Un péptido aislado de 5 a 100 restos de longitud que comprende un epítopo de linfocitos T de Cyn d 1,

para su uso en el tratamiento de profilaxis de una afección en un sujeto que se caracteriza por una respuesta aberrante, no deseada o de otro modo inapropiada a Cyn d 1; en el que dicha molécula peptídica es capaz de interaccionar con linfocitos T y modificar la función de linfocitos T cuando se incuba con células de sujetos que tienen dicha afección; en el que dicho péptido se administra en una cantidad suficiente para eliminar o reducir la presencia o función en el sujeto de linfocitos T y/o anticuerpos dirigidos a Cyn d 1; y en el que dicho péptido: a) comprende al menos 5 aminoácidos contiguos de una secuencia de aminoácidos derivada o seleccionada de: (i) VKITDKNYEHIAAYHFDLSG (SEC ID Nº: 12 como se muestra en la Figura 2); (ii) HIAAYHFDLSGKAFGAMAKK (SEC ID Nº: 13 como se muestra en la Figura 2); (iii) SGKAFGAMAKKGQEDKLRKA (SEC ID Nº: 14 como se muestra en la Figura 2); (iv) LLVKYAAGDGNIVAVDIKPK (SEC ID Nº: 20 como se muestra en la Figura 2); (v) GNIVAVDIKPKDSDEFIPMK (SEC ID Nº: 21, como se muestra en la Figura 2); (vi) PKDSDEFIPMKSSWGAIWRI (SEC ID Nº: 22 como se muestra en la Figura 2); (vii) MKSSWGAIWRIDPKKPLKGP (SEC ID Nº: 23, como se muestra en la Figura 2); (viii) EGGAHLVQDDVIPANWKPDT (SEC ID Nº: 26 como se muestra en la Figura 2); o (ix) LVQDDVIPANWKPDTVYTSK (SEC ID Nº: 27, como se muestra en la figura 2); o b) es un péptido de (a) que comprende una sustitución de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos derivada o seleccionada de (i) a (ix)

Campo de la invención

La presente invención se refiere generalmente a moléculas tales como péptidos, polipéptidos y proteínas que interaccionan inmunológicamente con linfocitos T en sujetos que tienen alergia a pasto Bermuda y secuencias genéticas que codifican a los mismos. Estas moléculas son preferentemente inmunointeractivas con linfocitos T en sujetos que tienen alergia al polen de pasto Bermuda. Las moléculas de la presente invención son útiles en el desarrollo de agentes de diagnóstico, terapéuticos y profilácticos para afecciones caracterizadas por una respuesta inmune aberrante, inapropiada o de otro modo no deseada a polen de pasto Bermuda o derivado u homólogo del mismo.

Antecedentes de la invención

Los detalles bibliográficos de las publicaciones referidas por autor en la presente memoria descriptiva se recopilan alfabéticamente al final de la descripción.

La referencia a cualquier técnica anterior en esta memoria descriptiva no es y no debería interpretarse como un reconocimiento o cualquier forma de sugerencia de que la técnica anterior forma parte del conocimiento general habitual en Australia.

El polen de pasto Bermuda (o pasto diente de perro) (Cynodon dactylon) es un aeroalérgeno de temporada clínicamente importante en climas subtropicales en todo el mundo y en climas templados en los que el pasto Bermuda se usa de forma creciente en mezclas de cultivo y para evitar la erosión del suelo. En Australia, el polen de lolium generalmente se considera la fuente alérgena de temporada más importante, pero de 736 pacientes en nuestra base de datos de alergias con asma de temporada y/o rinitis, 627 (85 %) están sensibilizados tanto a BGP como a polen de lolium y sólo 100 (14 %) están sensibilizados solamente para polen de lolium. Los pacientes que tienen alergia de temporada clínica debido a lolium tienen síntomas en primavera pero con la alergia al polen de pasto Bermuda los síntomas mayores se prolongan hasta verano tardío en el hemisferio sur.

