Composiciones formación de dímeros reducida.

Uso de trehalosa y tioglicerol en una composición desecada por congelación que comprende los péptidos de lasSEC ID Nº 1 a 4 para prevenir o reducir la dimerización de dichos péptidos en dicha composición

Composiciones formación de dímeros reducida

Campo de la invención La presente invención se refiere al uso de un carbohidrato o derivado de carbohidrato no reductor y al menos un agente que inhibe la formación de dímero en una composición desecada por congelación que comprende al menos un péptido que contiene un residuo de cisteína libre, para proporcionar una composición desecada por congelación con mejor estabilidad durante el almacenamiento prolongado.

Antecedentes de la invención En la técnica se conocen varios procedimientos que se usan para conservar material perecedero o para hacer que el

material sea más cómodo de transportar. Para materiales farmacéuticos, biotecnológicos o alimentarios, un procedimiento típico es la desecación por congelación (también conocida como liofilización o criodesecación) . Este es un procedimiento de deshidratación que funcional congelando el material y reduciendo después la presión que le rodea y añadiendo únicamente suficiente calor para permitir que el agua congelada en el material sublime directamente desde la fase sólida a gas. El producto desecado por congelación resultante se puede reconstituir

después en solución para su futuro uso.

La ventaja de un producto desecado por congelación es que generalmente es más estable durante el almacenamiento y el transporte y tiene una semivida más prolongada que el material equivalente en solución. No obstante, existen algunos problemas con la desecación por congelación en cuanto a que durante los procedimientos 25 de congelación y desecación se pueden producir daños en el material a conservar. Estos problemas se abordan, en cierta medida, mediante la adición de crioprotectores y lioprotectores al material que se va a desecar por congelación. No obstante, lo que está bien reconocido es que algunos materiales perecederos, especialmente péptidos que contienen al menos un residuo de cisteína libre, son objeto de degradación y daños incluso después de finalizado el procedimiento de desecación por congelación. Es decir, aunque la desecación por congelación tiene un efecto conservante, los productos desecados por congelación que comprenden péptidos que comprenden al menos un residuo de cisteína libre suelen tener una semivida más corta de lo deseado. Existe una clara necesidad de medios para mejorar la estabilidad de las composiciones desecadas por congelación que comprenden dichos péptidos.

Un ejemplo de una forma previa de almacenamiento para un polipéptido específico se encuentra en el documento WO/1999/032135, que trata de formas líquidas y liofilizadas del factor de crecimiento de queratinocitos 2 (KGF-2) y derivados del mismo.

El documento EP1958645 se refiere a péptidos derivados del alérgeno del polen de ambrosía Amb a 1. El

documento WO/1999/034826 se refiere a un procedimiento para desensibilizar a un paciente frente a un alérgeno polipeptídico que comprende administrar al paciente un péptido derivado del alérgeno.

Sumario de la invención 45 La invención se refiere al uso de trehalosa y tioglicerol en una composición desecada por congelación que comprende los péptidos de las SEC ID Nº 1 a 4 para prevenir o reducir la dimerización de dichos péptidos en dicha composición.

La invención se refiere además a un procedimiento de producir una composición desecada por congelación estable 50 que comprende los péptidos de las SEC ID Nº 1 a 4, comprendiendo dicho procedimiento:

a) preparar una composición que comprende en solución (i) trehalosa, (ii) tioglicerol y (iii) dichos péptidos; y

b) desecar por congelación la composición resultante de la etapa (a) .

En una realización, la composición desecada por congelación resultante es estable durante al menos 2 años cuando se almacena a una temperatura de 2 – 8 ºC.

La invención también proporciona un procedimiento de reconstituir una composición desecada por congelación estable producida de acuerdo con el procedimiento de la invención, donde dicho procedimiento comprende 60 reconstituir dicha composición desecada por congelación en solución.

La invención se refiere además a una composición desecada por congelación estable que comprende los péptidos de las SEC ID Nº 1 a 4 %, tioglicerol y trehalosa.

Descripción de las figuras Las Figuras 1 a 83 muestran la estabilidad de los péptidos almacenados en diferentes condiciones como se ha indicado cuando están comprendidos en diferentes composiciones desecadas por congelación como se describe en los ejemplos (T= trehalosa, S= sacarosa, M= manitol, TG= tioglicerol, G= glicina, Met= metionina) . El tiempo (semanas) se muestra en el eje X. La cantidad de péptido no degradado presente en una solución reconstituida a partir de una composición dada se muestra en el eje Y. La cantidad se muestra como un porcentaje relativo a la cantidad de un patrón del péptido MLA07 que no se ha desecado por congelación.

