Una composición que comprende:

(i) al menos un polipéptido original seleccionado entre RGW03B (RDLLENGAIFLPSG;

SEC ID Nº: 9), RGW03A (DVFENGAIFVPSG; SEC ID Nº: 8) o RGW03 (KDLLENGAIFVTSG; SEC ID Nº: 7) o una variante de los mismos;

(ii) al menos un polipéptido original seleccionado entre RGW01 (GMIKSNDGPPI; SEC ID Nº: 1), RGW01A (GLIKSHDGPPV; SEC ID Nº: 2) o RGW01B (GLIKSNDGPAA; SEC ID Nº: 3) o una variante de los mismos;

(iii) al menos un polipéptido original seleccionado entre RGW04 (KAGMIPAEPGEA; SEC ID Nº: 10) o RGW04A (SAGMIPAEPGEA; SEC ID Nº: 11) o una variante de los mismos; y

(iv) opcionalmente al menos un polipéptido original seleccionado entre cualquiera de SEC ID Nº: 4-6 y 12-31 o una variante de los mismos;

en la que dichas variantes de (i) a (iv) son:

(a) un polipéptido de 9 a 20 aminoácidos de longitud que comprende una región que consiste en: - la secuencia de péptido original equivalente; o

- una secuencia homóloga que tiene una identidad de secuencia de al menos el 65% con la secuencia de péptido original equivalente, secuencia que es capaz de inducir inmunotolerancia en un individuo a la secuencia de péptido original equivalente, o

(b) un polipéptido de 9 a 20 aminoácidos de longitud que comprende una región que consiste en una secuencia que representa:

- un fragmento de al menos 9 aminoácidos contiguos de la secuencia peptídica original equivalente; o

- un homólogo de dicho fragmento que tiene una identidad de secuencia de al menos el 65% con dichos al menos 9 aminoácidos contiguos de la secuencia peptídica original equivalente, secuencia que es capaz de inducir inmunotolerancia en un individuo a la secuencia peptídica original equivalente, para su uso en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía mediante inducción de inmunotolerancia

Vacuna que comprende péptidos Amb a 1 para uso en el tratamiento de alergia a ambrosía

Campo de la invención

La presente invención se refiere a composiciones para prevenir o tratar alergia a ambrosía.

Antecedentes de la invención

El reconocimiento de antígeno de células T requiere que las células presentadoras de antígeno (CPA) presenten fragmentos de antígeno (péptidos) en su superficie celular en asociación con moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (CMH) . Las células T usan sus receptores de células T específicos de antígeno (TCR) para reconocer los fragmentos de antígeno presentados por las CPA. Tal reconocimiento actúa como un desencadenante del sistema inmune para generar una diversidad de respuestas para erradicar el antígeno que se ha reconocido.

El reconocimiento de antígenos externos por el sistema inmune de un organismo, tal como el hombre, puede en algunos casos dar como resultado enfermedades, conocidas como afecciones atópicas. Los ejemplos de estas últimas son las enfermedades alérgicas incluyendo asma, dermatitis atópica y rinitis alérgica. En este grupo de enfermedades, los linfocitos B generan anticuerpos de la clase IgE (en seres humanos) que se unen a antígenos obtenidos externamente, que se denominan en este contexto alérgenos ya que estas moléculas provocan una respuesta alérgica. La producción de IgE específica de alérgeno es dependiente de linfocitos T que también se activan por (son específicos para) el alérgeno. Los anticuerpos de IgE específicos de alérgenos se unen a la superficie de células tales como basófilos y mastocitos debido a la expresión por estas células de receptores de superficie para IgE.

El entrecruzamiento de moléculas de IgE unidas a superficie por alérgenos da como resultado la desgranulación de estas células efectoras causando la liberación de mediadores inflamatorios tales como histamina, 5-hidroxitriptamina y mediadores lipídicos tales como los sulfidoleucotrienos. Además de los acontecimientos dependientes de IgE, determinadas enfermedades alérgicas tales como asma se caracterizan por acontecimientos independientes de IgE.

