifármaco.

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Resumen de la invención El primer aspecto de la presente invención es un método para determinar si un anticuerpo presente en una muestra es un anticuerpo antifármaco específico o un anticuerpo antifármaco no específico mediante la utilización de un inmunoensayo en puente de doble antígeno que incluye un anticuerpo farmacológico de captura y un anticuerpo farmacológico trazador, en el que dicho método incluye los siguientes pasos:

a) proporcionar

a-i) dicho anticuerpo farmacológico de captura, que es dicho anticuerpo farmacológico conjugado con una fase sólida,

a-ii) dicho anticuerpo farmacológico trazador, que es dicho anticuerpo farmacológico conjugado con un marcador detectable,

㻌

b) poner en contacto dicho anticuerpo farmacológico de captura, de manera separada, con b-i) dicha muestra,

b-ii) dicha muestra, a la que se ha añadido tal anticuerpo farmacológico en forma monomérica,

b-iii) dicha muestra, a la que se ha añadido tal anticuerpo farmacológico en forma oligomérica,

b-iv) dicha muestra, a la que se ha añadido inmunoglobulina G humana en forma monomérica,

b-v) dicha muestra, a la que se ha añadido inmunoglobulina G humana en forma oligomérica,

㻌

c) determinar que un anticuerpo presente en dicha muestra es un anticuerpo antifármaco específico mediante un inmunoensayo positivo en b-i) , b-iv) y b-v) , y un inmunoensayo negativo en b-ii) y b-iii) , o determinar que un anticuerpo presente en dicha muestra es un anticuerpo antifármaco no específico mediante un inmunoensayo positivo en b-i) , b-ii) y b-iv) , y un inmunoensayo negativo en b-iii) y b-v) .

El aspecto de la presente invención es un método para distinguir, en una muestra, un anticuerpo antifármaco frente a un anticuerpo farmacológico antiinflamatorio humanizado de un anticuerpo anti IgG humano con un inmunoensayo, en el que el método incluye los siguientes pasos:

a) proporcionar

a-i) un anticuerpo farmacológico de captura, que es dicho anticuerpo farmacológico conjugado con una fase sólida, a-ii) un anticuerpo farmacológico trazador, que es dicho anticuerpo farmacológico conjugado con un marcador detectable,

b) poner en contacto dicho anticuerpo farmacológico de captura, de manera separada, con b-i) dicha muestra, b-ii) dicha muestra, a la que se ha añadido tal anticuerpo farmacológico en forma monomérica, b-iii) dicha muestra, a la que se ha añadido tal anticuerpo farmacológico en forma oligomérica, b-iv) dicha muestra, a la que se ha añadido inmunoglobulina G humana en forma monomérica, b-v) dicha muestra, a la que se ha añadido inmunoglobulina G humana en forma oligomérica,

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c) determinar un anticuerpo antifármaco frente a un anticuerpo farmacológico antiinflamatorio humanizado mediante un inmunoensayo positivo en b-i) , b-iv) y b-v) , y un inmunoensayo negativo en b-ii) y b-iii) , o determinar que un anticuerpo presente en dicha muestra es un anticuerpo anti IgG humano mediante un inmunoensayo positivo en b-i) , b-ii) y b-iv) , y un inmunoensayo negativo en b-iii) y b-v) .

Aún otro aspecto de la presente invención es un método para determinar con un inmunoensayo si un anticuerpo antifármaco en una muestra está en forma monomérica o oligomérica, en el que el método incluye los siguientes pasos:

a) proporcionar

c) determinar que el anticuerpo antifármaco en la muestra está en forma monomérica mediante un inmunoensayo positivo en b-i) y a) un inmunoensayo negativo en b-ii) y b-iii) , o 㻌

º) un inmunoensayo negativo en b-ii) , b-iii) , b-iv) , y b-v) ,

o determinar que un anticuerpo antifármaco en la muestra está en forma oligomérica mediante un inmunoensayo positivo en b-i) , y

a) un inmunoensayo negativo en b-iii) , o º) un inmunoensayo negativo en b-iii) y b-v) , en el que todos los otros inmunoensayos no enumerados son positivos. En una realización, la clase de anticuerpos antifármaco se determina de acuerdo con la tabla siguiente:

