Procedimiento para diagnosticar carcinoma hepatocelular.

Un procedimiento para diagnosticar carcinoma hepatocelular que comprende las etapas de:

poner en contacto un material específico para un gen CSTB o una proteína CSTB con una muestra biológica ycomparar un nivel de expresión del gen CSTB o la proteína CSTB en la muestra biológica con el de una muestrade control,

en el que el material específico para un gen CSTB es un cebador sentido y antisentido o una sondacomplementaria para el ARNm del gen CSTB y en el que el material específico para la proteína CSTB es unanticuerpo específico para la proteína CSTB.

Procedimiento para diagnosticar carcinoma hepatocelular

Campo técnico

La presente invención se refiere a un procedimiento para diagnosticar carcinoma hepatocelular midiendo la cistatina B (CSTB, estefina B) presente en el tejido y el fluido corporal de un paciente con carcinoma hepatocelular.

Estado de la técnica

Existen varios procedimientos para diagnosticar cánceres usando marcadores tumorales. La mayoría de ellos se realizan por un análisis de sangre usando un anticuerpo, y algunos de ellos se realizaron usando fluido extraído de tejido, orina, heces, o similares. Los marcadores tumorales varían de acuerdo con las regiones, en las que se producen cánceres, pero no existe un marcador tumoral que detecte todos los tipos de cánceres humanos. Además, existen muchos cánceres en los que no se encuentran marcadores tumorales. Por lo tanto, para desarrollar un mejor diagnóstico de cáncer usando marcadores tumorales, se han realizado estudios en el diagnóstico usando un anticuerpo monoclonal, un haz de láser, un radioisótopo, una sonda quimioluminiscente, un analizador automático o similares.

Existen marcadores tumorales específicos que sólo se producen por células cancerosas específicas en el cuerpo humano. Por lo tanto, un nivel elevado del marcador tumoral hace posible diagnosticar un cáncer que se produce en un órgano específico, lo que se denomina quot;alta especificidad de órganoquot;. Ejemplos de los marcadores tumorales que pertenecen a los grupos mencionados anteriormente incluyen un antígeno específico de próstata y de cáncer de próstata (PSA) , una gonadotropina coriónica humana (hCG) de célula embrionaria y de placenta, una enolasa específica de neurona (NSE) y de célula neuroendocrina, de glándulas endocrinas y varias hormonas, de neurilemoma y catecolamina (VMA) , una alfa fetoproteína (AFP) de célula hepática, de célula embrionaria. Sin embargo, en muchos casos, un marcador tumoral es producido por varios órganos. En consecuencia, incluso si el nivel del marcador específico es elevado, es difícil determinar el órgano en el que se produce el cáncer. Por ejemplo, el marcador tumoral tal como CEA y CA19-9 es producido por células cancerosas en varios órganos que incluyen estómago, colon, páncreas y pulmón. Por tanto, incluso si el marcador tumoral está presente en suero con una gran cantidad, es imposible determinar el órgano en el que se produce el cáncer.

No obstante, los marcadores tumorales se emplean útilmente en el diagnóstico de cáncer, y los marcadores tumorales varían ampliamente dependiendo de los tipos de cánceres, ya que el diagnóstico temprano es muy importante, y un paciente en el estadio más temprano de cáncer no tiene conocimiento de ningún síntoma. Además, no existe un marcador tumoral que pueda detectar todos los tipos de cánceres por una prueba en una etapa, y muchos cánceres no producen un marcador tumoral eficaz. En consecuencia, muchos estudios han tratado de buscar un marcador tumoral mejor.

El carcinoma hepatocelular es un tumor maligno primario, que se produce en el hígado. Las células de cáncer de otras partes del cuerpo metastatizan en el hígado, para desarrollar carcinoma hepático metastásico. Un 90 % o más del total de cánceres de hígado son carcinoma hepatocelular. Incluso después de un tratamiento curativo de carcinoma hepatocelular, la tasa de recurrencia es de un 40 a un 80 %. En la mayoría de los casos, los tumores vuelven a aparecer en el hígado, pero vuelven a aparecer en el pulmón y ganglio linfático, o la superficie interna de la pared abdominal y mediastino. La proporción de carcinoma hepatocelular en pacientes hombres con respecto a mujeres en número es de 4 a 1, y estos tumores se producen mayormente en pacientes de mediana edad y de edad más avanzada.

El carcinoma hepatocelular está provocado por el virus de hepatitis B, virus de hepatitis C, hepatopatía alcohólica, hepatopatía metabólica y otras toxinas. En particular, se sabe que de un 65 a un 80 % de los pacientes con carcinoma hepatocelular en Corea tienen el transportador del antígeno de Hepatitis B.

Un paciente en un estadio temprano de carcinoma hepatocelular no tiene síntomas, y si el paciente experimenta algunos síntomas, ya está en un estadio avanzado. Principalmente, los síntomas son fatiga, dolor abdominal o distensión, y pérdida de apetito. El síntoma específico es solidez abdominal palpable en el área precordial, lo que indica que el cáncer ha avanzado significativamente. Cuando la masa de carcinoma hepatocelular puede irrumpir en la cavidad abdominal, el paciente tiene dolor abdominal brusco y distensión, hipotensión o choque, o similares.