La farmacoterapia es el pilar del tratamiento para enfermedades alérgicas, pero para sujetos seleccionados de otra forma apropiada, la inmunoterapia específica de alérgeno (SIT) ofrece la oportunidad de modificar el transcurso natural de la enfermedad y se ha mostrado que es altamente eficaz y de larga duración en alergia al polen de pasto (Durham S.R., Walker S.M., Varga, E.M., Jacobson, M.R., O'Brien, F., Novel, W., Till S.J., Hamid, Q.A., N. Engl. J. Med, 341:468 = 475, 1999). Sin embargo, aunque la SIT es una práctica clínica aceptada para el tratamiento de rinitis de temporada, el tratamiento apenas se usa en pacientes asmáticos por miedo a inducir asma grave o incluso anafilaxis. En nuestra clínica de alergia, el 50 % de los pacientes con alergia a pasto Bermuda experimenta asma y rinitis. Por lo tanto existe una demanda de regímenes de SIT más seguros para permitir una mayor aplicación para el tratamiento de sensibilidad a polen de pasto Bermuda. Con una creciente apreciación del papel crítico de los linfocitos T en la inducción y regulación de la respuesta inmune a alérgenos, se están explorando nuevas estrategias dirigidas a linfocitos T para SIT. Las preparaciones que carecen de reactividad de unión a IgE pero contienen epítopos de linfocitos T dominantes deberían ser seguras y eficaces.

Estudios anteriores han identificado múltiples proteínas reactivas a IgE de polen de pasto Bermuda usando sueros de pacientes alérgicos al polen de pasto Bermuda, con reconocimiento humoral predominante de una proteína, Cyn d 1 (> 76 %), denominada por lo tanto el alérgeno principal de polen de pasto Bermuda (Orren, A. y Dowdle E.B., S. Afred. Med. J., 51:586-591, 1977; Ford, S.A. y Baldo, B.A., J. Allergy Clin. Immunol., 79:711-720, 1987; Shen, H.D., Wang, S.R., Atang, RB., Chang, Z.N., Han, S.H., Clin. Allergy, 18:401-409, 1988; Matthiesen, F., Schumacher, M.H., Lowenstein, H., J. Allergy Clin. Immunol., 83:1124-1134,1989). El ADNc que codifica Cyn d 1 se ha clonado y se ha deducido la secuencia de aminoácidos primaria a partir de la secuencia de nucleótidos (Smith, P.M. Suphiogl, C., Griffith, I.J., Theriault, K., Knox, R.B., Singh, M.B., J. Allergy Clin. Immunol., 98:331-343, 1996). Previamente se ha indicado un análisis de reconocimiento de linfocitos T en sangre periférica humana de polen de pasto Bermuda en sujetos no atópicos y alérgicos al polen de pasto Bermuda atópicos (Blaher, B., McCluskey, J., Puy, R., Czarny, D., Rolland, J.M., Immunol. Cell Biol., 73:17-22, 1995). Ambos grupos mostraron respuestas proliferativas de linfocitos T ante polen de pasto Bermuda pero la magnitud de la respuesta de media fue mayor en los atópicos. Los estudios con otros alérgenos indican que una respuesta de citocina tipo Th2 predominante para alérgenos distingue además a los individuos con un fenotipo alérgico (Li, Y., Simons, E.R., Jay, F.T., HayGlass, K.T., Int. Immunol., 8:897-904, 1996). Se ha indicado que la eficacia clínica de SIT está asociada con la reducción en la producción de IL-4 e IL-5 por linfocitos T estimulados con alérgenos (Rolland, J. & O'Hehir, R, Curr Opin Immunol., 10:640-645, 1998). Por lo tanto se requiere un conocimiento exhaustivo de respuestas de linfocitos T específicas de alérgeno para mejorar las preparaciones de SIT.

El documento US-B-6 214 3581 presenta tales epítopos de linfocitos T como deseables, pero no demuestra ninguno. Otra técnica anterior ha identificado epítopos de linfocitos B de Cyn d1 (documento WO 9310236 A; HAN S. H. ET AL., JOURNAL OF ALLERGY AND CLINICAL IMMUNOLOGY, vol. 91, Nº 5, 1993, páginas. 1035-1041; CHANG Z.

N. ET AL, INTERNATIONAL ARCHIVES OF ALLERGY AND IMMUNOLOGY vol. 114, Nº 3, 1997, páginas. 258-264 y SUPHIOGLU C. ET AL. ADVANCES IN EXPERIMENTAL MEDICINE AND BIOLOGY vol. 409, 1996, páginas. 147155).

