Composición farmacéutica con contenido en una L-ribozima para el tratamiento de efectos secundarios mediante la administración de espiegelmeros.

Uso de una L-ribozima para la preparación de una composición farmacéutica

Composición farmacéutica con contenido en una L-ribozima para el tratamiento de efectos secundarios mediante la administración de espiegelmeros Campo técnico de la invención La invención se refiere al uso de una L-ribozima para la preparación de una composición farmacéutica, una composición farmacéutica que contiene una L-ribozima de este tipo, así como a un procedimiento para la preparación de una composición farmacéutica de este tipo.

Antecedentes de la invención y estado conocido de la técnica Los aptámeros son, la mayoría de las veces, ácidos D-nucleicos de doble cadena que se unen específicamente a una molécula diana arbitraria, análogamente a una reacción anticuerpo/antígeno (Ellington, A.D. et al., Nature 346: 818-822 (1990) ) . Para una molécula diana predeterminada, aptámeros específicos son aislados, por ejemplo, mediante el método SELEX a partir de genotecas de ácidos nucleicos (Tuerk, C. et al., Science 249: 505-510 (1990) ) .

Los aptámeros tienen en el sector terapéutico la finalidad, entre otras, de ligar productos del metabolismo indeseados y, con ello, inhibirlos. Únicamente a modo de ejemplo se pueden mencionar para ello productos génicos oncógenos. En la aplicación terapéutica de aptámeros es desventajoso que éstos presentan una farmacocinética desventajosa, es decir, son degradados muy rápidamente, por ejemplo por parte de nucleasas endógenas. Independientemente de ello, los aptámeros son, así y todo, moléculas relativamente pequeñas, las cuales, por lo tanto, son secretadas a través de los riñones de una forma relativamente rápida.

Los espiegelmeros son en el fondo aptámeros, pero se diferencian de ellos debido a que están formados a base de L-nucleótidos. Los espiegelmeros pueden ser de cadena sencilla o de doble cadena. Mediante el empleo de los Lnucleótidos se impide una degradación por parte de nucleasas endógenas y, así, se mejora considerablemente la farmacocinética, es decir, se prolonga el tiempo de permanencia en el suero. Así en la referencia bibliográfica Boisgard, R et al., Eur Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging 32: 470-477 (2005) se describe que espiegelmeros no funcionales son totalmente estables metabólicamente, también a lo largo de un espacio de tiempo de 2 horas. En esta referencia bibliográfica se describe también el empleo diagnóstico de espiegelmeros, estando acoplado el espiegelmero con una sustancia informadora por ejemplo radiactiva.

La identificación de espiegelmeros específicos para una molécula diana predeterminada puede tener lugar, por ejemplo, tal como se describe en la referencia bibliográfica Klussmann, S. et al., Nat Biotechnol 14:1112-1115 (1996) . A los espiegelmeros y a sus posibilidades de aplicación terapéuticas se remite también la referencia bibliográfica Vater, A. et al., Curr Opin Drug Discov Devel 6: 253-261 (2003) .

En la aplicación terapéutica de espiegelmeros se ha partido hasta ahora del hecho de que los espiegelmeros no son inmunógenos (Wlotzka et al., Proc Natl Acad Sci USA 99: 8898-8902 (2002) ) . No obstante, investigaciones que son presentadas en la presente descripción demuestran que los ácidos L-nucleicos no están necesariamente exentos del todo de efectos secundarios en un organismo. De aquí se deduce que en el caso del empleo de espiegelmeros existe un riesgo en absoluto nada despreciable de una reacción secundaria fisiológica indeseada, por ejemplo de una reacción inmune y/o de una reacción enzimática indeseada con ARN endógeno (incluido un ARN regulador) en el caso de la administración a un paciente. En particular, a la vista de las experiencias negativas experimentadas en la fase clínica 1 con el anticuerpo monoclonal TGN1412, y ante los antecedentes de que el tiempo de permanencia de espiegelmeros, en virtud de las consideraciones precedentemente mencionadas, es relativamente muy elevado, sería deseable mantener disponible un antídoto para un espiegelmero a emplear en el caso de la administración del espiegelmero, con el fin de que en el caso de una reacción secundaria fisiológica indeseada pueda administrarse inmediatamente el antídoto y reducirse así a corto plazo el nivel de espiegelmeros en el suero.

