Biomarcadores para la enfermedad del hígado graso y métodos que utilizan los mismos.

Un método para diagnosticar si un sujeto tiene, o está predispuesto a,

esteatohepatitis, que comprende:

analizar una muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel de glicocolato en la muestra, y

comparar el nivel de glicocolato en la muestra con niveles de referencia de glicocolato positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis con el fin de diagnosticar si el sujeto tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis.

Biomarcadores para la enfermedad del hígado graso y métodos que utilizan los mismos Campo La invención se refiere en general a biomarcadores para la enfermedad del hígado graso y a los métodos basados en los mismos biomarcadores.

Antecedentes

El cambio graso en el hígado es el resultado de la acumulación excesiva de lípidos en los hepatocitos. El hígado graso es la acumulación de triglicéridos y otras grasas en las células del hígado. La enfermedad del hígado graso puede variar de hígado graso solo (hígado graso simple, esteatosis) a hígado graso asociado con inflamación hepática (esteatohepatitis) . Aunque tener grasa en el hígado no es normal, ésta, por sí sola, probablemente causa un pequeño perjuicio o un daño permanente. Se cree generalmente que la esteatosis es una afección benigna, con raro progreso a enfermedad hepática crónica. En contraste, la esteatohepatitis puede progresar a fibrosis y cirrosis hepática, puede estar asociada con el carcinoma hepatocelular y puede dar como resultado morbilidad y mortalidad relacionadas con el hígado.

La esteatosis se puede producir por el uso de alcohol (hígado graso relacionado con alcohol) o en ausencia de alcohol (enfermedad de hígado graso no alcohólico, EHGNA) . La esteatohepatitis puede estar relacionada con el daño hepático inducido por el alcohol o puede no estar relacionada con el alcohol. Si está presente esteatohepatitis, pero no hay un historial de consumo de alcohol, la afección se denomina esteatohepatitis no alcohólica (EHNA) .

En ausencia de alcohol, los principales factores de riesgo para el hígado graso simple (EHGNA) y EHNA son la obesidad, la diabetes y niveles altos de triglicéridos. En EHNA, la grasa se acumula en el hígado y por último produce tejido cicatrizal. Este tipo de hepatitis parece estar asociado con diabetes, desnutrición proteica, obesidad, enfermedad de las arterias coronarias y tratamiento de medicación con corticosteroides. La fibrosis o cirrosis en el hígado están presentes en 15-50% de los pacientes con EHNA. Aproximadamente 30% de los pacientes con fibrosis desarrolla cirrosis a los 10 años.

La enfermedad del hígado graso es actualmente la causa más común para las pruebas de función hepática elevada en los Estados Unidos. Ahora es probablemente la principal causa de elevaciones leves de las transaminasas. La esteatosis afecta aproximadamente a 25-35% de la población general. La EHGNA se encuentra en más de 80% de los pacientes que son obesos. La EHNA afecta del 2 al 5 por ciento de los norteamericanos y se ha detectado en 1, 2-9% de los pacientes sometidos a biopsia hepática rutinaria. Más de 50% de los pacientes sometidos a cirugía bariátrica tienen EHNA. La enfermedad afecta a hombres y mujeres; los estudios tempranos indican que >70% de casos se presentaron en mujeres, pero estudios recientes indican que 50% de los pacientes son mujeres. El hígado graso se produce en todos los grupos de edad. En los Estados Unidos la EHNA es la enfermedad hepática más común entre los adolescentes y es la tercera causa más común de enfermedad hepática crónica en los adultos (después de la hepatitis C y el alcohol) .

Tanto EHNA y EHGNA son cada vez más comunes, posiblemente debido al mayor número de Estadounidenses con obesidad. En los últimos 10 años, la tasa de obesidad se ha duplicado en adultos y se ha triplicado en niños. La obesidad también contribuye a la diabetes y al elevado colesterol en sangre, lo que puede complicar aún más la salud de alguien con EHNA. La diabetes y el colesterol elevado en sangre son también cada vez más comunes entre los estadounidenses.

La EHNA es por lo general una enfermedad silenciosa con pocos o ningún síntoma. Los pacientes generalmente se sienten bien en las primeras etapas y sólo comienzan a tener síntomas, como fatiga, pérdida de peso y debilidad, una vez que la enfermedad está más avanzada o se desarrolla cirrosis. La progresión de EHNA puede tardar años, incluso décadas. El proceso se puede detener y, en algunos casos, revertir por sí solo sin terapia específica. O la EHNA puede empeorar lentamente, causando cicatrices o "fibrosis" que aparecen y se acumulan en el hígado. A medida que empeora la fibrosis, se desarrolla cirrosis; el hígado llega a estar gravemente cicatrizado, endurecido, y a ser incapaz de funcionar con normalidad. No todas las personas con EHNA desarrollan cirrosis, pero una vez que está presente la grave cicatrización o la cirrosis, pocos tratamientos pueden detener el progreso. Una persona con cirrosis experimenta retención de líquidos, pérdida de masa muscular, hemorragia en los intestinos, e insuficiencia hepática. El trasplante de hígado es el único tratamiento para la cirrosis avanzada con insuficiencia hepática y el trasplante se realiza cada vez más en personas con EHNA. La EHNA se clasifica como una de las principales causas de cirrosis en los Estados Unidos, detrás de la hepatitis C y la hepatopatía alcohólica.