No se han presentado determinantes reactivos a linfocitos T para polen de pasto Bermuda. Por lo tanto, una caracterización y elucidación detallada de la respuesta inmune a polen de pasto Bermuda o derivado del mismo tal como Cyn d 1, es crítica para el desarrollo de metodología inmunoterapéutica y de diagnóstico específica.

En el trabajo que conduce a la presente invención los inventores han identificado los epítopos de linfocitos T humanos del polen de pasto Bermuda, Cyn d 1. Además, para elucidar los mecanismos de SIT, se ensayaron pacientes sensibles a polen de pasto Bermuda antes y después de inmunoterapia convencional usando una preparación de depósito adaptada que contiene polen de pasto Bermuda 50 % y mezcla de 7 pastos 50 %. Esta preparación se usó debido a que existen homólogos de reactividad cruzada mínimos entre la subfamilia Pooideae y polen de pasto Bermuda (Marsh, D.G., Haddad, Z.H., Campbell, D.M., J. Allergy, 46:107-121, 1970; Martin, B.G., Mansfield, L.E., Nelson, H.S., Ann Allergy, 54:99-104, 1985 y Suphioglu, C., Singh, M.B., Knox, RB., Int Arch Allergy Immunol., 102:144-151, 1993). Por lo tanto, se cree que es poco probable que el extracto de mezcla de 7 pastos convencional (centeno, dactylis, agrostis, pasto azul de Kentucky, alestas, hierba Timotea y cañuela de prados) usadas frecuentemente para inmunoterapia de alergia de polen de pastos alivie los síntomas debido a la sensibilización a polen de pasto Bermuda. Usando blastos de linfocitos T oligoclonales, se mostró que Cyn d 1 era un alérgeno principal de linfocitos T de polen de pasto Bermuda y se identificaron tres regiones altamente inmunogénicas de Cyn d 1. Después de SIT exitosa hubo una reducción notable en la respuesta proliferativa de linfocitos T específica de alérgeno acompañada por una reducción en la relación de IL-5:IFN-γ. La identificación de los epítopos de linfocitos T de polen de pasto Bermuda facilita el desarrollo de moléculas y metodología para el diagnóstico y tratamiento de afecciones caracterizadas por la respuesta inmune aberrante, inapropiada o de otro modo no deseada a polen de pasto Bermuda o derivado u homólogo del mismo.

Sumario de la invención

A lo largo de la presente memoria descriptiva y las reivindicaciones a continuación, a no ser que el contexto requiera otra cosa, la palabra “comprende” y variaciones tales como “comprende” y “que comprende”, se entenderá que implica la inclusión de un número entero indicado o etapa o grupo de números enteros o etapas pero no la exclusión de cualquier otro número entero o etapa o grupo de números enteros o etapas.

La memoria descriptiva objeto contiene información de secuencia de nucleótidos preparada usando el programa PatentIn Versión 3.1, presentada en este... [Seguir leyendo]

1. Un péptido aislado de 5 a 100 restos de longitud que comprende un epítopo de linfocitos T de Cyn d 1, para su uso en el tratamiento de profilaxis de una afección en un sujeto que se caracteriza por una respuesta aberrante, no deseada o de otro modo inapropiada a Cyn d 1; en el que dicha molécula peptídica es capaz de interaccionar con linfocitos T y modificar la función de linfocitos T cuando se incuba con células de sujetos que tienen dicha afección; en el que dicho péptido se administra en una cantidad suficiente para eliminar o reducir la presencia o función en el sujeto de linfocitos T y/o anticuerpos dirigidos a Cyn d 1; y en el que dicho péptido:

a) comprende al menos 5 aminoácidos contiguos de una secuencia de aminoácidos derivada o seleccionada de:

(i) VKITDKNYEHIAAYHFDLSG (SEC ID Nº: 12 como se muestra en la Figura 2);

(ii) HIAAYHFDLSGKAFGAMAKK (SEC ID Nº: 13 como se muestra en la Figura 2);

