Una composición para uso en la prevención o tratamiento de alergia a los gatos en un individuo por tolerización que comprende los polipéptidos:

CPAVKRDVDLFLT (SEC ID Nº: 1) EQVAQYKALPVVLENA (SEC ID Nº: 2) KALPVVLENARILKNCV (SEC ID Nº: 3) RILKNCVDAKMTEEDKE (SEC ID Nº: 4) KENALSLLDKIYTSPL (SEC ID Nº: 5) TAMKKIQDCYVENGLI (SEC ID Nº: 6) SRVLDGLVMTTISSSK (SEC ID Nº: 7) en la que uno o más de los péptidos se pueden sustituir por una variante o fragmento del péptido sustituido, en la que: (a) la variante es un polipéptido que comprende dos o más sustituciones de aminoácidos conservativos en comparación con el péptido sustituido o (b) la variante es un polipéptido que tiene al menos el 90% de identidad con el polipéptido sustituido o (c) el fragmento es un polipéptido derivado por deleción de uno o dos aminoácidos de los extremos N o C terminales o de un aminoácido de los extremos N y C terminales del péptido sustituido, y en la que (i) dicha variante o fragmento es capaz de provocar una respuesta inmune que desensibiliza al individuo frente a la proteína Fel d1 y (ii) ningún otro péptido está presente en la composición

Combinaciones de péptidos para vacunas contra la alergia a los gatos.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a composiciones que comprenden péptidos para prevenir o tratar la alergia a los gatos y en particular a combinaciones óptimas de péptidos.

Antecedentes de la invención

El reconocimiento de antígenos por células T requiere células presentadoras de antígenos (CPA) para presentar fragmentos de antígenos (péptidos) en su superficie celular en asociación con moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC). Las células T usan sus receptores específicos de antígenos de células T (TCR) para reconocer los fragmentos de antígenos presentados por las CPA. Dicho reconocimiento actúa como un activador del sistema inmune para generar a intervalo de respuestas para erradicar el antígeno que se ha reconocido.

El reconocimiento de antígenos externos por el sistema inmune de un organismo, tal como el hombre, puede dar como resultado en algunos casos enfermedades, conocidas como condiciones atópicas: los ejemplos de las últimas son las enfermedades alérgicas incluyendo el asma, dermatitis atópica y rinitis alérgica. En este grupo de enfermedades, los linfocitos B generan anticuerpos de la clase IgE (en seres humanos) que se unen a antígenos derivados externamente, a los que se hace referencia en este contexto como alérgenos puesto que estas moléculas provocan una respuesta alérgica. La producción de IgE específicas de alérgenos es dependiente de linfocitos T que también se activan por (son específicos para) el alérgeno. Los anticuerpos de IgE específicas de alérgenos se unen a la superficie de células tales como basófilos y mastocitos en virtud de la expresión de receptores de superficie para IgE por esas células.

El entrecruzamiento de moléculas de IgE unidas a la superficie por alérgenos da como resultado la desgranulación de estas células efectoras provocando la liberación de mediadores inflamatorios tales como histamina 5-hidroxitriptamina y medidores lipídicos tales como los sulfidoleucotrienos. Además de los eventos dependientes de IgE, determinadas enfermedades alérgicas tales como el asma se caracterizan por eventos independientes de IgE.

Las enfermedades alérgicas mediadas por IgE se tratan actualmente con agentes que proporcionan alivio sintomático o prevención. Los ejemplos de dichos agentes son antihistaminas, agonistas β2 y glucocorticosteroides. Además, algunas enfermedades mediadas por IgE se tratan por procedimientos de desensibilización que implican la inyección periódica de componentes de alérgenos o extractos. Los tratamientos de desensibilización pueden inducir una respuesta de IgG que compita con IgE por el alérgeno o pueden incluir células T supresoras específicas que bloquean la síntesis de IgE dirigida frente a alérgeno. Esta forma de tratamiento no es siempre eficaz y presenta el riesgo de provocar efectos secundarios graves, particularmente choque anafiláctico general. Esto puede ser letal a no ser que se reconozca inmediatamente y se trate con adrenalina. Un tratamiento terapéutico que disminuiría o eliminaría la respuesta inmune-alérgica no deseada frente a un alérgeno particular, sin alterar la reactividad inmune frente a otros antígenos extraños o activar una respuesta alérgica por si mismo sería de gran beneficio para individuos alérgicos.