Los pacientes con carcinoma hepatocelular pueden morir de progresión tumoral, y pueden morir de cirrosis adjunta. Por lo tanto, se necesita un tratamiento para evitar el desarrollo de carcinoma hepatocelular y cirrosis simultáneos. Cuando el cáncer se diagnostica de forma temprana, y por tanto se lleva a cabo cirugía, se puede curar completamente. Por otra parte, en el caso de pacientes con el cáncer significativamente avanzado, función hepática mala, o cáncer metastásico, en lugar de cirugía se realizan tratamientos tales como inyección de etanol percutánea, quimioembolización transarterial y ablación con radiofrecuencia.

Puesto que el pronóstico de carcinoma hepatocelular no es bueno, su prevención y diagnóstico temprano es importante. Para evitar y diagnosticar temprano la enfermedad, se ha de llevar a cabo la inoculación de la vacuna de hepatitis B. Además, los pacientes con hepatitis o cirrosis crónica tienen que realizar un examen médico una vez cada de tres a seis meses.

Recientemente, se encontró un gen supresor tumoral tal como p53, -catenina, y Axin1, o mutación de oncogén en tejido tumoral y existe un informe de que dichos genes pueden estar implicados en la aparición de cáncer de hígado. Sin embargo, la frecuencia de la mutación de los genes es muy baja, por lo que es difícil determinar una correlación entre la mutación de los genes y la progresión del cáncer de hígado. En consecuencia, los estudios en biología molecular sobre la causa y la progresión del cáncer de hígado aún son un reto por resolver.

En general, el carcinoma hepatocelular que se produce en Corea se desarrolla con cirrosis producida previamente, y se sabe que el tejido hepático acompañado por cirrosis incluye un estadio intermedio entre el nódulo de regeneración no neoplásico como lesión precursora y el carcinoma hepatocelular maligno. Se dice que la lesión nodular es un nódulo displásico, que se puede clasificar en un nódulo displásico de grado bajo y un nódulo displásico de grado alto de acuerdo con su grado. Los carcinomas hepatocelulares pequeños se encuentran frecuentemente en el nódulo displásico de grado alto. Por lo tanto, el nódulo displásico de alto grado se ha considerado un estadio precanceroso de carcinoma hepatocelular. La lesión precursora para cáncer de hígado se puede clasificar histológicamente en carcinoma hepatocelular temprano, carcinoma in situ, o similares de acuerdo con los anatomopatólogos. El estadio precanceroso de cáncer de hígado aún es un tema controvertido, y el mecanismo molecular que subyace al desarrollo de carcinoma hepatocelular desde un estadio precanceroso aún no se ha esclarecido. El carcinoma hepatocelular se clasifica histopatológicamente en cuatro grados de acuerdo con el grado de Edmondson. El grado de diferenciación y tamaño de las células tumorales representa cambios morfológicos, lo que indica que la progresión del cáncer de hígado es por etapas, pero el mecanismo biológico molecular del mismo aún no se ha esclarecido.

Recientemente se ha introducido una tecnología de micromatriz de ADN para permitir el análisis comprensivo de la expresión génica, y es una tecnología genómica nueva empleada en estudios oncológicos. Algunos investigadores han intentado demostrar el desarrollo del cáncer de hígado usando perfiles de expresión molecular, pero la gran familia génica en cada estadio de acuerdo con la progresión de carcinoma hepatocelular en el estadio temprano y tardío aún no ha sido examinada, y el examen proporcionará una información importante para entender el desarrollo del carcinoma hepatocelular en un estadio temprano y la invasividad y metástasis del carcinoma hepatocelular en un estadio tardío.

Un marcador molecular representativo para el carcinoma hepatocelular, AFP, es una glucoproteína que se produce de forma anormal cuando las células hepáticas se transforman para desdiferenciarse en células cancerosas, y se usan para el descubrimiento y la observación en el tratamiento de cáncer hepático primario, hepatitis, cirrosis,... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para diagnosticar carcinoma hepatocelular que comprende las etapas de:

poner en contacto un material específico para un gen CSTB o una proteína CSTB con una muestra biológica y

comparar un nivel de expresión del gen CSTB o la proteína CSTB en la muestra biológica con el de una muestra 5 de control,

en el que el material específico para un gen CSTB es un cebador sentido y antisentido o una sonda complementaria para el ARNm del gen CSTB y en el que el material específico para la proteína CSTB es un anticuerpo específico para la proteína CSTB.

2. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la etapa de poner en contacto el material específico para el gen CSTB se realiza por una RT-PCR, una RT-PCR competitiva, una RT-PCR en tiempo real, un ensayo de protección de RNasa, una transferencia northern o un chip de ADN.

3. Un procedimiento para determinar la progresión o pronóstico de carcinoma hepatocelular, usando el procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o 2.

Inducción en veces deARNm de CSTB

Casos

(a)

Cistatina B (CSTB)

(b) tejidos sin carcinoma hepatocelular tejidos con carcinoma hepatocelular

(a) (b)

Figura 4 Figura 6 Figura 8

s e n s i b i l i d a d

Curva ROC de CSTB El área por debajo de la curva ROC = 0, 746 Desviación estándar = 0, 041 Intervalo de confianza 95 % = 0, 670~0, 812

Curva ROC de AFP El área por debajo de la curva ROC = 0, 795 Desviación estándar = 0, 038 Intervalo de confianza 95 % = 0, 742~0, 855

Comparaciones de la curva ROC Diferencia del área por debajo de la curva ROC = 0, 049 Desviación estándar = 0, 038 Intervalo de confianza 95 % = 0, 051~0, 150 Nivel de significancia p = 0, 337P