Derivados y conjugados de la metanfetamina para inmunoensayo.

Un compuesto con la fórmula

en el que R1 es un enlazante alquilo que contiene 2-15 átomos de carbono y 0-5 6 heteroátomos,

R2 es un gruposaliente, y R3 es un grupo protector seleccionado a partir del grupo que incluye trifluoroacetilo, terbutiloxicarboniloy benciloxicarbonilo.

Derivados y conjugados de la metanfetamina para inmunoensayo Campo de la invención La presente invención generalmente hace referencia al campo de los métodos de inmunoensayo para la determinación de drogas de abuso en muestras biológicas, en particular, a métodos de inmunoensayo para la determinación de drogas anfetamínicas y, más particularmente, de derivados y conjugados de la metanfetamina útiles para tal cuestión.

Antecedentes de la invención La utilización y abuso de un tipo de drogas de diseño ilegales, comúnmente conocidas como drogas de tipo éxtasis, ha aumentado significativamente en los últimos años. Estos compuestos, que son derivados de la anfetamina que difieren de ésta por tener un sistema de anillo fusionado de metilendioxifenilo, incluyen el MDA (3, 4-metilendioxianfetamina) , MDMA, también conocido como “éxtasis” (3, 4-metilendioxi-N-metilanfetamina) , MDEA, también conocido como "Eva" (3, 4-metilendioxi-N-etilanfetamina) , BDB (3, 4-metilendioxifenil-2butanamina) , y MBDB (3, 4-metilendioxifenil-N-metilbutanamina) .

Hasta ahora, los métodos para la detección de las drogas de tipo éxtasis ha incluido principalmente inmunoensayos originalmente desarrollados para la detección de anfetamina y/o metanfetamina. La detección de una droga de tipo éxtasis mediante tales ensayos se basa en las reacciones cruzadas limitadas que casualmente pueden existir entre la droga de tipo éxtasis y los anticuerpos para la anfetamina y/o metanfetamina. Un resultado positivo en tal ensayo puede no indicar qué sustancia particular o miembro de los derivados de la clase metilendioxi (MD) está presente en la muestra.

En general, los inmunoensayos de anfetamina y metanfetamina son relativamente insensibles y no específicos para las drogas de tipo éxtasis. Particularmente, tales ensayos tienen un reconocimiento limitado del derivado MDEA.

La presente invención está dirigida a remediar estos y otros problemas relacionados con la utilización de los inmunoensayos de anfetamina y/o metanfetamina convencionales para la detección de drogas pertenecientes a la clase metilendioxi o de tipo éxtasis.

En la evaluación de las drogas de abuso, los inmunoensayos, particularmente los inmunoensayos de unión competitiva, han demostrado ser especialmente ventajoso. En los inmunoensayos de unión competitiva un analito en una muestra biológica compite con un reactivo marcado, o un análogo del analito, o un trazador, por un número limitado de lugares de unión receptores en los anticuerpos específicos para el analito y el análogo del analito. Habitualmente, enzimas tales como la º-galactosidasa y la peroxidasa, moléculas fluorescentes tales como compuestos de fluoresceína, compuestos radioactivos tales como el 125I, y micropartículas marcan las sustancias utilizadas como trazadores. La concentración del analito en la muestra determina la cantidad de análogo del analito que se unirá al anticuerpo. La cantidad de análogo del analito que se unirá es inversamente proporcional a la concentración del analito en la muestra dado que el analito y el análogo del analito se unen al anticuerpo en proporción a sus concentraciones respectivas. La cantidad de análogo del analito libre o unido puede determinarse mediante métodos adecuados al marcador particular que se utilice.

Actualmente, los ensayos automatizados basados en la interacción cinética de las micropartículas en una solución, medida por los cambios en la transmisión de la luz, son populares. En ausencia de droga en la muestra, el anticuerpo libre se une a unos conjugados de micropartículas de droga, causando la formación de agregados de partículas. Tal y como avanza la reacción de agregación en ausencia de droga en la muestra, la absorbancia aumenta. Cuando una muestra contiene la droga en cuestión, la droga compite con un derivado de la droga unido a una partícula por el anticuerpo libre. El anticuerpo unido a la droga de la muestra deja de estar disponible para promover la agregación de partículas y se inhibe la subsiguiente formación de la red de partículas. La presencia de droga en la muestra disminuye aumentando la absorbancia en proporción a la concentración de la droga en la muestra. El contenido de droga en la muestra se determina en relación al valor obtenido para un límite conocido de concentración de la droga.

Un problema en los ensayos para las drogas de tipo anfetamina es que los métodos previos en la materia no proporcionan suficiente reactividad cruzada y desplazamiento de los anticuerpos para medir todos los analitos de tipo anfetamina en una muestra, especialmente la anfetamina, la metanfetamina, la 3, 4-metilendioxianfetamina (MDA) , 3, 4-metilendioxi-N-metilanfetamina (MDMA) , y 3, 4-metilendioxi-N-etilanfetamina (MDEA) , con una sensibilidad suficiente. Los derivados de la metanfetamina de la presente invención solucionan tales problemas mediante la provisión de la reactividad cruzada y el desplazamiento de los anticuerpos para la metanfetamina requeridos para la medición sensible de la anfetamina, la metanfetamina, y los compuestos de tipo éxtasis. Otro problema solucionado mediante la presente invención es el relacionado con la conjugación no deseada de los haptenos mediante los grupos amino libres en el hapteno de la metanfetamina. Los derivados de la presente invención evitan este problema.