(iii) SGKAFGAMAKKGQEDKLRKA (SEC ID Nº: 14 como se muestra en la Figura 2);

(iv) LLVKYAAGDGNIVAVDIKPK (SEC ID Nº: 20 como se muestra en la Figura 2);

(v) GNIVAVDIKPKDSDEFIPMK (SEC ID Nº: 21, como se muestra en la Figura 2);

(vi) PKDSDEFIPMKSSWGAIWRI (SEC ID Nº: 22 como se muestra en la Figura 2);

(vii) MKSSWGAIWRIDPKKPLKGP (SEC ID Nº: 23, como se muestra en la Figura 2);

(viii) EGGAHLVQDDVIPANWKPDT (SEC ID Nº: 26 como se muestra en la Figura 2); o

(ix) LVQDDVIPANWKPDTVYTSK (SEC ID Nº: 27, como se muestra en la figura 2); o

b) es un péptido de (a) que comprende una sustitución de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos derivada o seleccionada de (i) a (ix).

2. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1 en el que dicha secuencia de aminoácidos es de 5 a 20 restos en longitud.

3. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha secuencia de aminoácidos es

(i) VKITDKNYEHIAAYHFDLSG (SEC ID Nº: 12 como se muestra en la Figura 2);

(ii) HIAAYHFDLSGKAFGAMAKK (SEC ID Nº: 13 como se muestra en la Figura 2);

(iii) SGKAFGAMAKKGQEDKLRKA (SEC ID Nº: 14 como se muestra en la Figura 2);

(iv) LLVKYAAGDGNIVAVDIKPK (SEC ID Nº: 20 como se muestra en la Figura 2);

(v) GNIVAVDIKPKDSDEFIPMK (SEC ID Nº: 21, como se muestra en la Figura 2);

(vi) PKDSDEFIPMKSSWGAIWRI (SEC ID Nº: 22 como se muestra en la Figura 2);

(vii) MKSSWGAIWRIDPKKPLKGP (SEC ID Nº: 23, como se muestra en la Figura 2);

(viii) EGGAHLVQDDVIPANWKPDT (SEC ID Nº: 26 como se muestra en la Figura 2); o

(ix) LVQDDVIPANWKPDTVYTSK (SEC ID Nº: 27, como se muestra en la Figura 2).

4. El péptido de acuerdo con la reivindicación 2 en el que dicha secuencia de aminoácidos comprende al menos 5 aminoácidos derivados de una o más de las siguientes secuencias de aminoácidos:

SGKAFGAMAKKGQEDKLRKA (SEC ID Nº: 14 como se muestra en la Figura 2) PKDSDEFIPMKSSWGAIWRI (SEC ID Nº: 22 como se muestra en la Figura 2) MKSSWGAIWRIDPKKPLKGP (SEC ID Nº: 23, como se muestra en la Figura 2) EGGAHLVQDDVIPANWKPDT (SEC ID Nº: 26 como se muestra en la Figura 2) LVQDDVIPANWKPDTVYTSK (SEC ID Nº: 27, como se muestra en la Figura 2).

5. El péptido de acuerdo con la reivindicación 4 en el que dicha secuencia de aminoácidos derivada de una o más de SEC ID Nº: 14 SGKAFGAMAKKGQEDKLRKA o SEC ID Nº: 26 EGGAHLVQDDVIPANWKPDT como se muestra en la Figura 2.

6. Un péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 mostrando dicho péptido unión a IgE anulada.

7. Uso de un péptido como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de una afección en un sujeto cuya afección se caracteriza por una respuesta inmune aberrante, no deseada o de otro modo inapropiada a Cyn d 1.