Anticuerpo farmacológico específico, respuesta monomérica Anticuerpo farmacológico específico, respuesta oligomérica Anticuerpo farmacológico no específico, respuesta oligomérica Anticuerpo farmacológico no específico, respuesta monomérica Anticuerpo farmacológico , respuesta inespecífica

Muestra no enriquecida bi) + + + + +

b-ii) - + + - +

b-iii) - - - - +

b-iv) + + + - +

b-v) + + - - +

En una realización de los aspectos de la invención, dicho inmunoensayo es un inmunoensayo en puente de doble antígeno que incluye un anticuerpo farmacológico de captura y un anticuerpo farmacológico trazador. Otra realización de los aspectos de la invención es que dicho anticuerpo farmacológico es un anticuerpo para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria.... [Seguir leyendo]

Reivindicaciones:

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1. El método para determinar si un anticuerpo presente en una muestra es un anticuerpo antifármaco específico o un anticuerpo antifármaco no específico con un inmunoensayo, en el que dicho método incluye los siguientes pasos:

a) proporcionar a-i) un anticuerpo farmacológico de captura, que es dicho anticuerpo farmacológico conjugado con una fase sólida,

a-ii) un anticuerpo farmacológico trazador, que es dicho anticuerpo farmacológico conjugado con un marcador detectable, b) poner en contacto dicho anticuerpo farmacológico de captura, de manera separada, con b-i) dicha muestra, b-ii) dicha muestra, a la que se ha añadido tal anticuerpo farmacológico en forma monomérica, b-iii) dicha muestra, a la que se ha añadido tal anticuerpo farmacológico en forma oligomérica, b-iv) dicha muestra, a la que se ha añadido inmunoglobulina G humana en forma monomérica,

b-v) dicha muestra, a la que se ha añadido inmunoglobulina G humana en forma oligomérica, c) determinar que un anticuerpo presente en dicha muestra es un anticuerpo antifármaco específico mediante un inmunoensayo positivo en b-i) , b-iv) y b-v) , y un inmunoensayo negativo en b-ii) y b-iii) , o determinar que un anticuerpo presente en dicha muestra es un anticuerpo antifármaco no específico mediante un inmunoensayo positivo en b-i) , b-ii) y b-iv) , y un inmunoensayo negativo en b-iii) y b-v) .

2. El método para distinguir en una muestra un anticuerpo antifármaco frente a un anticuerpo farmacológico antiinflamatorio humanizado de un anticuerpo anti IgG humano con un inmunoensayo, en el que el método incluye los siguientes pasos:

a) proporcionar

3. El método para determinar si un anticuerpo antifármaco en una muestra está en forma monomérica o en forma oligomérica con un inmunoensayo, en el que el método incluye los siguientes pasos:

a) proporcionar

a-i) un anticuerpo farmacológico de captura, que es dicho anticuerpo farmacológico conjugado con

una fase sólida, a-ii) un anticuerpo farmacológico trazador, que es dicho anticuerpo farmacológico conjugado con un marcador detectable,

c) determinar que el anticuerpo antifármaco en la muestra está en forma monomérica mediante un inmunoensayo positivo en b-i) y b-ii) y b-iv) , y un inmunoensayo negativo en b-iii) y b-v) . a) un inmunoensayo negativo en b-ii) y b-iii) , o º) un inmunoensayo negativo en b-ii) , b-iii) , b-iv) , y b-v) , o determinar que un anticuerpo antifármaco en la muestra está en forma oligomérica mediante un inmunoensayo positivo en b-i) , y

a) un inmunoensayo negativo en b-iii) , o º) un inmunoensayo negativo en b-iii) y b-v) , en el que todos los otros inmunoensayo no enumerados son positivos.