A partir de otros contextos, a saber la reacción de Diels-Alder estereoselectiva, catalizada por ribozimas, son conocidas L-ribozimas para lo cual se remite a las referencia bibliográficas Seeling, B. et al., Angew. Chem. Int.,

39: 4576-4579 (2000) y Seelig, B. et al., Angew. Chem. 112: 4764-4768 (2000) .

Problema técnico de la invención La invención se basa, por lo tanto, en el problema técnico de indicar un antídoto para espiegelmeros empleados terapéuticamente.

Rasgos fundamentales de la invención Para la solución de este problema técnico, la invención enseña el uso de una L-ribozima para la preparación de una composición farmacéutica, estando capacitada la L-ribozima para la disociación de un L-ARN en la zona de una secuencia diana del L-ARN, a saber, en particular, para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de reacciones secundarias fisiológicas indeseadas, en particular reacciones inmunes y/o reacciones enzimáticas indeseadas del L-ARN con ARN endógeno (incluido un ARN regulador) en virtud de la administración de una molécula terapéutica que contiene el L-ARN.

La invención se basa, primeramente en el reconocimiento sorprendente de que los espiegelmeros, en contra de las sospechas actuales, no están necesariamente exentos de reacciones secundarias, sino que más bien pueden estar en condiciones de cortar ácidos nucleicos que se presentan de forma natural en un organismo y, de esta forma, crear efectos secundarios imprevisibles. La invención se basa en este reconocimiento basado en la enseñanza técnica de habilitar L-ribozimas que cortan específicamente un espiegelmero administrado y, de esta forma, destruyen su actividad fisiológica, en particular en relación con reacciones secundarias indeseadas. Ejemplos de espiegelmeros son: espiegelmero, NOXC89, NOXA42, NOXA50, NOXB11, NOXA12, NOXE36, NOXF37 (todos de NOXXON AG) , espiegelmeros de la razón social Eli Lilly & Co., NU172 de la razón social ARCA biopharma Inc., ARCHEMIX, ARC1905, ARC1779, ARC183, ARC184, E10030, NU172, REG2, REG1 (todos de Archemix Corp.) , AS1411, AS1405 (ambos de Antisoma Research Ltd.) , ARNdsi (ARN interferente de doble cadena – siglas en alemán) de Dicerna Pharmaceuticals Inc., aptámero de ARN BEXCORE de BexCore Inc., ELAN de la razón social Elan Corp Plc., o Macugen. Mediante la administración de una ribozima de este tipo en persecución de la observación de una reacción secundaria indeseada en el caso de la administración de un espiegelmero puede eliminarse por lo tanto de forma rápida, eficaz y altamente selectiva del metabolismo la causa de la reacción secundaria indeseada, a saber, de nuevo con un riesgo extremadamente bajo de efectos secundarios de la administración de la L-ribozima. Esto último no sólo se basa en la estructura de la L-ribozima a base de Lnucleótidos, sino adicionalmente en la elevada selectividad de la L-ribozima, a saber, dirigida a la secuencia diana del espiegelmero. Como resultado, se obtiene un antídoto altamente eficaz y altamente selectivo contra un espiegelmero empleado terapéuticamente y se pueden contrarrestar de manera eficaz, rápida y exenta de efectos secundarios reacciones secundarias indeseadas del espiegelmero.