Las enfermedades alérgicas mediadas por IgE actualmente se tratan con agentes que proporcionan alivio o prevención sintomática. Los ejemplos de tales agentes son antihistaminas, agonistas 12 y glucocorticoides. Adicionalmente, algunas enfermedades mediadas por IgE se tratan mediante procedimientos de desensibilización que implican la inyección periódica de componentes o extractos de alérgeno. Los tratamientos de desensibilización pueden inducir una respuesta de IgG que compite con IgE por el alérgeno o los mismos pueden inducir células T supresoras específicas que bloquean la síntesis de IgE dirigida frente al alérgeno. Esta forma de tratamiento no siempre es eficaz y comporta el riesgo de provocar efectos secundarios graves, particularmente choque anafiláctico general. Esto puede ser fatal a menos que se reconozca inmediatamente y se trate con adrenalina. Un tratamiento terapéutico que disminuiría o eliminaría la respuesta inmune alérgica indeseada a un alérgeno particular, sin alterar la reactividad inmune a otros antígenos extraños o desencadenar una respuesta alérgica él mismo sería de gran beneficio para los individuos alérgicos.

Los alérgenos de ambrosía se reconocen universalmente como una causa principal de enfermedades alérgicas en seres humanos y animales, incluyendo asma, rinitis alérgica y dermatitis alérgica. El documento WO 96/13589 describe péptidos de los alérgenos de proteína principales de polen de ambrosía corto y métodos de tratamiento y diagnóstico de sensibilidad a alérgenos de polen de ambrosía. Las proteínas presentes en el polen de ambrosía son particularmente importantes. Por ejemplo, aproximadamente el 75% de aquellos que sufren de fiebre del heno en los Estados Unidos son alérgicos al polen de ambrosía. Fiebre del heno es el término común para una forma de alergia estacional caracterizada por estornudos, mucosidad y picazón de ojos. El término "fiebre del heno" surgió debido a que esta forma de enfermedad alérgica es más frecuente durante la "temporada del heno" que corresponde con la época de floración de muchas plantas, que es cuando las mismas liberan las cantidades más elevadas de polen. Esto es particularmente frecuente desde el final del verano hasta el principio del otoño, típicamente desde el final de junio hasta el final de septiembre (en el Hemisferio Norte) .

Se ha calculado que para adultos en los Estados Unidos, la fiebre del heno es la 5ª enfermedad principal crónica y una causa principal de ausentismo laboral, que da como resultado cerca de 4 millones de días laborales de ausencia o perdidos cada año, dando como resultado un coste total de más de 700 millones de dólares en pérdida de productividad total. Las alergias son la afección crónica más frecuentemente informada en niños, limitando las actividades de más del 40% de ellos. Cada año, las alergias provocan más de 17 millones de visitas ambulatorias al médico en los Estados Unidos; las alergias estacionales tales como la fiebre del heno representan más de la mitad de estas visitas por alergia.

Por lo tanto, un tratamiento terapéutico o preventivo sería de gran beneficio para seres humanos que sufren o que están en riesgo de sufrir alergia a ambrosía.

Sumario de la invención

La alergia a ambrosía está causada típicamente por ambrosía Común (Ambrosia artemisiifolia) . El alérgeno principal en el polen de ambrosía es Amb a 1. Esta proteína existe como varias isoformas diferentes, Amb a 1.1, 1.2, 1.3 y 1.4.

Los presentes inventores han descubierto que determinadas combinaciones de fragmentos peptídicos obtenidos a partir de las proteínas Amb a 1 son particularmente útiles para la desensibilización de individuos a estos alérgenos. Las combinaciones de polipéptidos de la invención se han seleccionado por su capacidad de unirse a muchas moléculas del CMH de Clase II, por ser altamente solubles, por no desencadenar liberación de histamina a partir de basófilos extraídos a partir de un panel de individuos alérgicos a la ambrosía y por inducir una respuesta de citoquina en una proporción elevada de sujetos a partir de un panel de individuos alérgicos a ambrosía. Por lo tanto, las composiciones, productos, vectores y formulaciones de la invención se pueden proporcionar a individuos para prevenir o tratar alergia a ambrosía mediante inducción de inmunotolerancia.

