El uso de monomicolil glicerol (MMG) como adyuvante.

El uso de un monomicolil glicerol (MMG) sintético basado en cadenas de alquilo con 8-36 carbonos,

yopcionalmente con una cola lipídica con 0-3 dobles enlaces en cada cola lipídica para preparar un adyuvante oinmunomodulador

El uso de monomicolil glicerol (MMG) como adyuvante Campo de la invención La presente invención revela el uso de monomicolil glicerol (MMG) , un homólogo sintético, análogo o versión modificada del mismo para preparar un inmunomodulador, un adyuvante, el adyuvante y una vacuna o un sistema de suministro que comprende este adyuvante.

Antecedentes generales Las primeras vacunas constaban de patógenos vivos atenuados. Las formas atenuadas eran organismos muy relacionados de origen natural o se obtenían a través de pases en serie en cultivo. Por ejemplo, la tuberculosis (TB) en el hombre se ha combatido durante muchos años por vacunación con una cepa atenuada de Mycobacterium bovis, -la vacuna M. bovis BCG desarrollada hace más de 80 años. Sin embargo, aunque se han administrado más de 3 billones de dosis de BCG (más que cualquier otra vacuna) no siembre proporciona resistencia satisfactoria a TB humana en toda la población.

Hoy en día, un enfoque más actualizado es usar sustancias altamente purificadas, por ejemplo, proteínas o péptidos recombinantes purificados. Estas vacunas están bien definidas y sus reacciones secundarias están minimizadas. Desafortunadamente, muchas sustancias altamente purificadas no son muy inmunogénicas y no inducen una respuesta inmune suficiente para conferir protección. Para hacer esto, el antígeno necesita algo de ayuda de agentes potenciadores de la respuesta inmune llamados adyuvantes. Dependiendo del patógeno, la protección puede requerir que predomine una respuesta humoral o una respuesta mediada por células. Una reacción inmune que puede transferirse con suero inmune se llama inmunidad humoral y se refiere a resistencia que está mediada por anticuerpos que se unen a material antigénico asociado con un agente infeccioso y de este modo desencadena una respuesta inmune contra el mismo. La inmunidad mediada por células (CMI) depende de las células del sistema inmune que montan una respuesta inmune. Una respuesta inmune CM1, o T auxiliar (Th) 1, está generalmente asociada en el combate de patógenos intracelulares, incluyendo leishmania y tuberculosis, pero también tiene un papel en el combate de otros tipos de infecciones, por ejemplo la infección por la levadura Cándida. Una respuesta inmune humoral o Th2 es necesaria para defenderse contra patógenos extracelulares, por ejemplo infecciones por helmintos.

En varios casos, por ejemplo, influenza, hepatitis C (VHC) , virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) , clamidia y malaria dependiendo de la fase de infección, puede requerir una respuesta mixta Th1/Th2 (Mosmann y Sad 1996) . Estas requieren tanto Th1 como Th2 porque partes de su ciclo celular son intracelulares pero también pasan por fases extracelulares, por ejemplo, transmisión entre células.

El desarrollo de un tipo específico de respuesta inmune (humoral o mediada por células) puede determinarse por la elección del adyuvante. Por ejemplo, la inmunidad protectora contra patógenos intracelulares como M. tuberculosis requiere una respuesta inmune mediada por células, y un adyuvante adecuado para una vacuna de subunidad dirigida contra TB debe potenciar una respuesta Th1 (Lindblad y col. 1997) .

Existe una gran cantidad de adyuvantes pero la mayoría de estos tienen numerosos problemas que impiden su uso en seres humanos. Solo unos pocos adyuvantes están aceptados para uso en seres humano, por ejemplo, adyuvantes basados alúmina (sales AlOH) y MF-59, pero ambos indicen respuestas desviadas a Th2, lo que les hace inadecuados para una vacuna TB y otras vacunas que requieran una respuesta Th1 (Lindblad y col. 1997) .

Durante los pasados 20-30 años se han identificado varios sistemas adyuvantes nuevos y algunos de ellos están actualmente en desarrollo. A pesar de este, aún se reconoce la necesidad de nuevos sistemas adyuvantes (Moingeon y col. 2001) y es evidente en la escasez de elecciones disponibles para uso clínico.

Un adyuvante (del latín adjuvare, para ayudar) puede definirse como cualquier sustancia que cuando se administra en la vacuna sirve para dirigir, acelerar, prolongar y/o potenciar la respuesta inmune específica. Los adyuvantes se han dividido en dos categorías principales, sistemas de suministro o inmunomoduladores/inmunoestimuladores. El sistema de suministro puede, por ejemplo, ser emulsiones, partículas de poliestireno, niosomas, ISCOM, virosomas, microesferas, o liposomas tipo tensioactivo, que son vesículas compuestas de bicapas lipídicas. Los liposomas actúan como vehículos del antígeno (dentro de las vesículas o unidos en la superficie) y pueden formar un depósito en el sitio de inoculación permitiendo una liberación lenta, continua del antígeno. Durante un tiempo después de la inyección y la fagocitosis, la presentación liposomal asegura que esté disponible una cantidad específica de antígeno para células presentadoras de un único antígeno (Gluck 1995) . Los inmunomoduladores marcan como diana distintas células o receptores, por ejemplo, receptores tipo toll en la superficie de APC. Los sistemas de suministro e inmunomoduladores pueden usarse juntos, por ejemplo, como en la serie Glaxo de adyuvantes. Por lo tanto, además de suministrar el antígeno de la vacuna, el sistema de suministro también puede usarse para suministrar los inmunomoduladores.