La EHNA es por lo general la primera sospecha en una persona que se encuentra que tiene elevaciones en las pruebas hepáticas que están incluidas en los paneles de pruebas sanguíneas rutinarias, tales como alanina aminotransferasa (ALT) o aspartato aminotransferasa (AST) . Cuando la evaluación adicional no muestra una razón aparente para la enfermedad hepática (tal como medicaciones, hepatitis viral o uso excesivo de alcohol) y cuando las radiografías o estudios por imágenes del hígado graso muestran grasa, se sospecha de la EHNA. El único método de probar un diagnóstico de EHNA y separarlo de hígado graso simple es una biopsia de hígado. Una biopsia de hígado requiere la inserción de una aguja a través de la piel y la separación de una pequeña porción del hígado. Si el tejido muestra grasa sin inflamación y lesión se diagnostica hígado graso simple o EHGNA. La EHNA se diagnostica cuando el examen microscópico del tejido muestra grasa junto con inflamación y lesión de las células hepáticas. Se requiere una biopsia para determinar si se ha desarrollado tejido cicatricial en el hígado. Actualmente, ninguna de las pruebas o análisis de sangre puede proporcionar de manera fiable esta información. Por lo tanto existe la necesidad de un método diagnóstico menos invasivo (es decir, un método que no requiriera biopsia) .

Compendio En el sentido más amplio, la presente solicitud se define como sigue:

1. Un método para diagnosticar si un sujeto tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis, que comprende:

analizar una muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel de glicocolato en la muestra, y

comparar el nivel de glicocolato en la muestra con niveles de glicocolato de referencia positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis con el fin de diagnosticar si el sujeto tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis.

2. El método del apartado 1, que comprende adicionalmente analizar la muestra biológica para determinar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores adicionales para la esteatosis en la muestra, en donde los uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan de las tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3, y

comparar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores adicionales en la muestra con respecto a niveles de referencia positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis de los uno o más biomarcadores adicionales con el fin de diagnosticar si el sujeto tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis.

3. El método del apartado 2, en donde el método es un método para diagnosticar si un sujeto tiene esteatohepatitis y en donde los uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan de los biomarcadores de las tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3 que tienen valores de p de menos de 0, 05 y/o los biomarcadores de las tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3 que tienen valores de q de menos de 0, 10.

4. El método del apartado 2, en donde el método es un método para diagnosticar si un sujeto tiene esteatohepatitis y en donde la muestra analizada es de un sujeto masculino y los biomarcadores se seleccionan de la Tabla 12.

5. El método del apartado 2, en donde el método es un método para diagnosticar si un sujeto tiene esteatohepatitis y en donde la muestra analizada es de un sujeto femenino y los biomarcadores se seleccionan de la Tabla 13.

6. El método de uno cualquiera de los apartados anteriores, en donde el método es un método para diagnosticar si un sujeto tiene esteatohepatitis y en donde la muestra se analiza utilizando una o más técnicas seleccionadas del grupo que consiste en espectrometría de masas, reacciones enzimáticas o... [Seguir leyendo]

1. Un método para diagnosticar si un sujeto tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis, que comprende:

analizar una muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel de glicocolato en la muestra, y

comparar el nivel de glicocolato en la muestra con niveles de referencia de glicocolato positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis con el fin de diagnosticar si el sujeto tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis.

2. El método de la reivindicación 1, que comprende adicionalmente analizar la muestra biológica para determinar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores adicionales para la esteatohepatitis en la muestra, en donde los uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3, y

comparar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores adicionales en la muestra con niveles de referencia de los uno o más biomarcadores adicionales positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis con el fin de diagnosticar si el sujeto tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis.

3. El método de la reivindicación 2, en donde el método es un método para diagnosticar si un sujeto tiene esteatohepatitis y en donde los uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan entre los biomarcadores de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3 que tienen valores p de menos de 0, 05 y/o los biomarcadores de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3 que tienen valores q de menos de 0, 10.

4. El método de la reivindicación 2, en donde el método es un método para diagnosticar si un sujeto tiene esteatohepatitis y en donde la muestra analizada es de un sujeto masculino y los biomarcadores se seleccionan de la Tabla 12.

5. El método de la reivindicación 2, en donde el método es un método para diagnosticar si un sujeto tiene esteatohepatitis y en donde la muestra analizada es de un sujeto femenino y los biomarcadores se seleccionan de la Tabla 13.