Los péptidos de la invención se seleccionaron como epítopos de células T potenciales a través de métodos in silico. Cuando se identificaron las regiones que contenían epítopos, las mismas se analizaron adicionalmente para determinar cuáles de ellas estaban altamente conservadas entre las cuatro isoformas diferentes de Amb a 1. Estos polipéptidos candidatos después se seleccionaron adicionalmente para uso potencial en inducción de inmunotolerancia. Más específicamente, los mismos se analizaron para determinar características de solubilidad y la capacidad de inducir liberación de citoquina a partir de PBMC obtenidas de individuos alérgicos a ambrosía. En algunos casos, las secuencias peptídicas se sometieron a ingeniería genética para mejorar la solubilidad y/o reducir la formación de dímeros.

Una dificultad asociada con los enfoques de desensibilización basados en inmunización peptídica estriba en cómo seleccionar un tamaño apropiado y región del alérgeno como la base del péptido que se tiene que usar para la inmunización. El tamaño del péptido de elección es crucial. Si el péptido es demasiado pequeño, la vacuna no será eficaz para inducir una respuesta inmunológica. Si los péptidos son demasiado grandes o si el antígeno completo se introduce en un individuo, existe el riesgo de inducir reacciones adversas, tales como anafilaxis, que pueden ser fatales. Este riesgo puede ser mayor si los péptidos son poco solubles.

Los polipéptidos de la invención se han seleccionado para conservar especificidad de células T a la vez que tienen un tamaño lo suficientemente pequeño para no poseer una estructura terciaria significativa que les posibilitaría conservar la conformación de un epítopo de unión a IgE de la molécula completa. Por lo tanto, los polipéptidos de la invención no inducen entrecruzamiento significativo de moléculas de IgE específicas adyacentes en células tales como mastocitos y basófilos y han demostrado que no causan liberación de histamina significativa a partir de basófilos humanos.

Una... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende:

(i) al menos un polipéptido original seleccionado entre RGW03B (RDLLENGAIFLPSG; SEC ID Nº : 9) , RGW03A (DVFENGAIFVPSG; SEC ID Nº : 8) o RGW03 (KDLLENGAIFVTSG; SEC ID Nº : 7) o una variante de los mismos;

(ii) al menos un polipéptido original seleccionado entre RGW01 (GMIKSNDGPPI; SEC ID Nº : 1) , RGW01A (GLIKSHDGPPV; SEC ID Nº : 2) o RGW01B (GLIKSNDGPAA; SEC ID Nº : 3) o una variante de los mismos;

(iii) al menos un polipéptido original seleccionado entre RGW04 (KAGMIPAEPGEA; SEC ID Nº : 10) o RGW04A (SAGMIPAEPGEA; SEC ID Nº : 11) o una variante de los mismos; y (iv) opcionalmente al menos un polipéptido original seleccionado entre cualquiera de SEC ID Nº : 4-6 y 12-31 o una variante de los mismos;

en la que dichas variantes de (i) a (iv) son:

(a) un polipéptido de 9 a 20 aminoácidos de longitud que comprende una región que consiste en:

- la secuencia de péptido original equivalente; o

- una secuencia homóloga que tiene una identidad de secuencia de al menos el 65% con la secuencia de péptido original equivalente, secuencia que es capaz de inducir inmunotolerancia en un individuo a la secuencia de péptido original equivalente, o

(b) un polipéptido de 9 a 20 aminoácidos de longitud que comprende una región que consiste en una secuencia que representa:

- un fragmento de al menos 9 aminoácidos contiguos de la secuencia peptídica original equivalente; o

- un homólogo de dicho fragmento que tiene una identidad de secuencia de al menos el 65% con dichos al menos 9 aminoácidos contiguos de la secuencia peptídica original equivalente,

secuencia que es capaz de inducir inmunotolerancia en un individuo a la secuencia peptídica original equivalente, para su uso en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía mediante inducción de inmunotolerancia.

2. La composición para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la composición:

a) es capaz de inducir inmunotolerancia en al menos el 50% o al menos el 60% de un panel de individuos alérgicos a ambrosía en la población; y/o b) comprende al menos un polipéptido adicional hasta un total de trece polipéptidos únicos/diferentes, en la que los polipéptidos adicionales:

- comprenden una secuencia que tiene una identidad de secuencia de al menos el 65% con al menos 9 o más aminoácidos contiguos en cualquiera de SEC ID Nº : 1 a 31 anteriores no seleccionadas en (i) a (iv) ; y

- tiene de 9 a 30 aminoácidos de longitud; y/o

c) comprende hasta un máximo de trece polipéptidos.

