Composición antigénica de P.gingivalis.

Una composición antigénica que comprende una proteína recombinante que consiste en una secuenciaseleccionada del grupo que consiste en los residuos 1-290 de SEQ.

ID. NO. 3, residuos 65-290 de SEQ ID NO.3 y 192-290 de SEQ ID NO. 3.

Composición antigénica de P. gingivalis Campo de la invención Esta invención proporciona una composición oral y una composición antigénica para utilizar en la supresión de los efectos patógenos de la bacteria intraoral Porphyromonas gingivalis, asociada con una enfermedad periodontal basada en anticuerpos y proteína recombinantes. También proporciona pruebas de diagnóstico para la presencia de P. gingivalis en muestras de placa subgingival y anticuerpos específicos anti-P. gingivalis en suero. Se relaciona con esto y se divulga un procedimiento para preparar Rgp44r-Rgp44 y los derivados de esta, utilizando técnicas de ADN recombinante. También se divulgan las células huésped transformadas con vectores recombinantes capaces de expresar las proteínas recombinantes. Las proteínas recombinantes son útiles como inmunógenos en una formulación de vacuna para inmunización activa y se pueden utilizar para generar antisuero específico de la proteína útil para inmunización pasiva y como reactivos para ensayos de diagnóstico.

Antecedentes de la invención Esta invención se refiere en general a una proteína recombinante de Porphyromonas gingivalis, r-Rgp44Rgp44. La invención también se refiere a las composiciones farmacéuticas y los agentes asociados, basados en estas proteínas recombinantes y derivados para la detección, prevención y tratamiento de una enfermedad periodontal asociada con P. gingivalis.

Las enfermedades periodontales son enfermedades inflamatorias asociadas con bacterias de los tejidos de soporte de los dientes y van desde la forma relativamente suave de la gingivitis, la inflamación reversible, no-específica del tejido gingival a las formas más agresivas de periodontitis que se caracterizan por la destrucción de las estructuras de soporte de los dientes. La periodontitis se asocia con una infección subgingival de un consorcio de bacterias específicas Gram-negativas que conduce a la destrucción del periodoncio y es un importante problema de salud pública. Una bacteria que ha suscitado considerable interés es la P. gingivalis, ya que la recuperación de este microorganismo a partir de lesiones de periodontitis en adultos puede ser hasta el 50% de la flora subgingival que se cultiva anaeróbicamente, mientras que P. gingivalis rara vez se recupera, y luego en pequeñas cantidades, a partir de sitios saludables. Un incremento proporcional en el nivel de P. gingivalis en placa subgingival se ha asociado con un incremento en la gravedad de la periodontitis y la erradicación del microorganismo a partir de la población microbiana subgingival cultivable, se logra por la resolución de la enfermedad. La progresión de las lesiones de periodontitis en primates no-humanos se ha demostrado con la implantación subgingival de P. gingivalis. Estos hallazgos tanto en animales como en humanos sugieren un papel importante de P. gingivalis en el desarrollo de periodontitis en adultos.

Más recientemente ha habido una creciente vinculación de enfermedad periodontal y enfermedad cardiovascular y por lo tanto un vínculo entre la infección por P. gingivalis y enfermedad cardiovascular. Más información respecto a este enlace se puede encontrar en Beck Jd et al Ann Periodontol 3 : 127-141, 1998 y Beck J, et al. J. Periodontol. 67; 1123-37, 1996.

P. gingivalis expresa un rango de proteínas sobre su superficie celular, las cuales son candidatas potenciales para el desarrollo de una vacuna o diagnóstico. Un grupo importante de las proteínas de la superficie celular expresadas por

P. gingivalis es un grupo de proteinasas y adhesinas asociadas. Una proteinasa designada Arg-gingipaína ha sido divulgada previamente por Travis et al. (patente PCT N.º WO 95/07286) . Estos investigadores también informaron de una forma de alta masa molecular de Arg-gingipaína que se codifica por el gen rgp también se divulga en el documento WO 95/07286. La forma de alta masa molecular de Arg-gingipaína consiste en la proteinasa y varias otras proteínas propuestas para ser adhesinas. Los complejos de superficie celular de P. gingivalis que consiste en proteinasas específicas Arg y Lys y las adhesinas también se han divulgado por Reynolds et al. (PCT/AU96/00673) . Ninguna de estas divulgaciones proporciona la enseñanza respecto a la utilidad de una adhesina particular como un recombinante en la protección de la infección por P. gingivalis.

El documento WO98/49192 divulga los fragmentos encontrados en Rgp44 o ambos Rgp44 y Rgp44, que generan una respuesta inmunitaria protectora cuando se conjuga con toxoide diftérico.

Resumen de la invención La invención es como se establece en las reivindicaciones.

En un primer aspecto, la presente invención consiste en una composición antigénica, la composición que comprende una proteína recombinante que consiste en una secuencia seleccionada del grupo que consiste en los residuos 1290 de SEQ. ID. NO. 3, los residuos 65-290 de SEQ. ID. NO. 3 y los residuos 192-290 de SEQ. ID. NO. 3.

En otra realización preferida la composición antigénica además comprende un adyuvante.

En otra realización preferida más, la proteína recombinante es una proteína quimérica o una de fusión. Cuando la proteína recombinante es una proteína quimérica o una de fusión, esta consiste en una secuencia seleccionada del grupo que consiste en los residuos 1-290 de SEQ ID NO: 3, los residuos 65-290 de SEQ ID NO: 3 y los residuos 1290 de SEQ ID NO: 3 unidas a una o más secuencias del polipéptido. Se establece un ejemplo de una proteína quimérica o de fusión de este tipo en SEQ. ID. NO. 4.

