Diagnóstico y estratificación de riesgo mediante NT-proET-1.

Procedimiento para el diagnóstico in vitro y/o la estratificación de riesgo de enfermedades cardíacas,

caracterizado porque se realiza una determinación del fragmento libre 18-52 de SEQ ID nº 1 (NT-proET-1) o de unfragmento elegido de SEQ ID nº 2, SEQ ID nº 3 en una muestra de líquido corporal de un paciente a examinar.

Diagnóstico y estratificación de riesgo mediante NT-proET-1

La presente invención se refiere a un procedimiento para el diagnóstico y/o la estratificación de riesgo de enfermedades cardíacas, en el que se realiza una determinación del fragmento libre N-terminal pro-endotelina (NTproET-1; AS 18-52 del preproET, según la figura 1) o de fragmentos del mismo.

Para poder aplicar una terapia adecuada se requiere un diagnóstico precoz y la diferenciación de las enfermedades cardíacas nada más entrar en urgencias en combinación con la necesidad de tomar decisiones clínicas.

Según el estado de la técnica, se ha descrito la ET-1 madura (21 AS) para el diagnóstico junto con la proteína precursora Big-ET 1 (38AS, véase la figura 1) (Rossi GP, Seccia TM, Albertin G, Pessina AC. “Measurement of endothelin: clinical and research use” [Medición de la endotelina: uso clínico e investigación]. Ann Clin Biochem

2000; 37 (Pt 5) ; 608-26.2; Aubin P, Le Brun G, Moldovan F, Villette JM, Creminon C, Dumas J, y otros. “Sandwichtype enzyme immunoassay for big endothelin-I in plasma: concentrations in healthy human subjects unaffected by sex or posture” [Inmunoensayo enzimático tipo sándwich para endotelina-I grande en plasma: concentraciones en sujetos humanos sanos independientemente de su sexo o posición]. Clin Chem 1997; 43; 64-70) . Además, se conoce que por los documentos WO 00/22439 o EP 1121600 B1 de la solicitante se han dado a conocer las prohormonas de endotelina para el diagnóstico de la sepsis.

Asimismo se han descrito por el documento EP 1564558 B1 los fragmentos C-terminales pro-endotelina (CTproET1) con las secuencias de aminoácidos 93-212 ó 168-212 de la prepro-endotelina (figura 1, SEQ ID nº 1) para el diagnóstico de enfermedades cardiovasculares para la determinación indirecta del contenido en endotelina-1 o en endotelina-1 grande.

Struck y otros (2005) Peptides, Vol. 26, páginas 2482-2486 dieron a conocer la medición del péptido precursor de endotelina-1 en el plasma. No obstante, esto no establece relación alguna del péptido como marcador para el diagnóstico o para la estratificación de enfermedades cardíacas. Además, se dieron a conocer anticuerpos que pueden unirse al epítopo de 18-53.

Papassotiriou Jana y otros (2006) Clinical Chemistr y , Vol. 52, páginas 1144-1151 se refiere a la adecuación diagnóstica de “CT-proET-1” e informa exclusivamente de “péptidos procedentes de precursor de ET-1” para la determinación indirecta de cantidades liberadas de ET-1. No se menciona expresamente NT-proET-1. Además, se explica que estos “péptidos procedentes de precursor de ET-1” son apropiados para la determinación indirecta de las cantidades liberadas de ET-1. Papassotiriou Jana y otros no describen de manera explícita que NT-proET-1, ni que NT-proET-1 desempeñen una función diagnóstica propia e independiente. Tampoco aparece indicación alguna de que mediante NT-proET-1 pueda tener lugar un diagnóstico y estratificación de riesgo de enfermedades cardíacas con independencia de ET-1 y bigET-1.

Sin embargo, en los procedimientos de diagnóstico conocidos con utilización de los marcadores conocidos hasta el momento sigue siendo un inconveniente que no se consigue de forma suficiente la detección precoz y completa de pacientes de riesgo y, por lo tanto, no se realiza de un modo suficiente una estratificación de riesgo. Uno de los objetivos de la presente invención consiste, por lo tanto, en desarrollar un procedimiento para la estratificación de 45 riesgo de las enfermedades cardíacas que haga posible una detección mejorada de pacientes de riesgo.

Además, resulta un inconveniente que, según el estado de la técnica, no se consigue casi nunca una sensibilidad y/o especificidad suficiente de los marcadores.

Otro objetivo consiste, por lo tanto, en proporcionar un procedimiento para la estratificación de riesgo de enfermedades cardíacas en el que, como mínimo, un marcador o una combinación de marcadores presenta una sensibilidad y especificidad suficientes en un diagnóstico in vitro.