Además de ser un componente en una vacuna, los inmunomoduladores pueden administrarse sin antígeno (s) . Mediante este enfoque, es posible activar el sistema inmune de forma local, por ejemplo, visto como la maduración de células presentadoras de antígeno, producción de citoquinas que es importante para la actividad antitumoral y antiviral. Por tanto, la administración de inmunomoduladores puede, por ejemplo, ser un soporte en la erradicación del cáncer y enfermedades cutáneas. Ejemplos de inmunomoduladores que pueden administrarse de forma local son taxanos, por ejemplo Taxol, el ligando del receptor 7/8 tipo toll Resiquimod, Imiquimod, Gardiquimod.

El bromuro, cloruro, fosfato, acetato de dimetildioctadecilamonio u otras sales orgánicas o inorgánicas (DDA) es un compuesto de amonio cuaternario lipófilo, que forma liposomas catiónicos en soluciones acuosas a temperaturas por encima de 40ºC. DDA es un sistema de suministro muy eficaz que potencia la captación del antígeno de vacuna en APC. Se han descrito combinaciones de DDA y agentes inmunomoduladores. La administración de Arquad 2HT, que comprende DDA, en seres humanos fue prometedora y no indujo efectos secundarios aparentes (Stanfield, 1973) . La combinación de DDA y TDB o DDA y MPL mostró una sinergia muy clara entre el vehículo de suministro (DDA) y el inmunomodulador (TDB o MPL) con niveles altamente elevados de respuesta CMI en comparación con la respuesta obtenida con cualquiera de los componentes solos. DDA, por lo tanto, es un vehículo de suministro prometedor para un antígeno de vacuna y un inmunomodulador, por ejemplo, en el desarrollo de un sistema adyuvante para una vacuna contra TB y otros patógenos intracelulares.

Se ha informado de que diversos componentes de micobacterias son inmunomoduladores. Cuando se usaron lípidos extraídos de M. bovis BCG como adyuvante, se obtuvo una respuesta en test cutáneo a ovalbúmina en cobayas (Hiu 1975) . Liposomas formados a elevadas temperaturas a partir de lípidos polares totales de M. bovis BCG son capaces de generar una respuesta humoral contra ovalbúmina, y una vacuna preparada a partir de estos lípidos polares dio protección en ratones después de exposición con células tumorales (documento WO 03/011336) . El efecto de lípidos totales de M. tuberculosis H37Rv como antígeno en una vacuna TB experimental para cobayas se investigó por (Dascher y col., 2003) . En este estudio, se mezclaron liposomas basados en colesterol y 1, 2diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DSPC) con un extracto de lípidos totales de M. tuberculosis H37Rv. Después de retirar el disolvente, los lípidos se reconstituyeron con dimetildioctadecilamonio (DDA) como adyuvante en tampón PBS. Los cobayas inmunizados con esta vacuna no mostraron una reducción significativa en las bacterias, lo que sugiere que esta formulación de liposomas mezclada con DDA carece de un antígeno fuerte o que la formulación de lípidos micobacterianos con colesterol:DSPC evita el efecto adyuvante de DDA. Como alternativa, como se administra una mezcla de diversos lípidos, los lípidos eficaces pueden constituir una proporción demasiado limitada de los lípidos totales.

También se han investigado diversos componentes purificados de micobacterias para su actividad adyuvante. El derivado de proteína purificada (PPD) no indujo una reacción de hipersensibilidad de tipo retardado por sí misma, pero cuando se añadía Wax D (un complejo de fragmento de peptidoglicano... [Seguir leyendo]

1. El uso de un monomicolil glicerol (MMG) sintético basado en cadenas de alquilo con 8-36 carbonos, y opcionalmente con una cola lipídica con 0-3 dobles enlaces en cada cola lipídica para preparar un adyuvante o inmunomodulador.

2. El uso de la reivindicación 1, en el que dicha cadena de alquilo tiene 8-16 carbonos.

3. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 o reivindicación 2 de MMG sintético o versiones modificadas basadas en cadenas de alquilo con 8 a 36 carbonos como se representa en la figura 9.

4. Un adyuvante o inmunomodulador que comprende un monomicolil glicerol (MMG) sintético basado en cadenas de alquilo con 8-36 carbonos, y opcionalmente con una cola lipídica con 0-3 dobles enlaces en cada cola lipídica.