Aproximadamente el 10% de la población humana mundial son alérgicos a los gatos (Felis domesticus) y hasta el 67% de los pacientes asmáticos son sensibles a alérgenos de gato. El alérgeno principal producido por gatos es la glucoproteína Fel d1, que provoca una respuesta en el 90-95% de los pacientes que padecen alergia a los gatos. Un tratamiento terapéutico preventivo sería por lo tanto de gran beneficio para seres humanos que padecen o tienen riesgo de padecer alergia a los gatos.

Los métodos terapéuticos que implican administración de composiciones que comprenden 13 péptidos derivados de Fel d1 se describe en el documento WO 99/34826. La inducción de una población de células T con actividad reguladora después de la administración de una composición que contiene 12 polipéptidos derivados de Fel d1 se describe en Verhoel et al. (PloS Medicine, 2005, Vol. 2(3), pág. 253-261). El efecto de varios péptidos individuales derivados de Fel d1 sobre las características de proliferación y liberación de citocinas de células mononucleares de sangre periférica descritas en Haselden et al. (J Allergy Clin Immunol, 2001, Vol. 108(3), pág. 349-356).

Sumario de la invención

Los presentes inventores han descubierto que determinadas combinaciones de fragmentos de péptidos de la proteína de Fel d1 son particularmente útiles en la desensibilización de individuos frente a alérgeno de Fel d1. Las combinaciones de polipéptidos de la invención se han seleccionado por su capacidad de unirse a muchas moléculas de MHC de Clase II y provoca la proliferación de células T con una liberación de histamina mínima. Las composiciones, productos, vectores y formulaciones de la invención pueden por lo tanto proporcionarse a individuos para prevenir o tratar alergia a gatos por tolerización.

Los polipéptidos de la invención se seleccionaron inicialmente como epítopos potenciales de células T a través del uso de ensayos de unión MHC-péptido. Véase por ejemplo la Figura 1 que demuestra la capacidad de una serie de péptidos derivados de las cadenas 1 y 2 de Fel d1 para unirse a múltiples tipos de DR en ensayos de unión de MHC de clase II. Estos polipéptidos candidatos se exploraron adicionalmente después para su uso potencial en la tolerización.

Una dificultad asociada con estrategias para la desensibilización basadas en la inmunización por péptidos se halla en como en seleccionar un tamaño y región apropiados del alérgeno como las bases para el péptido a usar para inmunización. El tamaño de péptido de elección es crucial. Si el péptido es muy pequeño, la vacuna no sería eficaz en la inducción de una respuesta inmunológica. Si los péptidos son muy grandes o si el antígeno total se introduce en un individuo, hay riesgo de inducir reacciones adversas tales como anafilaxis, que pueden ser letales.

Los polipéptidos de la invención se han seleccionado para mantener especificidad de células T mientras que tienen un tamaño lo suficientemente pequeño para no tener estructura terciaria significativa que les permita mantener la conformación de un epítopo de unión de IgE de la molécula total. Los polipéptidos de la invención por lo tanto no inducen entrecruzamiento significativo de molécula de IgE específicas adyacentes en células tales como mastocitos y basófilos y consecuentemente no provocan liberación de histamina significativa.

Los péptidos de la invención son beneficiosos en que después de la administración de una muestra de células T dan como resultado una proliferación de células T mientras que provocan una liberación de histamina mínima. Esto se demuestra en el Ejemplo 2. Los polipéptidos de las invenciones son capaces de inducir una respuesta de fase tardía en un individuo alérgico a los gatos. La composición, productos y formulaciones de la invención que comprenden estos polipéptidos o polinucleótidos que son capaces de expresar estos polipéptidos son por lo tanto útiles y eficaces en la reducción de la hipersensibilidad frente al alérgeno de Fel d1 en individuos que están sensibilizados a este alérgeno.

Una ventaja adicional de la invención es la capacidad de la combinación de péptidos de dirigirse de manera general a moléculas del Complejo Mayor de Histocompatibilidad (MHC). Los receptores de células T (TCR) son muy variables en su especificidad. La variabilidad se genera, como con moléculas de anticuerpo, a través de eventos de recombinación de genes dentro de la célula. Los TCR reconocen antígenos en forma de péptidos pequeños unidos en moléculas codificadas por los genes del Complejo Mayor de Histocompatibilidad (MHC). Estos productos génicos son las mismas moléculas que dan lugar a "tipos tisulares" usados en el trasplante y también se denominan moléculas de Antígenos de Leucocitos Humanos (HLA) cuyos términos se pueden usar de manera intercambiable. Las moléculas individuales de MHC tienen ranuras de enlace peptídicos que, debido a su forma y carga sólo son capaces de unir un grupo limitado de péptidos. Los péptidos unidos por una molécula de MHC puede que no estén unidos necesariamente...