6. El método de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el método es un método para diagnosticar si un sujeto tiene esteatohepatitis y en donde la muestra se analiza utilizando una o más técnicas seleccionadas del grupo que consiste de espectrometría de masas, reacciones enzimáticas o bioquímicas, química clínica, ELISA, y unión de anticuerpos.

7. Un método de acuerdo con la reivindicación 2, en donde el método es un método para determinar si un sujeto está predispuesto a desarrollar esteatohepatitis y

el nivel o los niveles de glicocolato y los uno o más biomarcadores adicionales en la muestra se comparan con niveles de referencia de glicocolato y los uno o más biomarcadores adicionales positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis con el fin de determinar si el sujeto está predispuesto a desarrollar esteatohepatitis.

8. Un método para verificar el progreso/regresión de la esteatohepatitis en un sujeto que comprende:

analizar una primera muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales para la esteatohepatitis en la muestra, en donde los uno o más biomarcadores se seleccionan de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3 y la primera muestra se obtiene del sujeto en un primer momento;

analizar una segunda muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales, en donde la segunda muestra se obtiene del sujeto en un segundo momento; y

comparar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en la primera muestra con el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en la segunda muestra con el fin de verificar el progreso/regresión de la esteatohepatitis en el sujeto.

9. Un método para evaluar la eficacia de una composición para el tratamiento de la esteatohepatitis que comprende:

analizar, a partir de un sujeto que tiene esteatohepatitis y tratado actualmente o previamente con una composición, una muestra biológica para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales para la esteatohepatitis seleccionados de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3; y

comparar el o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en la muestra con (a) niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en una muestra biológica tomada previamente del sujeto, en donde la muestra biológica tomada previamente se obtuvo del sujeto antes de ser tratado con la composición, (b) niveles de referencia de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales positivos para esteatohepatitis, y/o (c) niveles de referencia de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales negativos para esteatohepatitis.

10. Un método para evaluar la eficacia de una composición en el tratamiento de la esteatohepatitis, que comprende:

analizar una primera muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales para la esteatohepatitis seleccionados de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3, la primera muestra obtenida del sujeto en un primer momento;

analizar una segunda muestra biológica del sujeto al que se ha administrado la composición para determinar el nivel

o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales, la segunda muestra obtenida del sujeto en un segundo momento después de la administración de la composición; y

comparar el nivel o los niveles de glicocolato y, opcionalmente, los uno o más biomarcadores adicionales en la primera muestra con el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en la segunda muestra con el fin de evaluar la eficacia de la composición para el tratamiento de la esteatohepatitis.

11. Un método para escrutar una composición para determinar su actividad en la modulación del glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales de la esteatohepatitis, que comprende:

poner en contacto una o más células con una composición;

analizar al menos una porción de las una o más células o una muestra biológica asociada a las células para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales de la esteatohepatitis seleccionados de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9 , 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3; y

comparar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales con niveles patrón predeterminados para el glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales para determinar si la composición modula el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales.

12. El uso in vitro de un biomarcador, o una pluralidad de biomarcadores, en el diagnóstico de la esteatohepatitis, en donde dicho biomarcador o pluralidad de biomarcadores comprenden glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales seleccionados de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3.

13. Un método para distinguir la enfermedad del hígado graso no alcohólico (EHGNA) de la esteatohepatitis no alcohólica (EHNA) en un sujeto que tiene una enfermedad o trastorno del hígado, que comprende:

analizar una muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales para EHGNA y/o EHNA en la muestra, en donde los uno o más biomarcadores se seleccionan de las Tablas 1, 2, 3, 4b, 5b, 6B, 8, 9, 10, 11, 12, 13, y las Figuras 1, 2, 3

comparar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en la muestra con niveles de referencia positivos para EHGNA que la distinguen de EHNA y/o niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA con el fin de determinar si el sujeto tiene EHNA.

14. El método de la reivindicación 1, que comprende adicionalmente analizar la muestra biológica del sujeto para determinar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores adicionales para la esteatohepatitis en la muestra, en donde los uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste de glicoquenodesoxicolato, taurocolato, butirilcarnitina, gamma-glutamiltirosina, quinurenina, glutamilvalina, gamma-glutamilfenilalanina, gammaglutamil leucina, glutamato, carnitina, propionilcarnitina, y combinaciones de los mismos, y

comparar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores adicionales en la muestra con niveles de referencia de los uno o más biomarcadores adicionales positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis con el fin de diagnosticar si el sujeto tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis.

15. El método de la reivindicación 14, en donde la muestra biológica se analiza utilizando una o más técnicas seleccionadas del grupo que consiste de espectrometría de masas, reacciones enzimáticas o bioquímicas, química clínica, ELISA, y unión de anticuerpos.

16. El método de la reivindicación 15, en donde la muestra biológica es una muestra de plasma o una muestra de orina.

17. El método de la reivindicación 14, en donde los uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en glicoquenodesoxicolato, taurocolato, y combinaciones de los mismos.