3. La composición para uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, que comprende al menos un polipéptido de acuerdo con la reivindicación 2 (b) que tiene 9 a 20 ó 13 a 17 aminoácidos de longitud y/o en la que dicho polipéptido tiene una identidad de secuencia de al menos el 70% con al menos 9 o más aminoácidos contiguos en cualquiera de SEC ID Nº : 1 a 31.

4. Una composición para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende el polipéptido RGW01 o una variante del mismo como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) ; el polipéptido RGW03B

o una variante del mismo como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) ; y el polipéptido RGW04A o una variante del mismo como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) .

5. Una composición para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende al menos un polipéptido seleccionado entre un polipéptido de RGW02 (GSSQIWIDHSSLSKS; SEC ID Nº : 4) , RGW09 (ETRRSLKTSGAYN; SEC ID Nº : 26) , RGW06 (VVNSDKTIDGRGVKVE; SEC ID Nº : 14) , RGW06A (AINNDKTIDGRGAKVE; SEC ID Nº : 15) , RGW10 (FGFFQVVNNNYD; SEC ID Nº : 27) o RGW10A (HGFFQVVNNNYD; SEC ID Nº : 28) , RGW05 (KEGTLRFAAAQN-RP; SEC ID Nº : 12) o RGW05A (KEGTLRFGAAQNRP ; SEC ID Nº : 13) o una variante de los mismos como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) ; y opcionalmente que comprende además un polipéptido de RGW07 (GEAAIKLTSSAGVLS; SEC ID Nº : 16) , RGW07C (KGEAAIKLTSSAGVLSK SEC ID Nº : 19) o RGW07D (KGEAAIKLTSSAGVLSKK SEC ID Nº : 20) o una variante de los mismos como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) .

6. Una composición para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende RGW01 o una variante del mismo como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) ; RWG03B o una variante del mismo como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) ; RGW04A o una variante del mismo como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) ; RGW02 o una variante del mismo como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) ; RGW05 o una variante del mismo como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) ; RGW06A o una variante del mismo como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) ; y RGW07D o una variante del mismo como se define en la reivindicación 1 (a)

o (b) .

7. La composición para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que:

(i) uno o más de los polipéptidos tiene una o más modificaciones seleccionadas entre las siguientes:

(a) acetilación N terminal;

(b) amidación C terminal;

(c) uno o más hidrógenos en las aminas de cadena lateral de Arginina y/o Lisina reemplazadas con un grupo metileno;

(d) glicosilación; y

(e) fosforilación; y/o

(ii) al menos uno de los péptidos se ha sometido a ingeniería genética para ser soluble de forma que el mismo comprende:

(a) N terminal a los restos del péptido que flanquean un epítopo de célula T: uno a seis aminoácidos contiguos que corresponden a los dos a seis aminoácidos contiguos inmediatamente N terminales a dichos restos en la secuencia de la proteína a partir de la cual se obtiene el péptido; y/o

(b) C terminal a los restos del péptido que flanquean un epítopo de célula T: uno a seis aminoácidos contiguos que corresponden a los uno a seis aminoácidos contiguos inmediatamente C terminales a dichos restos en la secuencia de la proteína a partir de la cual se obtiene el péptido; o

(c) N y/o C terminal a los restos del péptido que flanquean un epítopo de célula T, al menos un aminoácido seleccionado entre arginina, lisina, histidina, glutamato y aspartato,

en la que el polipéptido tiene una solubilidad de al menos 3, 5 mg/ml y el epítopo de célula T tiene una solubilidad de menos de 3, 5 mg/ml; y/o (iii) al menos uno de los péptidos se ha sometido a ingeniería genética para que sea soluble de forma que adicionalmente:

(a) cualquier resto de cisteína en la secuencia nativa del péptido se reemplaza con serina o ácido 2aminobutírico; y/o

(b) cualquier resto hidrófobo en los hasta tres aminoácidos en el extremo N y/o C de la secuencia nativa del péptido, que no están comprendidos en un epítopo de célula T, se suprimen; y/o

(c) dos aminoácidos consecutivos cualquiera que comprenden la secuencia Asp-Gly en los hasta cuatro aminoácidos en el extremo N y/o C de la secuencia nativa del péptido, que no están comprendidos en un epítopo de célula T, se suprimen; y/o

(iv) cada polipéptido tiene una concentración en el intervalo de 0, 03 a 200 nmol/ml, 0, 3 a 200 nmol/ml o 30 a 120 nmol/ml

8. Una composición que comprende al menos tres secuencias polinucleotídicas las cuales cuando se expresan provocan la producción de una composición como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que opcionalmente cada secuencia polinucleotídica capaz de expresar un polipéptido diferente está presente en el mismo o en diferentes vectores polinucleotídicos, para uso en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía mediante inducción de inmunotolerancia.