Por lo tanto, el objetivo de la presente invención consiste en dar a conocer un procedimiento para el diagnóstico y/o 55 la estratificación de riesgo de enfermedades cardíacas.

El objetivo propuesto se consigue mediante un procedimiento para el diagnóstico y estratificación de riesgo de enfermedades cardíacas en el que tiene lugar una determinación del terminal N proendotelina (de forma simplificada: “NT-proET-1”) o fragmentos de la misma (de acuerdo con el presente procedimiento de la invención) .

Es objetivo de la invención un procedimiento para el diagnóstico in vitro y/o estratificación de riesgo de enfermedades cardíacas, que se caracteriza por llevar a cabo una determinación de los fragmentos libres NT-proET1 (18-52) o de fragmentos contenidos en una muestra de un fluido corporal de un paciente a investigar.

La invención se refiere además a la utilización del fragmento libre NT-proET-1 o fragmentos del mismo para el diagnóstico y/o estratificación de riesgo de enfermedades cardíacas y opcionalmente otros marcadores.

Además, la invención se refiere a la utilización de un conjunto de elementos o kit para el diagnóstico y/o estratificación de riesgo de enfermedades cardíacas que contiene agentes indicadores para la determinación del fragmento libre NT-proET-1 o de fragmentos del mismo y opcionalmente otros marcadores.

Sorprendentemente, las NT-proET-1 o los fragmentos y péptidos parciales de la misma presentan una alta sensibilidad y especificidad para el diagnóstico de enfermedades cardíacas (véase los ejemplos y las figuras) .

El concepto de la invención “enfermedades cardíacas” comprende, en especial, el “síndrome coronario agudo” y sus diferentes fases y enfermedades coronarias que son directamente una amenaza para la vida. Esto se refiere, en especial, a la medicina de emergencias y a infartos de miocardio agudos o angina de pecho, así como muerte cardíaca súbita. Además del infarto agudo de miocardio, que se define de acuerdo con los criterios WHO (WHO (1979) : Nomenclature and criteria for diagnosis of ischemic heart disease. Report of the Joint International Society and Federation of Cardiology/World Health Organization task force on standardization of clinical

nomenclature, Circulation 59 (3) : 607-609) como dolor pectoral agudo con una duración superior a 20 minutos relacionado con aumento de ST y/o un aumento de las enzimas de miocardio, se acentuó el concepto de la Angina pectoris (AP) inestable que se debe de interpretar de acuerdo con la invención bajo el concepto “enfermedades cardíacas” (Hamm CW: Leitlinien: Akutes Koronarsyndrom (ACS) -Teil 1: (directrices: síndrome coronario agudo (ACS) – Parte 1) ACS sin aumento persistente de ST Z Kardiol (2004) 93:72-90) .

Dentro del ámbito de la presente invención, se entenderá como “infarto de miocardio” (infarto cardíaco, AMI (accute myocardial infarction) ) una enfermedad del corazón, de tipo agudo, con peligro para la vida por la cual tiene lugar la necrosis o la destrucción de tejidos (infarto) de partes del músculo cardíaco (miocardio) , como causa de una alteración de la circulación de la sangre (isquemia) , que habitualmente dura más de 20 minutos. Un síntoma principal del infarto de miocardio es un súbito dolor fuerte en la zona del pecho (“chest pain”) que dura más de 20 minutos, que se radia a los hombros, brazos, mandíbula inferior y epigastrio y que eventualmente están acompañados de sudores, náuseas y eventualmente vómitos. Después de un infarto de miocardio, es posible un paro cardíaco.

El concepto “post-infarto de miocardio” significa que un paciente ha padecido ya un infarto de miocardio con anterioridad, es decir, por ejemplo, durante más de una hora, en especial 20 horas, en especial de 1 a 5 días o de 3 a 5 días, y ahora se encuentra en la fase post (“posterior”) y no ha tenido consecuencias directas de muerte, pero que, no obstante, se puede contar con una evolución posterior desfavorable, tal como otro infarto de miocardio (continuación) , paro cardíaco o muerte u otros empeoramientos del paciente.

En el ámbito de la presente invención, se incluirá bajo el concepto de “enfermedades cardíacas” igualmente la “insuficiencia cardíaca”. “Insuficiencia cardíaca” es una incapacidad aguda o crónica del corazón en suministrar a los tejidos suficiente sangre y, por lo tanto, suficiente oxígeno para garantizar el intercambio de productos en los tejidos en reposo o bajo... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para el diagnóstico in vitro y/o la estratificación de riesgo de enfermedades cardíacas,

caracterizado porque se realiza una determinación del fragmento libre 18-52 de SEQ ID nº 1 (NT-proET-1) o de un fragmento elegido de SEQ ID nº 2, SEQ ID nº 3 en una muestra de líquido corporal de un paciente a examinar.

