Aplicaciones terapéuticas de extractos de semillas de Fraxinus excelsior.

Extracto de semillas de Fraxinus excelsior que comprende GI5 o nuzhenida para su uso en un método terapéutico de control del peso corporal o reducción de la grasa corporal.

Aplicaciones terapéuticas de extractos de semillas de Fraxinus excelsior.

Antecedentes de la invención La diabetes mellitus tipo 2 (DM-2) es una enfermedad global común caracterizada por deficiencia de insulina e insensibilidad a la insulina. La DM-2 se considera una enfermedad grave que crea un problema sanitario asociado con una alta morbimortalidad, y es la sexta causa principal de muerte en los Estados Unidos [Miniño et al, 2007, National Vital Statistical Report, 55]. Se espera que el número de pacientes diabéticos puede aumentar hasta 300 millones en todo el mundo para el año 2025 [King et al, 1998, Diabetes Care, 21, 1414-31]. En los Estados unidos, el 7 por ciento de la población (20, 8 millones de niños y adultos) se ven afectados por diabetes [French, 2007, Inside, 12, 46-7] y se estima que costó en los Estados Unidos 132 mil millones de dólares en 2002 en gastos médicos y pérdida de productividad [Hogan et al, 2003, Diabetes Care, 26, 917-32]. Los métodos de tratamiento para DM-2 incluyen el uso de insulina, análogos de insulina o insulina modificada, potenciar la liberación de insulina y la acción de insulina, inhibir la producción de glucosa hepática e inhibir la captación de glucosa [Moller, 2001, Nature, 414, 821-27]. Además de estos agentes terapéuticos, también se usan en todo el mundo medicinas tradicionales para el tratamiento de DM-2. Se han usado más de 1.200 especies de organismos de manera etnofarmacológica o experimental para tratar síntomas de DM-2 [Marles y Farnsworth, 1996, Protocol J. Botanical Med., 1, 85-137].

Generalmente se reconoce que la prevalencia en rápido aumento de la obesidad representa un grave problema para la sanidad pública en los Estados Unidos. Según datos de la National Health and Nutrition Examination Survey (NHANES, encuesta nacional de examen de salud y nutrición) de 1999-2000, casi dos tercios (el 64, 5%) de la población adulta de los Estados Unidos tienen sobrepeso en comparación con el 55, 9% según se detalla por la investigación NHANES III realizada entre 1988 y 1994. La prevalencia de la obesidad también ha aumentado drásticamente desde el 22, 9% hasta el 30, 5% a lo largo del mismo periodo. El creciente número de personas obesas corren probablemente un alto riesgo de desarrollar una variedad de enfermedades relacionadas con la obesidad que incluyen diabetes [Flegal et al, 2002, JAMA. 288, 1723-1727 y Kuczmarski et al 1994, JAMA. 272, 205-221].

Fraxinus excelsior L., una planta de la familia de las oleáceas, se denomina comúnmente “fresno común” o “fresno europeo” en los países de Europa y Asia templada [Gilman y Watson, 1993, Fact Sheet ST- 264, Noviembre]. Esta planta también está ampliamente distribuida en todo Tafilalet, la región sudoriental de Marruecos, y allí se conoce como “l’ssane l’ousfour”. La región Tafilalet se ha considerado entre las regiones de Marruecos en las que el conocimiento sobre fitoterapia está más desarrollado [Eddouks et al, 2002, J. Etnopharmacol. 82, 97- 103]. Recientes estudios han indicado que F. excelsior (FE) presenta actividades antibacterianas y antioxidantes. Un extracto en metanol de FE mostró una potente actividad antioxidante con CR50 de 1, 35 x 10-2 en el ensayo cualitativo de a, a-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH) . Los extractos en n-hexano y diclorometano de FE también fueron activos contra ocho especies de bacterias patógenas Gram-positivas y Gram-negativas sometidas a prueba incluyendo Staphylococcus aureus resistente a meticilina con valores de concentración inhibitoria mínima (CIM) dentro de 1, 25 x 10-1 mg/mL [Middleton et al, 2005, Indian J. Pharma. Res., 2, 81-6]. Se notificó el efecto hipotensivo de FE sobre ratas tanto normotensas como espontáneamente hipertensas. La administración oral diaria del extracto acuoso de semillas de FE produjo una disminución significativa en la tensión arterial sistólica y potenció significativamente la micción en ambos tipos de ratas [Eddouks et al, 2005, J. Etnopharmacol., 99, 49-54]. Los extractos acuosos de semillas de FE presentaron una potente actividad hipoglicémica y anti-hiperglicémica en ratas normales e inducidas por estreptozotocina (STZ) sin afectar a las concentraciones de insulina en plasma basales [Maghrani et al, 2004, J. Etnopharmacol., 91, 309-16]. El efecto similar a florizina de la inhibición de la reabsorción de la glucosa renal puede ser uno de los mecanismos para el efecto hipoglicémico de FE [Eddouks et al, 2004, J. Etnopharmacol., 94, 149-54].