9. Un producto que contiene entre tres y trece polipéptidos, en el que al menos un polipéptido se selecciona entre cada uno de los siguientes grupos de polipéptidos:

a) RGW01 (GMIKSNDGPPI; SEC ID Nº : 1) , RGW01A (GLIKSHDGPPV; SEC ID Nº : 2) o RGW01B (GLIKSNDGPAA; SEC ID Nº : 3) o una variante de los mismos como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) ; b) RGW03B (RDLLENGAIFLPSG; SEC ID Nº : 9) , RGW03A (DVFENGAIFVPSG; SEC ID Nº : 8) o RGW03 (KDLLENGAIFVTSG; SEC ID Nº : 7) o una variante de los mismos como se define en la reivindicación 1 (a)

o (b) ; y c) RGW04 (KAGMIPAEPGEA; SEC ID Nº : 10) o RGW04A (SAGMIPAEPGEA; SEC ID Nº : 11) o una variante de los mismos como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) ; en la que cada polipéptido diferente es para uso simultáneo, separado o secuencial en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía mediante inducción de inmunotolerancia.

10. Un producto que contiene entre tres y trece secuencias polinucleotídicas, cada una de las cuales codifica un polipéptido diferente como se define en la reivindicación 1 ó 2, en el que al menos un polinucleótido codifica un polipéptido seleccionado entre cada uno de los siguientes grupos de polipéptidos:

a) RGW01 (GMIKSNDGPPI; SEC ID Nº : 1) , RGW01A (GLIKSHDGPPV; SEC ID Nº : 2) o RGW01B (GLIKSNDGPAA; SEC ID Nº : 3) o una variante de los mismos como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) ; b) RGW03B (RDLLENGAIFLPSG; SEC ID Nº : 9) , RGW03A (DVFENGAIFVPSG; SEC ID Nº : 8) o RGW03 (KDLLENGAIFVTSG; SEC ID Nº : 7) o una variante de los mismos como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) ; y c) RGW04 (KAGMIPAEPGEA; SEC ID Nº : 10) o RGW04A (SAGMIPAEPGEA; SEC ID Nº : 11) o una variante de los mismos como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) ;

y en el que cada polinucleótido diferente es para uso simultáneo, separado o secuencial en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía en un ser humano.

11. Una formulación farmacéutica que comprende una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8; o un producto de acuerdo con la reivindicación 9 ó 10; y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable, para uso en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía mediante inducción de inmunotolerancia; en la que opcionalmente dicha composición, vector o producto se formula para la administración oral, administración nasal, administración epicutánea, administración subcutánea, administración sublingual, administración intradérmica, administración bucal o para administración mediante inhalación o mediante inyección.

12. La composición como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o producto como se define en la reivindicación 9 ó 10, comprendiendo adicionalmente un alérgeno de polipéptido adicional para uso en la inducción de inmunotolerancia de un individuo al alérgeno de polipéptido adicional.

13. Un método in vitro para determinar si las células T reconocen una composición como se define en la reivindicación 1 que comprende poner en contacto dichas células T con dicha composición y detectar si dicha composición estimula a dichas células T.

14. Un método in vitro para determinar si un individuo tiene o está en riesgo de una afección en la que la afección se caracteriza por síntomas alérgicos como respuesta a un alérgeno de ambrosía, comprendiendo el método ensayar si el individuo tiene células T que responden a una composición como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, determinando de ese modo si el individuo tiene o está en riesgo de la afección.

15. El método de la reivindicación 14, en el que una respuesta inmune de células T a dicha composición se mide poniendo en contacto a la composición con células T en una muestra tomada a partir del sujeto, en condiciones que permiten que la composición y las células T interaccionen; y determinar si cualquiera de las células T se estimulan o no y de ese modo determinar si está presente o ausente una respuesta inmune de células T o no.