4. El método para determinar el tipo de anticuerpo frente a un anticuerpo farmacológico presente en una muestra con un inmunoensayo, en el que el método incluye los siguientes pasos:

a) proporcionar

a-i) un anticuerpo farmacológico de captura, que es dicho anticuerpo farmacológico conjugado con una fase sólida,

a-ii) un anticuerpo farmacológico trazador, que es dicho anticuerpo farmacológico conjugado con un marcador detectable,

b) poner en contacto dicho anticuerpo farmacológico de captura, de manera separada, con b-i) dicha muestra,

b-ii) dicha muestra, a la que se ha añadido tal anticuerpo farmacológico en forma monomérica,

b-iii) dicha muestra, a la que se ha añadido tal anticuerpo farmacológico en forma oligomérica,

b-iv) dicha muestra, a la que se ha añadido inmunoglobulina G humana en forma monomérica,

b-v) dicha muestra, a la que se ha añadido inmunoglobulina G humana en forma oligomérica,

c) determinar que un anticuerpo presente en dicha muestra es un anticuerpo antifármaco monomérico específico mediante un inmunoensayo positivo en b-i) , b-iv) y b-v) , y un inmunoensayo negativo en b-ii) y biii) , o determinar que un anticuerpo presente en dicha muestra es un anticuerpo antifármaco oligomérico específico mediante un inmunoensayo positivo en b-i) , b-ii) , b-iv) y b-v) , y un inmunoensayo negativo en b-iii) , o determinar que un anticuerpo presente en dicha muestra es un anticuerpo anti IgG humano no específico oligomérico mediante un inmunoensayo positivo en b-i) y b-ii) y b-iv) y un inmunoensayo negativo en b-iii) y bv) , o determinar que un anticuerpo presente en dicha muestra es un anticuerpo inespecífico mediante un inmunoensayo positivo en b-i) , b-ii) , b-iii) , b-iv) y b-v) , o determinar que un anticuerpo presente en dicha muestra es un anticuerpo anti IgG humano no específico monomérico mediante un inmunoensayo positivo en b-i) y un inmunoensayo negativo en b-ii) , b-iii) , b-iv) y b-v) .

5. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado de manera que dicho inmunoensayo es un inmunoensayo en puente de doble antígeno que incluye un anticuerpo farmacológico de captura y un anticuerpo farmacológico trazador.

6. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado de manera que dicho anticuerpo farmacológico es un anticuerpo para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria.

7. El método de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizado de manera que dicho anticuerpo para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria es un anticuerpo para el tratamiento de la artritis reumatoide o la artrosis.

8. El método de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizado de manera que dicho anticuerpo para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria es un anticuerpo frente al receptor de IL-6, o frente al receptor de IGF-1, o el receptor de IL-13 1 alfa.

9. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado de manera que la conjugación del anticuerpo farmacológico de captura con la fase sólida se realiza mediante adsorción pasiva o mediante un par de unión específico.

10. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, caracterizado de manera que el anticuerpo farmacológico de captura se conjuga con biotina y la conjugación con la fase sólida se realiza mediante avidina o estreptavidina inmovilizadas.

11. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado de manera que el método incluye, tras el paso b) , un paso ba) adicional de

ba) poner en contacto dicho anticuerpo farmacológico de captura contactado con dicha muestra en el paso b) con dicho anticuerpo farmacológico trazador

12. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado de manera que el anticuerpo farmacológico trazador se conjuga con el marcador detectable mediante un par de unión específico.

13. El método de acuerdo con la reivindicación 12, caracterizado de manera que el anticuerpo farmacológico trazador se conjuga con digoxigenina y la unión al marcador detectable se realiza mediante un anticuerpo frente a digoxigenina.

14. Un equipo para determinar un anticuerpo antifármaco frente a un anticuerpo farmacológico en una muestra que incluye:

a) una placa microtitulada recubierta con estreptavidina,

b) un reactivo para la conjugación de un anticuerpo farmacológico con la biotina,

c) un reactivo para la conjugación de dicho anticuerpo farmacológico con la digoxigenina,

d) un anticuerpo anti-digoxigenina conjugado con peroxidasa de rábano,

e) un reactivo para la oligomerización de dicho anticuerpo farmacológico,

f) inmunoglobulina G humana en forma monomérica, y

g) inmunoglobulina G humana en forma oligomérica.

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