8. Un péptido aislado de 5 a 20 restos de longitud que comprende un epítopo de linfocitos T Cyn d 1, siendo dicha molécula peptídica capaz de interaccionar con linfocitos T y modificar la función de linfocitos T cuando se incuba con células de sujetos que tienen dicha afección; y en el que dicho péptido:

a) comprende al menos 5 aminoácidos contiguos de una secuencia de aminoácidos derivada o seleccionada de

(i) HIAAYHFDLSGKAFGAMAKK (SEC ID Nº: 13 como se muestra en la Figura 2);

(ii) SGKAFGAMAKKGQEDKLRKA (SEC ID Nº: 14 como se muestra en la Figura 2);

(iii) LLVKYAAGDGNIVAVDIKPK (SEC ID Nº: 20 como se muestra en la Figura 2);

(iv) GNIVAVDIKPKDSDEFIPMK (SEC ID Nº: 21, como se muestra en la Figura 2);

(v) PKDSDEFIPMKSSWGAIWRI (SEC ID Nº: 22 como se muestra en la Figura 2); o

(vi) MKSSWGAIWRIDPKKPLKGP (SEC ID Nº: 23, como se muestra en la Figura 2) o

b) es un péptido de (a) que comprende una sustitución de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos derivada o seleccionada de (i) a (vi).

9. El péptido de acuerdo con la reivindicación 8 en el que dicha secuencia de aminoácidos es

(i) HIAAYHFDLSGKAFGAMAKK (SEC ID Nº: 13 como se muestra en la Figura 2);

(ii) SGKAFGAMAKKGQEDKLRKA (SEC ID Nº: 14 como se muestra en la Figura 2);

(iii) LLVKYAAGDGNIVAVDIKPK (SEC ID Nº: 20 como se muestra en la Figura 2);

(iv) GNIVAVDIKPKDSDEFIPMK (SEC ID Nº: 21, como se muestra en la Figura 2);

(v) PKDSDEFIPMKSSWGAIWRI (SEC ID Nº: 22 como se muestra en la Figura 2); o

(vi) MKSSWGAIWRIDPKKPLKGP (SEC ID Nº: 23, como se muestra en la Figura 2).

10. El péptido de acuerdo con la reivindicación 8 en el que dicha secuencia de aminoácidos comprende al menos 5 aminoácidos derivados de una o más de las siguientes secuencias de aminoácidos:

SGKAFGAMAKKGQEDKLRKA (SEC ID Nº: 14 como se muestra en la Figura 2) PKDSDEFIPMKSSWGAIWRI (SEC ID Nº: 22 como se muestra en la Figura 2) MKSSWGAIWRIDPKKPLKGP (SEC ID Nº: 23, como se muestra en la Figura 2) EGGAHLVQDDVIPANWKPDT (SEC ID Nº: 26 como se muestra en la Figura 2)

11. El péptido de acuerdo con la reivindicación 8 en el que dicha secuencia de aminoácidos deriva de una o más de SEC ID Nº: 14 SGKAFGAMAKKGQEDKLRKA o SEC ID Nº: 26 EGGAHLVQDDVIPANWKPDT como se muestra en la Figura 2.

12. El péptido de acuerdo con la reivindicación 8 mostrando dicho péptido unión a IgE anulada.

13. Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica o complementaria a una secuencia que codifica un péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12.

14. Un anticuerpo aislado dirigido a un péptido aislado de cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12.

15. El anticuerpo aislado de acuerdo con la reivindicación 14 siendo dicho anticuerpo un anticuerpo policlonal.

16. El anticuerpo aislado de acuerdo con la reivindicación 14 siendo dicho anticuerpo un anticuerpo monoclonal.

17. Una composición farmacéutica que comprende un péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12 o un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 16 junto con uno o más vehículos y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

18. Un método in vitro para diagnosticar o controlar una afección en un mamífero, cuya afección se caracteriza por una respuesta aberrante, no deseada o inapropiada a Cyn d 1, comprendiendo dicho método explorar una muestra derivada del mamífero con respecto a anticuerpos y/o linfocitos T reactivos a Cyn d 1 utilizando los péptidos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12 o los anticuerpos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 17.

19. Un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 14 a 16 para su uso en el tratamiento o profilaxis de una afección en un sujeto, cuya afección se caracteriza por una respuesta inmune aberrante, no deseada o de otro modo inapropiada a Cyn d 1.

20. El péptido para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, el uso de la reivindicación 7, el método de la reivindicación 18 o el anticuerpo para su uso de acuerdo con la reivindicación 19 en el que dicha afección es hipersensibilidad a polen de pasto Bermuda.

21. Un kit de diagnóstico para su uso en el método de la reivindicación 18 ó 20 comprendiendo dicho kit un péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12 o un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 16.