Composición para inducir inmunotolerancia.

Un compuesto de di-hidroxivitamina D3 y un alergeno para usar en el tratamiento de patologías alérgicas,

por inducción y/o aumento de la tolerancia a dicho alergeno.

Composición para inducir inmunotolerancia.

Campo de la invención La invención se refiere a la inducción de tolerancia frente a un alergeno, específicamente a la inmunización con alergeno y a la inhibición de la producción de moléculas coestimulantes en células que presentan antígeno. La invención proporciona composiciones para usar en métodos de tratamiento de patologías alérgicas.

Inmunidad adaptativa y tolerancia periférica La inmunidad adaptativa se inicia mediante la estimulación, específica de antígeno, de células T naturales por complejos peptídicos MHC, clase I ó II, expresados por células que presentan antígeno (APCs, a saber, células dendríticas, macrófagos, monocitos, linfocitos B) . Sin embargo, las respuestas eficaces requieren la estimulación adicional de las células T naturales por moléculas “coestimulantes” expresadas por esas APCs (Baxter et al., 2002; Matzinger, 2002) . La expresión de moléculas “coestimulantes” es parte de la respuesta inmunitaria innata inducida por sustancias medioambientales biológicamente activas (patógenos o cualquier compuesto biológicamente activo, con inclusión de alergenos) que afectan a células inmunitarias inespecíficas, migratorias, y/o a células tisulares residentes.

La expresión en APC es inducida directamente por la actividad biológica de sustancias medioambientales, y/o indirectamente por los ‘productos de reactividad (mediadores de estrés e inflamatorios, células necróticas)

generados en respuesta a esas sustancias por otras células dentro del microambiente tisular de APC (Gallucci et al., 2001) .

La reactividad de células inmunitarias inespecíficas, tales como APCs y células residentes, a esos compuestos biológicamente activos, es parte de la respuesta inmunitaria innata y es desencadenada en la mayor parte de los casos, si no en todos, mediante los caminos de transducción de señales de NF-B y/o el de MAPK/AP-1. Los caminos de activación de la inmunidad innata son desencadenados por compuestos que incluyen, pero no se limitan a:

1. “Tipos moleculares asociados a patógenos” (PAMPs) presentes en endotoxinas, peptidoglicanos, hidratos de carbono y otros constituyentes microbianos, por los denominados “receptores de reconocimiento de tipos” (PRR)

que incluyen los receptores tales como puertas de paso (toll-like) , receptores de captación de desechos y receptores de lectinas (Pulendran et al., 2001; Reis e Sousa, 2001) , Los PRR reconocen no solo moléculas exógenas, sino también moléculas endógenas tales como proteínas de choque térmico y hialuronano.

2. Mediadores de estrés oxidativo generados dentro del microambiente de APC.

3. Proteínas de choque térmico que afectan a las APCs por interacción con diferentes receptores de la membrana celular tales como el CD91 y receptores 2 y 4 “toll-like” (Gallucci et al., 2001)

4. Nucleótidos intracelulares tales como ATP y UTP (Gallucci et al., 2001) .

5. Enzimas proteolíticas que son liberadas localmente desde células residentes o que son proporcionadas por el propio antígeno y que pueden activar esos factores de transcripción por medio de la familia de receptores activados por proteasas. A este respecto es importante apreciar que muchos alergenos poseen actividades proteolíticas (Gallucci et al., 2001) . Además, los alergenos pueden activar directamente también el NF-B de células epiteliales de las vías respiratorias y el enfrentamiento con alergeno activa rápidamente el NF-B del epitelio de las vías respiratorias en un modelo de asma en animales.

6. La familia de receptores citosólicos de reconocimiento de tipos para patógenos intracelulares que se denomina dominio de oligodimerización de unión de nucleótidos (NOD) , llamada también dominio de reclutamiento de caspasa (CARD) .

La familia NF- B de factores de transcripción y el factor de transcripción AP-1 desempeñan un papel fundamental en la coordinación de la expresión de una amplia variedad de genes que regulan respuestas inmunitarias e inflamatorias, que incluyen citoquinas, quimioquinas, moléculas de adhesión a células, moléculas coestimulantes, factores de complemento y factores antiapoptóticos (Herlaar et al., 1999; McKay et al., 1999) . Al tiempo que estas moléculas son fundamentales en las respuestas inmunitarias innatas, inician también y ajustan respuestas inmunitarias adaptativas a esos compuestos por estimulación de APCs, en particular células dendríticas (DC) ,

expresando moléculas de “coestimulación” que inquietan eficazmente a las células T naturales. Las DC residen en tejidos periféricos al estado de células inmaduras altamente endocíticas, con baja expresión de moléculas coestimulantes. La activación de DCs inmaduras por exposición a ciertos compuestos medioambientales o de estrés induce su maduración que lleva a DC maduras con alta expresión de la superficie celular de moléculas de MHC complejadas con péptidos procedentes de proteínas que han sido internalizadas en su etapa inmadura, y alta expresión de la superficie celular de moléculas de “coestimulación”. Por consiguiente, las DC maduras activan eficazmente las células T naturales frente a proteínas que provienen de péptidos, procedentes de los compuestos medioambientales.