Cada figura muestra siete conjuntos de resultados diferentes que corresponden a cada uno de los siguientes péptidos diferentes: MLA05 (línea oscura, puntos circulares pequeños) ; MLA12 (línea oscura, puntos cuadrados) , MLA03 (línea gris claro, puntos triangulares) ; MLA14 (línea gris claro, puntos en forma de x) ; MLA01 (línea oscura, puntos en forma de x) , MLA04 (línea oscura, puntos circulares grandes) ; MLA07 (línea oscura, puntos en forma de línea vertical) . Se generaron datos tras la desecación por congelación de una mezcla de los siete péptidos en cada composición.

La Figura 84 muestra la estabilidad a 30 °C/HR del 65 % durante 12 meses de una mezcla de los siete péptidos: MLA05; MLA12, MLA03; MLA14; MLA01; MLA04 y MLA07, comprendidos en las composiciones específicas descritas en el ejemplo 4, que es tioglicerol "bajo" (rombos) y tioglicerol "alto" (cuadrados) .

Descripción de las secuencias Las SEQ ID Nº: 1 a 4 representan las secuencias de péptidos que se usan para incluir en las composiciones de la invención. Las SEQ ID Nº: 84 a 86 representan las secuencias de péptidos adicionales que se pueden incluir en las composiciones de la invención.

Descripción detallada de la invención Desecación por congelación La desecación por congelación es una operación compleja donde el disolvente (normalmente agua) se extrae de un producto mediante sublimación. Como se sabe bien, la sublimación se produce cuando un líquido congelado pasa directamente a la fase gaseosa sin pasar por la fase de líquido. La sublimación es una función de la presión y la temperatura cuyo equilibrio es crucial para el éxito de la desecación por congelación.

El procedimiento de desecación por congelación consiste en tres etapas: congelación, desecación primaria y desecación secundaria. Durante la etapa de congelación, la solución se convierte en un sólido. El procedimiento de congelación debe controlarse cuidadosamente, ya que la velocidad de congelación afecta al tamaño de los cristales de hielo formados en el producto que pueden afectar a la estabilidad y también pueden afectar a la velocidad de desecación durante las fases de desecación primaria y secundaria.

Es muy importante realizar la etapa de congelación por debajo de una temperatura crítica. Esta temperatura es la temperatura eutéctica (Teut) para materiales cristalinos o la temperatura de transición vítrea (Tv’) del soluto concentrado máximamente congelado para productos amorfos.

Durante la desecación primaria, el hielo se extrae del producto congelado mediante sublimación, que da como resultado un producto desecado estructuralmente intacto. Esto requiere un control cuidadoso de la temperatura de conservación y la presión de la cámara en el dispositivo de desecación. La velocidad de sublimación del hielo desde un producto congelado depende de varios factores que el experto en la técnica apreciará. Es importante que durante la desecación primaria la temperatura del producto en la interfaz de sublimación (Tp) no supere la “temperatura crítica” de la formulación, es decir no debe conseguir suficiente fluidez para fluir y, por tanto, destruir la estructura de la torta. Esta también se conoce como la temperatura de colapso (Tc) y normalmente es varios grados más alta que la Tv’.

Como se ha mencionado, la temperatura crítica es Teut para los materiales principalmente cristalinos y la Tv’ o la Tc para los amorfos. Los materiales cristalinos son fáciles de desecar por congelación, ya que la Teut suele ser alta (p. ej., la Teut del agente espesante muy popular manitol es de -3 ºC) . Además, la “torta" desecada por congelación resultante normalmente tiene un aspecto atractivo cuando deriva de... [Seguir leyendo]

1. Uso de trehalosa y tioglicerol en una composición desecada por congelación que comprende los péptidos de las SEC ID Nº 1 a 4 para prevenir o reducir la dimerización de dichos péptidos en dicha composición. 5

2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde la composición comprende además los péptidos de las SEC ID Nº 84 a 86.

3. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, donde la composición no comprende péptidos adicionales.

Un procedimiento de producir una composición desecada por congelación estable que comprende los péptidos de las SEC ID Nº 1 a 4, comprendiendo dicho procedimiento:

a) preparar una composición que comprende en solución: (i) trehalosa, (ii) tioglicerol y (iii) dichos péptidos; y 15 b) desecar por congelación la composición resultante de la etapa (a) .

5. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 4, donde la composición comprende además los péptidos de las SEC ID Nº 84 a 86.

6. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 5, donde la composición no comprende péptidos adicionales.

7. Un procedimiento de reconstitución de una composición desecada por congelación estable producida de acuerdo con el procedimiento de la reivindicación 5 o 6, donde dicho procedimiento comprende reconstituir dicha composición desecada por congelación en solución.

8. Una composición desecada por congelación estable que comprende los péptidos de las SEC ID Nº 1 a 4 %, tioglicerol y trehalosa.

9. Una composición de acuerdo con la reivindicación 8, que comprende además los péptidos de las SEC ID Nº 84 a 30 86.

10. Una composición de acuerdo con la reivindicación 9, que no comprende péptidos adicionales.