En un segundo aspecto, la presente invención consiste en una composición, la composición que comprende al menos un anticuerpo, siendo el anticuerpo obtenido contra la composición antigénica del primer aspecto de la presente invención.

En un tercer aspecto, la presente invención consiste en una célula recombinante procariota o eucariota, la célula recombinante que comprende una secuencia de ADN que consiste en los nucleótidos 1-870 de SEQ. ID. N.º 1, los nucleótidos 193-870 de SEQ.ID. NO. 1 y los nucleótidos 574-870 de SEQ. ID. NO. 1 ligada operativamente a al menos un elemento regulador.

En otro aspecto de la presente invención, se proporciona una composición antigénica de la invención para utilizar en la prevención o la reducción de la incidencia o gravedad de la infección por P. gingivalis en un sujeto.

En otro aspecto, la presente invención proporciona una composición de anticuerpo que comprende al menos un anticuerpo obtenido contra la composición antigénica de la invención, en donde el anticuerpo se une específicamente a un polipéptido, que consiste en residuos 1-290 de SEQ.ID. NO. 3, los residuos 65-290 de SEQ.ID. NO. 3 o los residuos 1-290 de SEQ ID NO: 3, para utilizar en la prevención o la reducción de la incidencia o gravedad de la infección por P. gingivalis en un sujeto.

En otro aspecto adicional, la invención incluye el uso de la composición de anticuerpo de la invención en un procedimiento in vitro de diagnóstico de P. gingivalis.

Dada la vinculación creciente de la enfermedad periodontal con una enfermedad cardiovascular (CVD) y por lo tanto el posible vínculo de la infección por P. gingivalis y CVD, la composición antigénica del primer aspecto de la presente invención también se puede utilizar en un tratamiento profiláctico para reducir la incidencia o gravedad de CVD o como un complemento en el tratamiento de CVD.

Una forma importante de la invención es una vacuna basada en las reivindicadas proteínas Rgp44r-Rgp44 o los péptidos y el adyuvante apropiado administrado por pulverización nasal, vía oral o por inyección, para producir una respuesta inmunitaria específica contra la proteína r-Rgp44Rgp44. Una vacuna también se puede basar en un componente recombinante del segmento del gen de Rgp44 incorporado en un vector apropiado y expresado en un huésped transformado apropiado (por ejemplo, E. coli, Bacillus subtilis, Saccharomyces cerevisiae, células COS, células CHO y células HeLa) , que contiene el vector. La proteína componente, péptidos, y oligopéptidos con epítopos inmunógenos a partir de la proteína Rgp44, se pueden utilizar como inmunógenos en diversas formulaciones de vacunas en la prevención de enfermedades periodontales. Adicionalmente, de acuerdo con la presente invención, las proteínas Rgp44 y péptidos relacionados o quimeras producidos, se pueden utilizar para generar antisueros de P. gingivalis útiles para la inmunización pasiva contra la enfermedad periodontal y las infecciones causadas por P. gingivalis.

Utilizando técnicas de ADN recombinante, el segmento del gen codificante de Rgp44, o fragmentos del gen que codifican uno o más péptidos... [Seguir leyendo]

1. Una composición antigénica que comprende una proteína recombinante que consiste en una secuencia seleccionada del grupo que consiste en los residuos 1-290 de SEQ. ID. NO. 3, residuo.

6. 290 de SEQ ID NO. 5 3 .

19. 290 de SEQ ID NO. 3.

2. Una composición antigénica que comprende una proteína recombinante de fusión o quimérica que consiste en una secuencia seleccionada del grupo que consiste en los residuos 1-290 de SEQ. ID. NO. 3, residuo.

6. 290 de SEQ ID NO. 3 y residuo.

19. 290 de SEQ ID NO. 3, unida a una o más secuencias del polipéptido.

3. Una composición antigénica como se reivindica en la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que la composición antigénica comprende además un adyuvante.

4. Una composición antigénica como se reivindica en la reivindicación 2, en la que la proteína quimérica o de 15 fusión tiene la secuencia establecida en SEQ. ID. NO. 4.

5. Una composición de anticuerpo, composición que comprende al menos un anticuerpo obtenido contra la composición antigénica como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

6. Una célula eucariota o procariota, que comprende un polinucleótido recombinante que consiste en los nucleótidos 1-870 de SEQ. ID NO. 1, nucleótido.

19. 870 de SEQ. ID. NO. 1 y nucleótido.

57. 870 de SEQ. ID. NO. 1 ligado operativamente a al menos un elemento regulador.

7. Una composición antigénica como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para utilizar en 25 la prevención o reducción de la incidencia o gravedad de infección por P. gingivalis en un sujeto.

8. Una composición de anticuerpo, composición que comprende al menos un anticuerpo obtenido contra la composición antigénica como se reivindica en la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que el anticuerpo se une específicamente a un polipéptido que consiste en los residuos 1-290 de SEQ ID NO: 3, residuo.

6. 290

de SEQ. ID. NO. 3 y residuo.

19. 290 de SEQ ID NO: 3 para utilizar en la prevención o reducción de la incidencia o gravedad de infección por P. gingivalis en un sujeto.

9. Uso de una composición de anticuerpo en un procedimiento in vitro de diagnóstico de P. gingivalis, en el que la composición de anticuerpo comprende al menos un anticuerpo obtenido contra la composición antigénica como se reivindica en la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que el anticuerpo se une específicamente a un polipéptido que consiste en los residuos 1-290 de SEQ. ID. NO. 3, residuo.

6. 290 de SEQ ID NO. 3 y residuo.

19. 290 de SEQ ID NO: 3.