5. Un adyuvante o inmunomodulador de acuerdo con la reivindicación 4 que comprende adicionalmente un tensioactivo.

6. Un adyuvante o inmunomodulador de acuerdo con la reivindicación 5, en el que el tensioactivo es bromuro de dimetildioctadecilamonio (DDA-B) , cloruro de dimetildioctadecilamonio (DDA-C) , sulfato de dimetildioctadecilamonio, sal fosfato o acetato, bromuro de dimetildioctadecenilamonio (DODA-B) , cloruro de dimetildioctadecenilamonio (DODA-C) , sulfato de dimetildioctadecenilamonio, fosfato o acetato, 1, 2-dioleoil-3-trimetilamonio-propano (DOTAP) , 1, 2-dimiristoil-3-trimetilamonio-propano, 1, 2-dipalmitoil-3-trimetilamonio-propano, 1, 2-diestearoil-3-trimetilamoniopropano y dioleoil-3-dimetilamonio-propano (DODAP) y N-[1- (2, 3-dioleiloxi) propil]-N, N, N-trimetilamonio (DOTMA) .

7. Un adyuvante o inmunomodulador de acuerdo con la reivindicación 5-7, que comprende un inmunomodulador adicional donde el inmunomodulador es un ligando del receptor no tipo Toll (TLR) , o ligandos TLR, y/o cualquier análogo de los mismos.

8. El adyuvante o inmunomodulador de la reivindicación 7, en el que el ligando del receptor no tipo Toll (TLR) es 6, 6'dibehenato de alfa, alfa'-trehalosa (TDB) y muramil dipéptido (MDP) .

9. El adyuvante o inmunomodulador de la reivindicación 7, en el que el ligando TLR es Poli I~:C.

10. Un MMG sintético basado en cadenas de alquilo con 8-36 carbonos opcionalmente con una cola lipídica con 0-3 dobles enlaces en cada cola lipídica.

11. Un análogo sintético de MMG de acuerdo con la reivindicación 10 con 8-16 carbonos o hasta 36 carbonos como se representa en la figura 9.

12. Una vacuna que comprende un adyuvante o inmunomodulador de acuerdo con la reivindicación 4-7, adecuada para su administración por cualquiera de las siguientes vías parenteral, oral, a la mucosa, sublingual, transdérmica, tópica, por inhalación, intranasal, en aerosol, intraocular, intratraqueal, intrarrectal, vaginal, por pistola génica, parche dérmico o en forma de gotas oculares o enjuague bucal.

13. Una vacuna de acuerdo con la reivindicación 12, en la que el componente antigénico comprende un epítope antigénico de un patógeno intracelular.

14. Una vacuna de acuerdo con la reivindicación 13, en la que el componente antigénico comprende un epítope antigénico de una micobacteria virulenta.

15. La vacuna de acuerdo con la reivindicación 14, en la que la micobacteria se selecciona entre Mycobacterium tuberculosis, M. bovis o M. africanum.

16. Una vacuna de acuerdo con la reivindicación 13, en la que el componente antigénico comprende un epítope antigénico de Plasmodium falciparum, Chlamydia trachomatis, VIH, influenzae o Hepatitis B o C.

17. Una vacuna de acuerdo con la reivindicación 16, en la que el epítope antigénico de Plasmodium falciparum se selecciona entre Msp1, Msp2, Msp3, AmaI, GLURP, LSA1, LSA3 o CSP.

18. Una vacuna de acuerdo con la reivindicación 18, en la que el epítope antigénico de Chlamydia trachomtis se selecciona entre CT184, CT521, CT443, CT520, CT521, CT375, CT583, CT603, CT610 o CT681.

19. Una vacuna de acuerdo con las reivindicaciones 16 a 18 para su uso en un procedimiento para tratar el cáncer, un trastorno autoinmune, trastornos nerviosos, Alzheimer, inflamación de las vías respiratorias, trastornos inflamatorios, enfermedad infecciosa, trastornos cutáneos, alergia, asma o una enfermedad causada por un patógeno.

20. Un sistema de suministro que comprende un adyuvante o inmunomodulador de acuerdo con la reivindicación 4-7 para tratar el cáncer, un trastorno autoinmune, trastornos nerviosos, Alzheimer, inflamación de las vías respiratorias, trastornos inflamatorios, enfermedad infecciosa, trastornos cutáneos, alergia, asma o una enfermedad causada por

un patógeno.

21. Un sistema de administración de acuerdo con la reivindicación 20, en el que el MMG sintético se administra en combinación con una o más vacunas, antígenos, anticuerpos, agentes citotóxicos, alergenos, antibióticos, oligonucleótidos antisentido, agonistas TLR y no TLR, antagonistas TLR y no TLR, péptidos, proteínas, vectores de terapia génica, vacunas de ADN, inmunomoduladores o moléculas coestimuladoras.