2. Procedimiento para el diagnóstico in vitro y/o la estratificación de riesgo de enfermedades cardíacas, según la reivindicación 1, caracterizado porque las enfermedades cardíacas son seleccionadas entre síndrome coronario agudo, post-infarto de miocardio, insuficiencia cardíaca.

3. Procedimiento para el diagnóstico y/o la estratificación de riesgo, según una de las reivindicaciones anteriores, para la identificación de pacientes con un riesgo elevado y/o un pronóstico desfavorable de enfermedades cardíacas.

4. Procedimiento para el diagnóstico y/o la estratificación de riesgo, según una de las reivindicaciones anteriores, en el que el paciente es un paciente sintomático y/o un paciente asintomático, en especial un paciente de urgencia.

5. Procedimiento para el diagnóstico y/o la estratificación de riesgo, según una de las reivindicaciones anteriores, para el control de la terapia de enfermedades cardíacas, especialmente en la medicina intensiva o en la medicina de urgencia.

6. Procedimiento para el diagnóstico y/o la estratificación de riesgo de enfermedades cardíacas, según una de las reivindicaciones anteriores, para llevar a cabo decisiones clínicas, especialmente el tratamiento continuado y

terapias con fármacos, especialmente en la medicina intensiva o en la medicina de urgencia, incluyendo la decisión de hospitalizar a un paciente.

7. Procedimiento para el diagnóstico y/o la estratificación de riesgo de enfermedades cardíacas, según una de las reivindicaciones anteriores, para el pronóstico, para la detección precoz y la detección del diagnóstico diferencial, para la evaluación de la gravedad y para la evaluación del desarrollo concomitante a la terapia.

8. Procedimiento, según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque adicionalmente se lleva a cabo la determinación de, como mínimo, otro marcador elegido entre el grupo de marcadores inflamatorios, marcadores cardiovasculares, marcadores neurohormonales o marcadores isquémicos.

9. Procedimiento, según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el marcador inflamatorio está elegido entre, como mínimo, un marcador del grupo de la proteína C reactiva (PCR) , las citosinas tales como, por ejemplo, TNF-alfa, las interleucinas tales como, por ejemplo IL-6, la procalcitonina (1-116, 3-116) y moléculas de adhesión tales como VCAM ó ICAM.

10. Procedimiento, según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el marcador cardiovascular está elegido entre, como mínimo, un marcador del grupo de la creatinquinasa, la mioglobina, la mieloperoxidasa, la proteína natriurética, en especial ANP (ó ANF) , proANP, NT-proANP, BNP, proBNP, NT-proBNP o una secuencia parcial de las mismas respectivamente, troponina cardíaca, CRP, así como (pro) hormonas reguladoras de la

circulación tales como el propéptido liberador de gastrina (proGRP) , proendotelina-2, proendotelina-3, proleptina, proneuropéptido-Y, prosomatostatina, proneuropéptido-YY, por-opiomelanocortina, proadrenomedulina (proADM) , provasopresina (proAVP) o una secuencia parcial de las mismas, respectivamente.

11. Procedimiento, según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el marcador isquémico está elegido entre, como mínimo, un marcador del grupo troponina I y T, CK-MB.

12. Procedimiento, según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el marcador neurohormonal es, como mínimo, una proteína natriurética, en especial ANP (ó ANF) , proANP, NT-proANP, BNP, proBNP, NTproBNP o una secuencia parcial de las mismas.

13. Procedimiento, según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque se llevan a cabo determinaciones paralelas o simultáneas de los marcadores.

14. Procedimiento, según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque las determinaciones se llevan a cabo en, como mínimo, una muestra de paciente.

15. Procedimiento, según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque las determinaciones son llevadas a cabo en un aparato automático de análisis, en especial mediante un Kriptor.

16. Procedimiento, según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque las determinaciones se realizan mediante una prueba rápida, en especial mediante determinaciones de parámetros individuales o múltiples.

17. Utilización del fragmento libre 18-52 de SEQ ID nº 1 (NT-proET-1) o de un fragmento elegido de SEQ ID nº 2, SEQ ID nº 3, para el diagnóstico y/o la estratificación de riesgo de enfermedades cardíacas y, en su caso, de otros marcadores, según una de las reivindicaciones 8 a 12.

18. Utilización de un kit para el diagnóstico y/o la estratificación de riesgo de enfermedades cardíacas que contiene reactivos de detección para determinar el fragmento libre 18-52 de SEQ ID nº 1 (NT-proET-1) o un fragmento elegido entre SEQ ID nº 2, SEQ ID nº 3 y, en su caso, otros marcadores según una des las reivindicaciones 8 a 12 y coadyuvantes.