En la patente de EE.UU. 5.135.863 publicada el 4 de agosto de 1992, Hu et al. Describen conjugados que incluyen un marcador unido a un análogo de la anfetamina o la metanfetamina mediante un enlace tiol. Los conjugados también incluyen un enlazante unido al anillo de benceno en posición meta o para, y el nitrógeno de la anfetamina está desprotegido.

En la solicitud de patente de EE.UU. 2001/0051158 publicada el 13 de diciembre de 2001, Owens et al.

describen haptenos inmunoquímicos que son derivados en posición meta de la metanfetamina. El grupo amino libre del hapteno de la metanfetamina está desprotegido.

Resumen de la invención Los compuestos de la presente invención son derivados de la metanfetamina que tienen un enlazante alquilo meta-sustituido en el anillo de benceno y un grupo protector en el nitrógeno del hapteno de la metanfetamina. Tales compuestos tienen la estructura en la que R1 es un enlazante alquilo que contiene 2-15 átomos de carbono y 0-6 heteroátomos, R2 es un grupo 20 saliente, y R3 es un grupo protector, seleccionado a partir del grupo que incluye trifluoroacetilo, terbutiloxicarbonilo y benciloxicarbonilo.

La presente invención también hace referencia a un compuesto con la fórmula en el que R1 es un enlazante alquilo que contiene 2-15 átomos de carbono y 0-6 heteroátomos y R2 es un polisacárido o una micropartícula.

La presente invención también hace referencia a un inmunoensayo para la determinación de metanfetamina en 30 una muestra que incluye los pasos de:

(a) combinar una muestra sospechosa de contener metanfetamina con un anticuerpo específico para la metanfetamina y un análogo del analito marcado con la estructura competitivamente al anticuerpo, y

(b) determinar la cantidad de análogo marcado unido o no unido al anticuerpo como medición de la metanfetamina en la muestra.

Dentro del ámbito de la presente invención también se incluye un kit de evaluación para su utilización en la determinación de la metanfetamina en una muestra que incluye

(a) un anticuerpo específico para la metanfetamina y

(b) un análogo del analito marcado con la estructura

en el que R1 es un enlazante alquilo que contiene 2-15 átomos de carbono y 0-6 heteroátomos y R2 es un polisacárido o una micropartícula.

Un compuesto preferible de la invención es el 2, 5-dioxo-pirrolidin-1-il-éster del ácido 4-{[4- (3-{ (S) -2-[metil- (2, 2, 2trifluoro-acetil) -amino]-propil}-fenoxi) -butirilamino]-metil}-benzoico, con la estructura Este compuesto, cuando se conjuga con aminodextrano seguido de la desprotección del grupo N-trifluoroacetato, proporciona un conjugado que, cuando se utiliza en un inmunoensayo donde compite con la metanfetamina libre por la unión a un anticuerpo específico para metanfetamina inmovilizado sobre una micropartícula, proporciona una curva estándar con un buen ajuste con el sistema anfetamina-aminodextrano-anticuerpo correspondiente.

Breve descripción de las ilustraciones La figura 1 es una representación esquemática que muestra la síntesis del compuesto 1 tal y como se describe en los ejemplos 1 y 2.

Las figuras 2 y 3 son representaciones esquemáticas que muestran la síntesis del compuesto 8 tal y como se describe en los ejemplos 3-8.

La figura 4 es una representación esquemática que muestra la síntesis del compuesto 10 tal... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto con la fórmula en el que R1 es un enlazante alquilo que contiene 2-15 átomos de carbono y 0-6 heteroátomos, R2 es un grupo saliente, y R3 es un grupo protector seleccionado a partir del grupo que incluye trifluoroacetilo, terbutiloxicarbonilo y benciloxicarbonilo.

2. El compuesto de reivindicación 1, en el que R3 es trifluoroacetilo.

3. El compuesto de reivindicación 1, en el que R2 es un polisacárido o una micropartícula.

4. El compuesto de reivindicación 3, en el que R2 es aminodextrano.

5. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 2, con la fórmula 2, 5-dioxo-pirrolidin-1-il-éster del ácido 4-{[4- (3{ (S) -2-[metil- (2, 2, 2-trifluoro-acetil) -amino]-propil}-fenoxi) -butirilamino]-metil}-benzoico, con la estructura 6. Un compuesto con la fórmula en el que R1 es un enlazante alquilo que contiene 2-15 átomos de carbono y 0-6 heteroátomos y R2 es un polisacárido o una micropartícula.

7. El compuesto de reivindicación 6, en el que R2 es aminodextrano.

8. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 7, con la fórmula

30 9. Un inmunoensayo para la determinación de metanfetamina en una muestra que incluye los pasos de: (a) combinar una muestra sospechosa de contener metanfetamina con un anticuerpo específico para la metanfetamina y un análogo del analito marcado con la estructura

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en el que R1 es un enlazante alquilo que contiene 2-15 átomos de carbono y 0-6 heteroátomos y R2 es un polisacárido o una micropartícula, donde la metanfetamina y el análogo del analito se unen competitivamente al anticuerpo, y

(b) determinar la cantidad de análogo marcado unido o no unido al anticuerpo como medición de la metanfetamina en la muestra.

10. El inmunoensayo de la reivindicación 9, en el que R2 es aminodextrano. 10 11. Un kit de evaluación para su utilización en la determinación de la metanfetamina en una muestra que incluye

(a) un anticuerpo específico para la metanfetamina y

(b) un análogo del analito marcado con la estructura

en el que R1 es un enlazante alquilo que contiene 2-15 átomos de carbono y 0-6 heteroátomos y R2 es un polisacárido o una micropartícula.

12. El kit de evaluación de la reivindicación 11, en el que R2 es aminodextrano.