Las DC maduras promueven el desarrollo de subconjuntos de células T inmunógenas (tales como Th1 ó Th2) y/o tolerógenas (tales como las células reguladoras Treg, Tr1 ó Th3) . pero el equilibrio de estos subconjuntos depende fuertemente del modo en que la DC madura haya sido activada en su etapa inmadura. Dado que diferentes patógenos activan DC inmaduras de modos diferentes dando por resultado fenotipos funcionales diferentes de DC maduras, las DC pueden ajustar la clase de respuesta inmunitaria específica al patógeno invasor. Idealmente, este proceso da por resultado protección contra este patógeno por medio de células T inmunógenas, sin patología letal para el tejido hospedador inducida por la actividad de estas células Th, El desarrollo selectivo de subconjuntos de células T está dirigido por los niveles selectivos de expresión de moléculas de la superficie celular tales como moléculas coestimulantes (CD40, proteínas de la familia B7, y otras) y por la producción de citoquinas que alteran las células T (IL-12, IFNs de tipo 1, IL-10, TGF-, y otras) . Lo más importantemente, en condiciones de estado estacionario, en ausencia de compuestos medioambientales biológicamente activos o de reacciones de estrés, las células T ajustan continuamente las DC inmaduras con moléculas de “coestimulación” de baja expresión La activación de células Th en ausencia de “coestimulación” resulta también en el desarrollo de células T reguladoras que median en la tolerancia a autoantígenos, transportados por estas DC de modo que se encuentran presentes en todas partes, otro nivel de protección frente la autoinmunidad.

La tolerancia periférica puede definirse como el fallo a la respuesta a un antígeno por una respuesta inmunitaria adaptativa, y es adquirida por linfocitos maduros existente en tejidos periféricos. Aunque todavía no se comprenden completamente, los mecanismos de acción de la tolerancia periférica pueden ser debidos a (i) anergia, (ii) desviación inmunitaria, (iii) muerte celular (apoptosis) inducida por activación, u otros mecanismos desconocidos en la actualidad. Recientemente, se ha puesto de manifiesto que linfocitos T reguladores median en la tolerancia periférica en al menos algunos modelos de enfermedades inmunológicas tales como colitis, rechazo de trasplantes, enfermedades alérgicas y enfermedades autoinmunitarias. La familia de células T reguladoras es diversa. Todas ellas son anérgicas, es decir, no proliferan en respuesta a un antígeno, y son tolerógenas, es decir, suprimen la actividad de las células T inmunógenas. En condiciones no patogénicas las Treg proceden del timo, suprimen las células Th inmunógenas por medio de un mecanismo que depende de contacto celular y son importantes para prevenir la autoinmunidad. Las células Tr1 se caracterizan por la producción de IL-10 y se ha puesto de manifiesto que suprimen las respuestas tanto de Th1 como de Th2, evitando con ello el desarrollo de autoinmunidad y enfermedades alérgicas. Las células Th3 están caracterizadas por la producción de TGF y se ha indicado que están involucradas en la tolerancia oral. El mecanismo por el que las APCs, en particular las DC, inducen el desarrollo de células T reguladoras, es desconocido en gran medida. Aunque las DC están implicadas en la generación de estas formas de tolerancia periférica, se desconoce actualmente si son... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto de di-hidroxivitamina D3 y un alergeno para usar en el tratamiento de patologías alérgicas, por inducción y/o aumento de la tolerancia a dicho alergeno. 2. Uso según la reivindicación 1, en donde dicho alergeno es capaz de inducir o sostener una enfermedad alérgica.

3. Uso según la reivindicación 2, en donde dicha enfermedad alérgica es asma.

4. Composición farmacéutica para usar en el tratamiento de patologías alérgicas por inducción y/o aumento de la tolerancia a un alergeno, que comprende un compuesto de di-hidroxivitamina D3, comprendiendo dicha composición, además, dicho alergeno y un diluyente adecuado.

5. Composición farmacéutica para usar según la reivindicación 4, en donde dicho alergeno es capaz de inducir o 10 sostener una enfermedad alérgica.

6. Composición farmacéutica para usar según la reivindicación 5, en donde dicha enfermedad alérgica es asma.

Figura 1. Grado de respuesta de las vías respiratorias a la inhalación de dosis diferentes de metacolina, medido antes (A) y después (B) del enfrentamiento con inhalaciones de OVA

Figura 1A Figura 2. Niveles séricos de IgE específica de OVA, antes (barras desnudas) y después (barras rellenas) de enfrentamientos repetidos con inhalaciones de OVA

Figura 3. Número de eosinófilos en el fluido de lavado broncoalveolar Figura 4. Número de eosinófilos en el fluido de lavado broncoalveolar