Básicamente, se puede construir una ribozima específica contra cualquier molécula de ARN, ya esté constituida por D- o L-nucleótidos, la cual corte una secuencia diana de la molécula de ARN y disocie así a ésta. Una propiedad esencial de una ribozima es, por lo tanto, la unión específica para la secuencia de la ribozima a la secuencia diana. Sin embargo, esto significa también que para cualquier secuencia diana arbitraria se puede crear una secuencia parcial de una ribozima, debido a que la secuencia parcial de la ribozima, que contiene el lugar de disociación, se hibrida con la secuencia diana. Por lo tanto, en el marco de la invención no es conveniente indicar estructuralmente sólo determinadas secuencias parciales de la ribozima en relación con determinadas secuencias diana. Las secuencias diana indicadas en los Ejemplos y las secuencias parciales de la ribozima son, por lo tanto, únicamente a modo de ejemplo, y el experto en la material puede determinar, sin más, para cualquier secuencia diana predeterminada de un espiegelmero la secuencia parcial de ribozima adecuada, a saber hibridante, y sintetizar la ribozima con medios usuales en la técnica a base de las informaciones con respecto a la secuencia parcial de la ribozima.

Básicamente, la molécula terapéutica puede ser un espiegelmero, o el L-ARN... [Seguir leyendo]

1. Uso de una L-ribozima para la preparación de una composición farmacéutica.

2. Uso según la reivindicación 1, en donde la L-ribozima está capacitada para la escisión de un L-ARN en la región de una secuencia diana del L-ARN.

3. Uso de una L-ribozima que está capacitada para la escisión de un L-ARN en la región de una secuencia diana del L-ARN, para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de reacciones secundarias 10 fisiológicas indeseadas, en virtud de la administración de una molécula terapéutica que contiene el L-ARN.

4. Uso de una L-ribozima para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento o la profilaxis de enfermedades que van acompañadas de una sobre-expresión de al menos un gen endógeno, estando capacitada la L-ribozma para la escisión de una secuencia diana de un D-ARN diana endógeno que codifica el gen.

1.

5. Uso según la reivindicación 3, en donde la molécula terapéutica se compone del L-ARN, en particular es un L-ARN de doble cadena, por ejemplo un espiegelmero.

6. Uso según la reivindicación 3, en donde la molécula terapéutica contiene un aptámero unido covalentemente 20 con el L-ARN o un anticuerpo unido covalentemente con el mismo.

7. Uso según una de las reivindicaciones 3 y 5 a 6, en donde la composición farmacéutica contiene la L-ribozima en al menos la dosis que corresponde a la dosis de la administración del L-ARN, preferiblemente la contiene en una dosis que corresponde a 2 a 100 veces, preferiblemente a 2 a 20 veces la dosis de la administración del L

ARN.

8. Uso según una de las reivindicaciones 3 a 7, en donde la L-ribozima es una ribozima cabeza de martillo.

9. Uso según una de las reivindicaciones 3 a 8, en donde la composición farmacéutica contiene adicionalmente un 30 ácido nucleico, en particular un 5 .

2. mero, que está capacitado para la fusión de un D-ARN o L-ARN de doble cadena en la región de la secuencia diana.

10. Composición farmacéutica que contiene una L-ribozima para el tratamiento de reacciones secundarias fisiológicas indeseadas en virtud de la administración de una molécula terapéutica que contiene el L-ARN.

3.

11. Composición farmacéutica que contiene una L-ribozima para el tratamiento o la profilaxis de enfermedades que van acompañadas de una sobre-expresión de al menos un gen endógeno, en donde la L-ribozima está capacitada para la escisión de una secuencia diana de un D-ARN diana endógeno que codifica el gen.

12. Procedimiento para la preparación de una composición farmacéutica según la reivindicación 10 u 11, en el que se crea y sintetiza una secuencia a partir de L-nucleótidos, la cual está capacitada para la escisión de una secuencia predeterminada a base de L-ribonucleótidos, o de una secuencia predeterminada a base de Lribonucleótidos, y en donde la L-ribozima se adapta en una dosis farmacológicamente eficaz para la administración.

4.

13. Procedimiento según la reivindicación 12, en el que la L-ribozima se mezcla con coadyuvantes y/o sustancias de soporte galénicos.