1. Una composición para uso en la prevención o tratamiento de alergia a los gatos en un individuo por tolerización que comprende los polipéptidos:

CPAVKRDVDLFLT (SEC ID Nº: 1)

EQVAQYKALPVVLENA (SEC ID Nº: 2)

KALPVVLENARILKNCV (SEC ID Nº: 3)

RILKNCVDAKMTEEDKE (SEC ID Nº: 4)

KENALSLLDKIYTSPL (SEC ID Nº: 5)

TAMKKIQDCYVENGLI (SEC ID Nº: 6)

SRVLDGLVMTTISSSK (SEC ID Nº: 7)

en la que uno o más de los péptidos se pueden sustituir por una variante o fragmento del péptido sustituido, en la que:

y en la que (i) dicha variante o fragmento es capaz de provocar una respuesta inmune que desensibiliza al individuo frente a la proteína Fel d1 y (ii) ningún otro péptido está presente en la composición.

2. La composición para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en la que uno o más de los polipéptidos tienen una o más modificaciones seleccionadas de los siguientes:

3. La composición para uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2 en la que cada polipéptido tiene una concentración en el intervalo de 0,03 a 200 nmol/ml, de 0,3 a 200 nmol/ml o de 10 a 50 nmol/ml.

4. Una composición para uso en la prevención o tratamiento de la alergia a los gatos por tolerización que consiste en secuencias de polinucleótidos que cuando se expresan provocan la producción de una composición como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

5. La composición para uso de acuerdo con la reivindicación 4, en la que cada secuencia de polinucleótidos capaz de expresar un polipéptido diferente está presente en los mismos o en distintos vectores de polinucleótidos.

6. La composición para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes que es una composición farmacéutica que contiene uno o más vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

7. Un vector de expresión para uso en la prevención o tratamiento de la alergia a los gatos por tolerización que consiste en 7 secuencias de polinucleótidos diferentes, en el que cada secuencia de polinucleótidos codifica uno de los polipéptidos como se define en la reivindicación 1 y en el que cada secuencia de polinucleótidos está unida operativamente a una secuencia de control proporcionada para la expresión de la secuencia codificante.

8. Un producto para uso en la prevención o tratamiento de alergia a los gatos por tolerización que consiste en los polipéptidos como se define en la reivindicación 1, en el que cada polipéptido diferente es para uso simultáneo, separado o secuencial en la prevención o tratamiento de una alergia a los gatos en un ser humano.

9. Un producto para uso en la prevención o tratamiento de la alergia a los gatos por tolerización que consiste en polinucleótidos capaces de expresar los polipéptidos diferentes como se define en la reivindicación 1, en el que cada polinucleótido diferente es para uso simultáneo, separado o secuencial en la prevención o tratamiento de la alergia a los gatos en un ser humano.

10. Una formulación farmacéutica para uso en la prevención o tratamiento de alergia a los gatos por tolerización que comprende una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5; un vector de acuerdo con la reivindicación 7 o un producto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 ó 9 y un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

11. La formulación para uso de acuerdo con la reivindicación 10 en la que la composición, vector o producto se formula para administración intradérmica, administración oral, administración nasal, administración subcutánea, administración sublingual o para la administración por inhalación o por inyección.

12. La composición para uso como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o producto como se define en la reivindicación 8 ó 9, que comprende adicionalmente otro alérgeno de polipéptido para uso en la tolerización de un individuo frente al alérgeno de polipéptido adicional, en la que el alérgeno de polipéptido adicional es diferente de Fel d1.

13. Un método in vitro de determinar si un individuo tiene o presenta riesgo de una afección en el que la afección se caracteriza por síntomas alérgicos en respuesta a un alérgeno de gato, comprendiendo el método el ensayo de si el individuo tiene células T que respondan frente a una composición como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, por lo tanto la determinación de si el individuo tiene o presenta riesgo de la afección.

14. Un método de acuerdo con la reivindicación 13 en el que la respuesta de células T de dicha composición se mide poniendo en contacto la composición con células T en una muestra tomada del sujeto, en condiciones que permitan interaccionar a la composición y las células T y determinar si cualquiera de las células T está estimulada o no y por lo tanto determinar si está presente o ausente una respuesta de células T o no.