Se informó que FE contiene principalmente cumarinas, secoiridoides y feniletanoides. [Kostova y Iossifova, 2007, Fitoterapia 78, 85-106]. Los secoiridoides encontrados en FE se derivan de oleósido. Estos tipos de secoiridoides sólo existen en plantas de la familia de las oleáceas [Egan et al, 2004, Biochem. Sys. Ecol., 32, 1069-71].

Explicación de la invención La presente invención se refiere a un extracto de semillas de Fraxinus excelsior que comprende GI5 o nuzhenida, y al uso del extracto en la preparación de un medicamento, para su uso en un método terapéutico según las reivindicaciones adjuntas.

También se dan a conocer en el presente documento secoiridoides novedosos que se han aislado del extracto de semillas de Fraxinus excelsior (nombre común, fresno) . Los dos compuestos se identificaron como (1) éster metílico del ácido (2S, 3E, 4S) 3-etiliden-2-[ (6-O-1-D-glucopiranosil-1-D-glucopiranosil) oxi]-3, 4-dihidro-5- (metoxicarbonil) 2Hpiran-4-acético, denominado excélsido A, que tiene la fórmula química C22H32O16 (figura 1-1) ; y (2) éster etílico del ácido (2S, 3E, 4S) 3-etiliden-2-[ (6-O-1-D-glucopiranosil-1-D-glucopiranosil) oxi]-3, 4-dihidro-5- (metoxicarbonil) 2- (4hidroxifenil) 2H-piran-4-acético, denominado excélsido B, que tiene la fórmula C30H40O17 (figura 1-2) . Ambos compuestos son secoiridoides de tipo oleósido caracterizados por una funcionalidad 8, 9-olefínica exocíclica.

También se da a conocer en el presente documento un procedimiento de obtención de una composición derivada de FE aislada. La composición puede obtenerse mediante un único procedimiento de extracción y aislamiento. Se trituran las semillas para dar gránulos con un tamaño de partícula en un intervalo de desde 0, 1 mm hasta 30 mm para aumentar el área superficial para que entre en contacto con el disolvente y para aumentar la eficacia de extracción. La temperatura de extracción puede estar en un intervalo de desde 20ºC hasta 100ºC, o en un intervalo de desde 50ºC hasta 70ºC. La razón de material vegetal con respecto a la mezcla disolvente usada en el procedimiento de extracción varía desde 1:1 hasta 1:10 en una base de gramos con respecto a mililitros. En una descripción del procedimiento, la razón es de desde 1:3 hasta 1:8. El periodo de incubación durante el cual el material vegetal está en contacto con la mezcla disolvente es un periodo de tiempo de desde aproximadamente 2 h hasta aproximadamente 24 h. Los disolventes de extracción pueden ser agua, una mezcla de agua-alcohol (desde el 1% hasta el 99% de alcohol en agua) y alcohol. Los alcoholes preferidos son etanol (EtOH) y metanol (MeOH) . Tras incubarse el material vegetal y el disolvente, se separa el disolvente del material vegetal residual y se concentra la composición de extracción hasta que la composición de extracción tiene un componente sólido que generalmente contiene aproximadamente el 1% - 35% de secoiridoides de F. excelsior. Los secoiridoides incluyen dos nuevos glucósidos de tipo oleósido, excélsido A y excélsido B, secoiridoides diméricos, nuzhenida (3) (figura 1-3) , GI 3 (4) (figura 1-4) y GI 5 (5) (figura 1-5) , así como ligstrósido, éster dimetílico de oleósido (6) (figura 1-6) y 11-éster metílico de oleósido. Otros componentes incluyen compuestos fenólicos, salidrósido, cumarinas y flavonoides. Tras completarse la formación del extracto, se aíslan los secoiridoides. Los secoiridoides pueden aislarse a partir del extracto de FE mediante un procedimiento cromatográfico.

Los secoiridoides se aíslan a partir de un extracto de FE en polvo seco. Se disuelve el polvo en un alcohol y se extraen los secoiridoides mediante alcohol del polvo. Entonces se evapora el alcohol y se carga el residuo restante que incluye secoiridoides en una columna de cromatografía cargada con resina C-18 de fase inversa. Se eluyen varias fracciones que contienen diferentes compuestos con una serie de sistema de agua y el 10% de MeOH/el 90% de agua y MeOH. Se comparan las fracciones mediante análisis por cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) y se combinan los eluatos que tienen patrones de HPLC similares. Se separan las fracciones combinadas sobre cromatografía en columna de gel de sílice de fase normal y se eluyen... [Seguir leyendo]

1. Extracto de semillas de Fraxinus excelsior que comprende GI5 o nuzhenida para su uso en un método terapéutico de control del peso corporal o reducción de la grasa corporal. 5

2. El extracto para su uso según la reivindicación 1, en el que el tratamiento es en un ser humano.

3. El extracto para su uso según la reivindicación 1, en el que el extracto comprende nuzhenida.

4. Uso de un extracto de semillas de Fraxinus excelsior que comprende GI5 o nuzhenida en la preparación de un medicamento para su uso en un método terapéutico de control del peso corporal o reducción de la grasa corporal.

5. El uso según la reivindicación 4, en el que el tratamiento es en un ser humano. 15

6. El uso según la reivindicación 4, en el que el extracto comprende nuzhenida.